Способ восстановления утраченной активности и специфичности бруцеллезного антигена для постановки кольцевой реакции с молоком

(51) 61 39/10 (2006.01) 01 33/569 (2006.) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ помощью 1-ного раствора твина-20, а осадок ресуспензируют, протравливают и окрашивают гемотоксилином. Предлагаемый способ позволяет восстановить утраченную диагностическую активность и специфичность единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК. Способ восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК осуществляется путем центрифугирования бактериальной массы бруцелл при 15000 об/мин в течении 5 минут, с последующим удалением надосадочной жидкости и добавлением в объеме 15 1 раствора твина-20,с последующим выдерживанием при помешивании в течение 30 минут, центрифугированием бактериальной массы бруцелл при 15000 об/мин в течение 5 минут и удалением надосадочной жидкости, концентрат антигена разводят 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором,а определение диагностической активности целевого продукта проводят путем титрации в РА и РСК.(72) Иванов Николай Петрович Саримбекова Сауле Нургалиевна(54) СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ УТРАЧЕННОЙ АКТИВНОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ПОСТАНОВКИ КОЛЬЦЕВОЙ РЕАКЦИИ С МОЛОКОМ(57) Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК. Аналогов в доступной литературе не найдено. Задачей изобретения является восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК. Технический результат достигается тем, что осуществляют отмывание микробных клеток с Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК при выявлении бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Аналогов в доступной литературе не найдено. Задачей изобретения является восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК. Технический результат заключается в восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК. Технический результат достигается тем, что осуществляют отмывание микробных клеток с помощью 1-ного раствора твина-20. Предлагаемый способ позволяет восстановить утраченную диагностическую активность и специфичность единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК. Сущность способа. Способ восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК осуществляется путем центрифугирования бактериальной массы бруцелл при 15000 об/мин в течении 5 минут, с последующим удалением надосадочной жидкости и добавлением в объеме 15 1 раствора твина-20,с последующим выдерживанием при помешивании в течении 30 минут, центрифугированием бактериальной массы бруцелл при 15000 об/мин в течение 5 минут с последующим удалением надосадочной жидкости,концентрат антигена разводят 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором, а определение активности и концентрации целевого продукта проводят путем титрации в РА и РСК. Пример восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК Бактериальную массы бруцелл выделяют из единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК при 15000 об/мин в течение 5 минут. Надосадочную жидкость разбавляют 1-ным раствором твина-20 в соотношении 15. Далее раствор выдерживают при комнатной температуре при помешивании в течении 30 минут. Затем бактериальную массу бруцелл центрифугируют при 15000 об/мин в течении 5 минут с последующим удалением надосадочной жидкости. Концентрат антигена разводят 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором с рН 7,0-7,2. Полученную суспензию проверяют на чистоту и стерильность путем микроскопии мазков,окрашенных по Грамму и Козловскому, и высева на МПБ, МПА, печеночно-мартеновский агар и бульон с переваром Хоттингера, 1 111 под вазелиновым маслом и среду Сабуро по две пробирки и два флакона с 50 мл бульона на каждый образец. За высевами наблюдают в течение 10 дней. 2 Активность антигена в РА стандартизируют по национальной стандартной агглютинирующей сыворотке антибруцелла абортус, содержащей в 1 мл 1000 международных единицантител. Содержимое ампулы(сухую стандартную сыворотку) растворяют дистиллированной водой, а затем разводят 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором 1150, 1200, 12540,1300 и 1350. Полученные разведения сыворотки хранят в стерильных флаконах. Концентрат антигена разводят 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором 13 13,5 14 и т.д. до 116. Каждое разведение антигена испытывают со всеми пятью разведениями стандартной сыворотки при одинаковой дозировке ингредиентов, равной 0,5 мл. При этом после добавления антигена к сыворотке в каждой пробирке будет по 1 мл смеси,соответствующей конечным разведениям сыворотки 1300, 1400, 1500, 1600, 1700. Одновременно антиген испытывают с негативной сывороткой в разведении 125, 150 и 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором. Пробирки встряхивают, выдерживают в термостате при температуре 37 С в течение 23 ч и затем при комнатной температуре 1 ч. Реакцию агглютинации учитывают в соответствии с наставлением по постановке и учету РА при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных. При учете определяют то разведение антигена,которое с конечным разведением стандартной сыворотки 1500 дает 50 агглютинации . С негативной сывороткой и физиологическим раствором реакции должны быть отрицательными. В зависимости от результатов титрации концентрированную суспензию разводят стерильным 0,5-ным фенолизированным раствором и тщательно смешивают. Отбирают пробу и ставят РА с разведениями антигена 14,5 15 15,5. Антиген в разведении 15 с конечным разведением стандартной агглютинирующей сыворотки 1500 должен дать 50 агглютинации. Активность антигена в РСК определяют титрованием по квадратной схеме с стандартной бруцеллезной агглютинирующей сывороткой в разведениях 1100, 1125, 1150, 1175, 1200. Одновременно антиген испытывают с негативной сывороткой в разведениях 15 и 110. Антиген(стандартизированную а РА взвесь бруцелл) разводят 150, 1100, 1150, 1200, 1300, 1400. Комплемент и гемолизин берут в рабочих титрах,эритроциты - 2,5 от осадка. Сыворотку инактивируют 30 минут при температуре 58-60 С. Предельным титром антигена считают то его разведение, которое дает полную задержку гемолиза с наибольшим разведением стандартной бруцеллезной сыворотки. За рабочий титр антигена в РСК принимают двойную дозу его предельного титра. Антиген выпускают, если в РА его разведение 15 с конечным разведением стандартной бруцеллезной сыворотки 1500 дает 50 агглютинациив РСК - дает полную задержку гемолиза со стандартной бруцеллезной сывороткой в ее предельном титре при разведении антигена не ниже чем 1150. Приготовленную серию антигена стерильно разливают по 20 мл в 20-милилитровые флаконы из нейтрального стекла, закрывают стерильными резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками. Сравнительные данные по существующему и предлагаемому способам изготовления единого бруцеллезного антигена приведены в таблице 1. Таблица 1 Сравнительные данные по восстановлению утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК Титр Титр в РА Титр в РСК По данным таблицы 1 видно, что предлагаемая технология восстановления утраченной диагностической активности и специфичности единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК, требует малых затрат и способствует полному восстановлению первоначальной активности и специфичности. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ восстановления утраченной активности и специфичности бруцеллезного антигена для постановки кольцевой реакции с молоком, После 15 1150 включающий центрифугирование бактериальной массы бруцелл при 15000 об/мин в течении 5 минут,удаление надосадочной жидкости, добавление к осадку 1 раствора твина-20 в соотношении 15, с последующим выдерживанием при помешивании в течение 30 минут,центрифугированием бактериальной массы бруцелл при 15000 об/мин в течение 5 минут с последующим удалением надосадочной жидкости, концентрат антигена разводят 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором,а определение активности и концентрации целевого продукта проводят путем титрации в РА и РСК.