Штамм гриба microsporum equinum f-0275, используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей

. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении культуральной массы гриба родас биологической активностью не менее 150106 макроконидий путем ступенчатого отбора, по признаку спорообразования наиболее быстро растущих колоний с активным накоплением макроконидий. Штамм гриба-0275 КазНИВИ 18, депонированный в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт,используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей.(72) Умитжанов Мынбай Боранбаева Райхан Султанмуратовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) ШТАММ ГРИБА-0275, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ МИКРОСПОРИИ ЛОШАДЕЙ(57) Изобретение относится к ветеринарной микологии и может быть использовано для профилактики микроспории лошадей, кошек, собак Изобретение относится к ветеринарной микологии и может быть использовано для профилактики микроспории лошадей, кошек, собак и пушных зверей,обусловленной грибом. Известен штамм гриба рода ,используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории собак Патент Российской Федерации 2084240, А 61 39/00,С 12 1/14, 1997. Недостатком указанного гриба является то, что он обладает слабой иммуногенностью и изготовленная из него вакцина недостаточно эффективна. Задачей изобретения является получение штамма гриба с высокой антигенной активностью, а также пригодной для изготовления эффективной иммуногенной инактивированной вакцины против микроспории лошадей. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении культуральной массы гриба родас биологической активностью не менее 150106 макроконидий путем ступенчатого отбора, по признаку спорообразования наиболее быстро растущих колоний с активным накоплением макроконидий. Штамм гриба-0275 КазНИВИ 18, используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей. Указанный штамм гриба-0275 КазНИВИ 18 депонирован в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ. Идентификацию штамма гриба проводят по основным морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, согласно определителю патогенных, токсигенных и вредных для человека грибов-0275 КазНИВИ 18 выделен из поверхности кожного покрова больной лошади, принадлежащего крестьянскому хозяйству Сайма-сай Талгарского района Алматинской области, путем направленного ступенчатого отбора. После очищения полученного патматериала (культуру гриба) засевали в питательную среду (суслоагар) и ставили в термостат на 16 сут при температуре 28 С. Далее из одной колонии выращенного гриба делали повторный посев в течение 7 раз. Методом разведения выделяли клоны названного гриба выросших в чашках Петри на суслоагаре, которые при дальнейшем посеве давали наибольший рост. Накопление биомассы определяли в камере Горяева по общепринятой методике. Таким образом, в результате проведенных исследований был выделен полевой изолят гриба из рода,который был более предпочтителен для дальнейшей работы. Вакцинный штамм-0275 КазНИВИ 18 получен путем направленного ступенчатого отбора, по признаку спорообразования 2 быстро растущих колоний с активным накоплением макроконидий. Полученный штамм отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью,высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Штамм характеризуется следующими признаками. Морфологические признаки. Штамм гриба-0275 КазНИВИ 18 обладает морфологическими признаками,характерными для возбудителя микроспории лошадей. Окрашенные по Граму культуры гриба грамположительные. Культуральные свойства. Культуры гриба быстрорастущие, рост колонии наблюдается на 5-ые сутки белые, сероватые или бежевые, пушистые,бархатисто-мучнистые, распростертые, растущий край паутинистый. на суслоагаре 16-суточная культура представляется более рыхло-пушистые,серовато-беловатые, иногда желтовато-розоватые, с концентрическими кругами различной густоты воздушного мицелия, без отпрысков в субстрат. Размеры шириной 0,6-3,5 мкм, септированный,изогнуты,иногда гифы ракетообразные,микроконидии немногочисленные,овальные,грушевидные, размером 3,5-7,53-3,7 мкм, сидящие или прикрепленные короткими ножками,встречаются не постоянно, располагаются на конидиеносцах различного размера макроконидии многочисленные,веретеновидной формы с вытянутыми концами, с толстостенной гладкой или зубчатой оболочкой, с 6-12 перегородками,размером 60-11513-20 мкм, длиной от 60 до 115 мкм, шириной от 18 до 27 мкм,располагающихся иногда на равном расстоянии одна от другой по ходу мицелия. Артроспоры гриба единичные или отсутствуют. В зрелых культурах встречаются округлые интеркалярные хламидоспоры диаметром до 12 мкм, которые располагаются на равном расстоянии одна от другой по ходу мицелия. Биохимические свойства. Штамм гриба-0275 КазНИВИ 18 состоит из углеводов, постоянно усваивает сахарозу,глюкозу, мальтозу, манит фактором роста являются тиамин,никотиновая,пантотеновая,парабензойные кислоты. Стимулятором роста железо, цинк, марганец, медь, молибден, кальций,кобальт, никель, бор и др. Сероводород и индол не образует. Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организме подопытных кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 140- 1 1280. Маркерные признаки. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Пептоны, аспарагин, глутоминовая кислота,сусло агар, аминокислоты, углеводы сахароза,глюкоза, мальтоза, маннит факторы роста (тиамин,никотиновая, пантотеновая, парабензойная кислоты и др.) стимуляторы роста (железо, цинк, марганец,медь, молибден, кальций, кобальт, никель, бор и др.). Биохимические - на сусло агаре при 7,2-7,4 до концентрации 150 - 200 млн/см 3 макроконидии многочисленные, овальные размером 60-115 13-20 мкм микроконидии округлые или грушевидные, иногда продолговатые, размер 3,57,53-3,7 мкм, встречается не постоянно. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 11280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0275 КазНИВИ 18 патогенен для лошадей, кошек, собак, пушных зверей и кроликов,мышевидных грызунов. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении названного штамма в дозе 20106 макроконидии создает напряженный иммунитет у привитых лошадей, кошек, собак и пушных зверей (кроликов) к последующему заражению микроспории продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0275 КазНИВИ 18 безвреден для лошадей, кошек, собак и пушных зверей (кроликов) в дозе 20106 макроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0275 КазНИВИ 18 слабореактогенен для лошадей, кошек, собак и пушных зверей(кроликов) при внутримышечном введении, так как вакцина приготовлена из убитых(инактивированных) клеток дерматофитов. У привитых животных спустя 15-25 дней на месте инъекции развивается небольшой специфически локализованный поверхностный очажок, который самопроизвольно излечивается в течение 2-3 недель. Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на суслоагаре 150-200 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0275 КазНИВИ 18 отличается от эпизоотического изолята слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0275 КазНИВИ 18 стабильно сохраняются на протяжении года (при 23-х кратном пассаже в течение года) при пассаже культуры на питательных средах (срок наблюдения). Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока или 10 сахарозы и 1,5 желатина штамм гриба-0275 КазНИВИ 18 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев, в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев, при минус 20 С ниже в течение 2 лет. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой с 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28 С в течение 5 часов, при 4 С - 3 сут. Пример. Для приготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей используют 14-16 суточные культуры штаммов, выращенные в колбах Тартаковского на суслоагаре ( 7,2-7,4) при температуре 28 С. Выращенную гребницу культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды специальными скребками и помещают в стерильные банки. Грибную массу гомогенизируют в миксерах,а затем с помощью стерильной воды или физиологическим раствором, полученный гомогенат ресуспензируют до концентрации макроконидии 20106/см 3. Ресуспензирование проводят в присутствии антибиотика (пенициллин или стрептомицин) из расчета 100 ЕД/см 3 гомогената. К полученной суспензии грибной массы добавляют равное количество стабилизатора ( 7,2-7,4), содержащего в воде 10 сахарозы и 1,5 желатина или жидкое обезжиренное молоко и все это тщательно перемешивают и разливают в стерильные флаконы или ампулы. Вакцину применяют с профилактической и лечебной целями внутримышечно, двух или трехкратно в область бедра, сначала в одну конечность, а через 10-14 суток - в другую. Для каждого животного используют отдельную стерильную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением, место инъекции дезинфицируют 70 этиловым спиртом. Приготовленная таким образом гомогенат из штамма гриба-0275 КазНИВИ 18 позволяет надежно профилактировать заболеваемость поголовья лошадей от микроспории в течение года. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм гриба-0275,депонирован в лаборатории генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт под номером 18, используемый для изготовления инактивированной вакцины против микроспории лошадей.