Способ получения гипериммунной сыворотки против трихофитии верблюдов

(51) 61 35/16 (2010.01) 61 31/10 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ агаровом сусле в течение 21 сут., получение от них крови и отделение сыворотки, что для иммунизации используют инактивированную вакцину из штамма-0080, иммунизацию кроликов проводят трехкратно,при этом корпускулярную инактивированную микроконидийальную взвесь культуры в концентрации 1 млрд в 1,0 см 3 смешивают в соотношении 11 с полным адъювантом Фрейнда и вводят по 0,1 см 3 в шести точках спины, по 0,2 см 3 в подушечки передних и задних лапок кролику и по 0,5 см 3 внутримышечно в области бедра, затем вторую и третью внутривенную инъекцию антигена проводят без адъюванта в объеме 1,0 см 3 в соотношении 11 через 21-28 сут соответственно,после чего каждые 10 сут берут кровь из ушной вены и определяют титр антител в реакции длительного связывания комплемента, при титре 180 производят обескровливание кроликов,полученную кровь собирают в стерильные колбы и выдерживают в термостате при 37 С в течение час,образовавшиеся сгусток крови отделяют от стенок колбы стерильной стеклянной палочкой, после отстаивания при 4 С в течение 15-20 ч,отделившуюся сывороткуотсасывают стерильной пипеткой и для освобождения от эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15-20 минут и к полученной сыворотке добавляют 3-ной раствор борной кислоты и хранят в замороженном состоянии.(72) Умитжанов Мынбай Токеев Шукирбай Орынбаевич Бижанов Болат Рахметович Боранбаева Райхан Султанмуратовна Шалабаев Болат Абуович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ ВЕРБЛЮДОВ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микологии, в частности к получению иммунных сывороток и может найти широкое применение в ветеринарной практике для лечения и профилактики, а также для использования в серологических реакциях при трихофитии верблюдов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в повышении активности и специфической сыворотки. Способ получения гипериммунной сыворотки против трихофитии верблюдов, включающий иммунизацию животных-доноров корпускулярным антигеном из штамма гриба выращенном на твердом Изобретение относится к области ветеринарной микологии, в частности к получению иммунных сывороток и может найти широкое применение в ветеринарной практике для лечения и профилактики, а также для использования в серологических реакциях при трихофитии верблюдов. Известен способ получения гипериммунной сыворотки против трихофитии верблюдов,включающий иммунизацию кроликов корпускулярным антигеном,из живых микроконидий, полученный путем смыва с грибницы, выращенным на твердом агровом сусле в течение 20-25 сут, получение от них крови и отделение сыворотки Маноян М.Г. Получение антисывороток к возбудителям трихофитии животных // Бюллетень ВНИИЭВ.- Москва, 1989.Вып. 72.- с.69-72. Недостатком известного способа является низкая активность полученных сывороток и малое количество полученного конечного продукта. Задачей предполагаемого изобретения является получение высокоактивной иммунной сыворотки. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в повышении активности и специфической сыворотки. Способ получения гипериммунной сыворотки против трихофитии верблюдов, включающий иммунизацию животных-доноров корпускулярным антигеном из штамма гриба выращенном на твердом агаровом сусле в течение 21 сут., получение от них крови и отделение сыворотки, что для иммунизации используют инактивированную вакцину из штамма-0080, иммунизацию кроликов проводят трехкратно,при этом корпускулярную инактивированную микроконидийальную взвесь культуры в 3 концентрации 1 млрд в 1,0 см смешивают в соотношении 11 с полным адъювантом Фрейнда и 3 3 вводят по 0,1 см в шести точках спины, по 0,2 см в подушечки передних и задних лапок кролику и по 3 0,5 см внутримышечно в области бедра, затем вторую и третью внутривенную инъекцию антигена 3 проводят без адъюванта в объеме 1,0 см в соотношении 11 через 21-28 сут соответственно,после чего каждые 10 сут берут кровь из ушной вены и определяют титр антител в реакции длительного связывания комплемента, при