Способ исследования мышечной ткани рыб на наличие паразитов

(51) 01 33/12 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ бытовых) условиях способа исследования мышечной ткани рыб на наличие ларвальных стадий паразитов, расширяющего арсенал диагностических методов и средств. Способ исследования объектов на наличие тканевых паразитов заключается в том, что образцы мышечной ткани рыб толщиной от 2 до 10 мм помещают в 5-10-ный раствор силиката натрия(конторского клея, разбавленного водой в 5-10 раз) на срок от 0,5-2 ч. По мере того, как образцы станут мягкими, эластичными и полупрозрачными (через 0,5-2 ч.), раздавливают каждый кусочек ткани между двумя предметными стеклами (что не потребует значительных физических усилий) и просматривают визуально или под бинокулярной лупой при увеличении от 818 до 8756 раз. Тонкие, хорошо просветлившиеся кусочки можно просматривать визуально, без компрессии (особенно если паразиты достаточно крупные и хорошо видимые простым глазом).(72) Дюсембаев Сергазы Турлыбекович Ермухамбетова Жазира Тарасовская Наталья Евгеньевна(56) Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. Справочник. М. Колос, 1983, с.203(54) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ РЫБ НА НАЛИЧИЕ ПАРАЗИТОВ(57) Изобретение относится к области биологии,ихтиопатологии и ветеринарно-санитарной экспертизы, в частности, к способам исследования мышечной ткани рыб на наличие ларвальных(личиночных) форм паразитов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в разработке простого по исполнению,экономически целесообразного,доступного в любых (в том числе полевых и Изобретение относится к области биологии,ихтиопатологии и ветеринарно-санитарной экспертизы, в частности, к способам исследования мышечной ткани рыб на наличие паразитов. Широко используется методика переваривания мышц рыбы в искусственном желудочном соке Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды Справочник. - М. Колос, 1983. - 208 с, ил. с. 176,которая позволяет подсчитать точное число личинок в образце, изучить их морфологию и точно определить видовой статус. Недостатки использования искусственного желудочного сока 1) дорогостоящие реактивы(особенно фермент пепсин) 2) трудоемкость,необходимость приготовления, выдержки при определенной температуре, что особенно затруднительно в полевых условиях 3) возможность переваривания или частичной деструкции самих личинок. Известен способ расщепления мышечных волокон рыб тупым концом скальпеля таким способом можно найти инцистированные метацеркарии и молодых нематод филометроидесов Васильков Г.В. Гельминтозы рыб. - М. Колос,1983.-208 с с. 33. Недостатки данного способа 1) трудоемкость и необходимость определенных навыков 2) возможность повреждения личинок 3) трудность определения паразитов до вида без дополнительных действий по их выделению или просветлению. Известен способ исследования мышечной ткани и тканей паренхиматозных органов на наличие паразитов, взятый за прототип - раздавливание с помощью компрессорного стекла, который описан во многих источниках Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды Справочник. - М. Колос, 1983.- 208 с, ил. с. 130 - исследование мяса на трихинеллез, с. 174 - исследование рыбы на описторхоз. Недостатками способа являются 1) необходимость специального оборудования(компрессорных стекол) 2) недостаточная выявляемость гельминтов при низкой интенсивности инвазии в небольших по объему образцах ткани, обычно используемых для компрессорного исследования 3) опасность инвазии исследователя при работе с нативным материалом,особенно в полевых условиях 4) невозможность использования для компрессии фиксированного в формалине материала. Целью изобретения является разработка простого по исполнению, дешевого, доступного в любых условиях, надежного способа исследования тканей рыб, могущего заменить приборы или малодоступные и дорогостоящие реактивы. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в разработке простого по исполнению,экономически целесообразного,доступного в любых (в том числе полевых и бытовых) условиях способа исследования мышечной ткани рыб на наличие паразитов,расширяющего арсенал диагностических методов и средств. Способ исследования объектов на наличие тканевых паразитов заключается в том, что образцы мышечной ткани рыб толщиной от 2 до 10 мм помещают в 5-10-ный раствор силиката натрия(конторского клея, разбавленного водой в 5-10 раз) на срок от 0,5-2 ч до 2-3 суток. По мере того, как образцы станут мягкими,эластичными и полупрозрачными (через 0,5-2 ч.), раздавливают каждый кусочек ткани между двумя предметными стеклами (что не потребует значительных физических усилий) и просматривают визуально или под бинокулярной лупой при увеличении от 818 до 8756 раз. Тонкие,хорошо просветлившиеся кусочки можно просматривать визуально, без компрессии (особенно если паразиты достаточно крупные и хорошо видимые простым глазом). Пример 1 - мышечную ткань рыбы разрезают на слои толщиной 2 мм и образцы