Способ культивирования микобактерий на жидких питательных средах

(51) 12 1/02 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ роста микобактерий на среде и увеличение ее срока годности. Культивирование микобактерий,высеянных этим способом способствует более интенсивному росту микобактериальной массы по сравнению с контролем. Такой способ культивирования является более технологичным и производительным, а также безопасным для персонала. Способ культивирования микобактерий на жидких питательных средах, включающий внесение микобактериальной массы непосредственно в жидкую питательную среду. Микобактерий туберкулеза предварительно суспензируют в 50 см 3 стерильного физиологического раствора до концентрации 1 млрд. КОЕ в 1 мг/см 3 (по оптическому стандарту мутности) микобактериальную взвесь вносят непосредственно в жидкую питательную среду по 1-5 см 3 на биобутыль.(72) Тургенбаев Кайрат Алтынбекович Плазун Александр Анатольевич Борсынбаева Асия Маденовна(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ НА ЖИДКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для культивирования микобактерий. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в повышении скорости Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для культивирования микобактерий. Известен способ культивирования микобактерий на жидких питательных средах путем переноса культуры с плотной питательной среды, например Левенштейна-Йенсена на жидкую, например Сотона через картофельную среду Павловского и пересева полученной на промежуточной среде бактериальной пленки на жидкую среду (Васильев В.В. Микобактериозы и микозы легких. Медицина и физкультура., София,1971.- с. 138-140). Однако этот способ требует приготовления промежуточной среды Павловского и затрат дополнительного времени, необходимого для получения на жидкой части этой среды пленки бактериальной массы. Известен способ культивирования микобактерий на жидких питательных средах путем внесение бактериальной массы непосредственно на жидкую питательную среду или на поплавки, кружки корковой пробки толщиной до 1 мм, плавающих на поверхности жидкой питательной среды таким образом, чтобы край бактериальной массы касался жидкости. (Сосницкий А.И. Адаптация культур. к питательным средам. Бюллетень ВНИИЭВ. - 1987. - 64, с.43-46.). Однако этот способ требует предварительного наращивания для получения кусочков достаточного количества бактериальной массы на твердой питательной среде, требует большой точности при посеве бактериальных культур на поверхность жидкой среды так, чтобы они не утонули и в дальнейшем, полного покоя отсеянных биобутылей с жидкой питательной средой, что не всегда удается на практике и не пригоден для пересева культур. Задачей предлагаемого способа культивирования микобактерий является проведение непосредственного посева микобактерий в виде взвеси на жидкую питательную среду Сотона. Это достигается тем, что для посева микобактериальную массу суспензируют в стерильном физиологическом растворе в концентрации 10 мг/см 3 и вносят по 1,0-5,0 см 3 непосредственно в биобутыль с жидкой питательной средой, например Сотона. При термостатировании при температуре 37-38 размножаясь на 10 - 20 сут. покрывали поверхность жидкой среды и образовывали равномерный слой. Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод, что предлагаемый способ культивирования микобактерий на жидких питательных средах отличается от известных тем,что из культуры микобактерий, выращенной на жидкой питательной среде, готовится суспензия в стерильном физиологическом растворе в концентрации 1 мг/см 3, которую вносят не посредственно в жидкую питательную среду,например, Сотона. Способ осуществляется следующим образом. Пример 1. На жидкой питательной среде,например Сотона,выращивают культуру микобактерий бычьего вида. В стерильных условиях собирают пленку микобактерий, выращенную на жидкой питательной среде Сотона, отжимали в четырехслойной фильтровальной бумаге и взвешивали на аналитических весах, бактериальную массу растирали в ступке. Для приготовления суспензии в измельченную бактериальную массу добавляли 50 см 3 стерильного физиологического раствора до концентрации 1 млрд. КОЕ в 1 см 3 (по оптическому стандарту мутности). Затем стерильным шприцом набирали суспензию, микобактерий взвесью вносили по 1,0 см 3 в 5 биобутылей. Пример 2. На жидкую питательную среду Сотона для культивирования как и в примере 1. Стерильным шприцом набирали суспензию микобактерий и вносили по 3,0 см 3 в 5 бутылей. Пример 3. На жидкую питательную среду Сотона для культивирования как и в примере 1. Стерильным шприцом набирали суспензию,микобактерий в взвесью вносили по 5,0 см 3 в 5 бутылей. При посеве с взвесью микобактерии падали на дно биобутилей и среда мутнела. Затем посевы были помещены в термостат при температуре 37- 38. В термостате биобутыли со взвесью становились прозрачными. Благоприятные аэробные условия и контакт с питательной средой способствуют росту и формированию пленки культуры микобактерий уже на 10-20 сутки. В контрольных биобутылях,посеянных общепринятым способом путем внесения на поверхность жидкой питательной среды адаптированной микобактериальной пленки, рост микобактерий был замедленным. По истечении срока культивирования (60 суток) все биобутыли с выросшей культурой микобактерий стерилизовали в автоклаве при 1,5 атм. 30 минут. Содержимое каждых биобутылей отдельно фильтровали через фильтровальную бумагу. Собранные образцы микобактериальной массы отжимали четырехслойной фильтровальной бумагой, высушивали до постоянного веса и взвешивали на аналитических весах. Полученные результаты опытов представлены в таблице. Таблица Культивирование микобактерий бычьего вида, штамм 8 (ВИЭВ) на жидкой питательной среде Сотона в течение 60 сут Способ культивирования микобактерий Выход бактериальной массы (г) Способ культивирования микобактерий Посев микобактерий взвесью Выход бактериальной массы (г) Посев микобактериальной пленки общепринятым способом Из данных, представленным в таблице, видно,что, посев микобактерий взвесью способствует более интенсивному росту и накоплению микобактериальной массы в 1,8 раза больше, чем при посеве микобактерий общепринятым способом. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ нанесение пленки бактериальной массы на предметы, плавающие на поверхности жидкости,отличающийся тем, что, микобактерий туберкулеза предварительно суспензируют в 50 см 3 стерильного физиологического раствора до концентрации 1 млрд. КОЕ в 1 мг/см 3, микобактериальную взвесь вносят непосредственно в жидкую питательную среду по 15 см 3 на биобутыль. Способ культивирования микобактерий на жидких питательных средах,включающий