титре 180 производят обескровливание кроликов,полученную кровь собирают в стерильные колбы и выдерживают в термостате при 37 С в течение час,образовавшиеся сгусток крови отделяют от стенок колбы стерильной стеклянной палочкой, после отстаивания при 4 С в течение 15-20 ч,отделившуюся сыворотку отсасывают стерильной пипеткой и для освобождения от эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15-20 минут и к полученной сыворотке добавляют 3-ной раствор борной кислоты и хранят в замороженном состоянии. Способ получения гипериммунной сыворотки против трихофитии верблюдов осуществляются следующим образом. Предварительно готовят инактивированную вакцину против трихофитии верблюдов, для чего используют штамм гриба 0080. Пример. Для иммунизации кроликов используют антиген из местного производственного вакцинного штамма гриба-0080. В качестве доноров используют пять кроликов. В процессе иммунизации, у кроликов через каждый 10 сут берут кровь из ушной вены и определяют титр антител в РДСК. Иммунизацию кроликов осуществляют 3-х кратно последующей схеме перед первой инъекцией корпускулярной инактивированной микроконидийальную взвесь культуры в 3 концентрации 1 млрд в 1,0 см смешивают в соотношении 11 с полным адъювантом Фрейнда и 3 3 вводили по 0,1 см в шести точках спины, по 0,2 см в подушечки передних и задних лапок кроликов и 3 по 0,5 см внутримышечно в области бедра. Через 10 сут после первого цикла титр антител составляет 110, а через 20 сут наблюдения титры антител повысились, и составляли 120. Вторую внутривенную инъекцию антигена 3 проводили без адъюванта в объеме 1,0 см в той же концентрации через 20 сут. Через 10 сут от второй внутривенной инъекции титры антител составляют 140. Третью внутривенную инъекцию антигена 3 проводят без адъюванта в объеме 1,0 см в той же концентрации через 28 сут. Через 10 сут третьей внутривенной инъекции титры антител достигли максимума, и составляют 180. Динамика роста уровня специфических антител при иммунизации кроликов инактивированной вакциной против трихофитии верблюдов приведена в таблице 1. Как видно из таблицы 1, на 10 день сывороточная активность кроликов составляет 110. В процессе проведения цикла иммунизации инактивированной вакциной против трихофитии верблюдов,активность сыворотки активно поднимается и к 40 дню стабильно держится на высоком уровне (180). Трехкратное кровопускание после первого,второго и третьего цикла внутривенной инъекции резко (в 2-3 раза) повышает активность полученной сыворотки. Таким образом, предложенный способ получения иммунной сыворотки позволяет получить активный и специфичный препарат против трихофитии верблюдов. Таблица 1 Оценка активности полученной гипериммунной сыворотки против трихофитии верблюдов Наименование ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения гипериммунной сыворотки против трихофитии верблюдов, включающий иммунизацию животных-доноров корпускулярным антигеном из штамма гриба, выращенном на твердом агаровом сусле в течение 21 сут, получение от них крови и отделение сыворотки,отличающийся тем, что для иммунизации используют инактивированную вакцину из штамма-0080,иммунизацию кроликов проводят трехкратно,при этом корпускулярную инактивированную микроконидийальную взвесь культуры в концентрации 1 млрд. в 1,0 см 3 смешивают в соотношении 11 с полным адъювантом Фрейнда и вводят по 0,1 см 3 в шести точках спины, по 0,2 см 3 в подушечки передних и задних лапок кролику и по 0,5 см 3 внутримышечно в области бедра, затем вторую и третью внутривенную инъекцию антигена проводят без адъюванта в объеме 1,0 см 3 в соотношении 11 через 21-28 сут соответственно,после чего каждые 10 сут берут кровь из ушной вены и определяют титр антител в реакции длительного связывания комплемента, при титре 180 производят обескровливание кроликов,полученную кровь собирают в стерильные колбы и выдерживают в термостате при 4 С в течение 1520 ч,отделившуюся сыворотку отсасывают стерильной пипеткой и для освобождения от эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15-20 минут и к полученной сыворотке добавляют 3-ный раствор борной кислоты и хранят в замороженном состоянии.