помещают в 5-ый раствор силиката и выдерживают в течение 0,5 часа. Затем раздавливают каждый кусочек ткани между двумя предметными стеклами и просматривают визуально или под бинокулярной лупой при увеличении от 818 до 8756 раз. Пример 2 - мышечную ткань рыбы разрезают на слои толщиной 10 мм и образцы помещают в 10 ый раствор силиката и выдерживают в течение 2 часов. Затем раздавливают каждый кусочек ткани между двумя предметными стеклами и просматривают визуально или под бинокулярной лупой при увеличении от 818 до 8756 раз. Пример 3 - мышечную ткань рыбы разрезают на слои толщиной 5 мм и образцы помещают в 7 -ый раствор силиката и выдерживают в течение 1 часа. Затем раздавливают каждый кусочек ткани между двумя предметными стеклами и просматривают визуально или под бинокулярной лупой при увеличении от 818 до 8756 раз. Результаты испытаний силиката натрия различной концентрации и при различной выдержке показаны в нижеследующей таблице. Как видно из таблицы, условия примера 2(толщина слоя ткани до 10 мм при увеличении выдержки и концентрации раствора силиката натрия) увеличивает вероятность выявляемости личинок, особенно при низкой интенсивности инвазии. Наиболее оптимальными являются условия примера 2, когда при толщине слой исследуемой мышечной ткани 5 мм достигается достаточный объем исследуемой ткани, снижается время экспозиции и сама концентрация раствора, образец быстро становится прозрачным и пригоден даже для визуального исследования. Таблица Результаты испытаний силиката натрия различной концентрации и при различной выдержке Пример Концентрация силиката натрия 1 2 1. 5 Толщина Время Состояние слоя экспози ткани ткани ции 3 2 мм 5 6 7 Прозрачная, мягкая Хорошо просматривается 3 насквозь визуально и личинки легко описторха в раздавливается между 2 образце предметными стеклами. 2. 0,00 10 мм 2 ч. Прозрачная, мягкая Хорошо просматривается 8 визуально и личинок раздавливается между 2 описторха в предметными стеклами образце без значительных физических усилий до тонкого слоя. 3 7 5 мм 1 ч. Прозрачная, мягкая Хорошо просматривается 4 визуально и легко личинки раздавливается между описторха в предметными стеклами до образце тонкого слоя. Механизмы действия предлагаемых веществ доступное, безвредное, дешевое вещество, широко 1. Благодаря гидролизу силиката натрия (как использующееся в быту, и оно также вполне соли сильного основания и слабой кислоты) по доступно в выездных условиях (например, в аниону образуется щелочная среда, которая омыляет сельской местности). жиры и фосфолипиды, что способствует быстрому 3. Достигается дезинфекция и дезинвазия лизису всех тканей, начиная с клеточных мембран. нативного сырого материала, благодаря чему он При этом хорошо размягчаются не только сырые становится безопасным для работающих, особенно в мышцы, но и ткани фиксированных в спирте или условиях недостаточной гигиены. формалине объектов. Наружные оболочки 4. Хорошо просветляется, размягчается, а затем инцистированных паразитов, благодаря высокому лизируется не только свежий материал, но также и содержанию дубленых белков, не подвергаются предварительно фиксированный в формалине или деструкции. спирте (который непригоден для обычного 2. Освободившаяся при гидролизе кремниевая компрессорного исследования). кислота образует эфиры с углеводами, что не только 5. Если материал уже начал подвергаться порче и усиливает деструкцию тканей, но и придает ей мацерации,имеет неприятный запах,то прозрачность. дурнопахнущие продукты разложения белков 3.Щелочная среда денатурирует белки - не быстро связываются и обеззараживаются силикатом только тканей исследуемых мышц, но и натрия (благодаря щелочной среде и образующимся микроорганизмов и паразитов, за счет чего эфирам кремниевой кислоты). обеспечивается дезинфекция и дезинвазия исследуемого нативного материала. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Преимущества предложенного способа исследования тканей 1. Способ исследования мышечной ткани рыб на 1. Благодаря постепенному лизису тканей наличие паразитов, включающий подготовку проб и силикатом появляется возможность использования компрессирование, отличающийся тем, что для просветления, облегчения компрессии или образцы мышц разрезают на слои толщиной переваривания исследуемых мышечных тканей - в 2-10 мм. выдерживают в растворе силиката натрия зависимости от времени экспозиции. Паразиты не концентрацией 5-10 в течение 0.5-2 часов, затем перевариваются как благодаря дубленым белкам, компрессуют между двумя предметными стеклами и так и укрепляющему действию соединений кремния просматривают визуально или под бинокулярной на наружные оболочки. лупой. 2. В качестве источника силиката натрия 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что могут используется силикатный конторский клей (50- исследоваться как свежие, так и фиксированные ный раствор силиката натрия),который образцы мышечной ткани. разбавляется водой до нужной концентрации. Это Верстка Косалиева Б. Корректор Мадеева П.А. 3