Способ получения инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов

(51) 61 39/00 (2010.01) 61 39/116 (2010.01) 12 1/14 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ использовано для активной профилактики и лечения трихофитии верблюдов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов. Способ получения инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов, включающий накопление биомассы культур трихофитийных спор и е инактивирование, в качестве антигена используют штамм-0080,который дезинтегрируют в УЗДН-1 при частоте 22 кГц и мощности 100 Вт/см 2 ультразвуковых волн до полного разрушения споровых элементов гриба,затем доводят концентрацию белка до 1,5 мг/см 3 и получают целевой продукт.(72) Токеев Шукирбай Орынбаевич Умитжанов Мынбай Бижанов Болат Рахметович Боранбаева Райхан Султанмуратовна Арысбекова Алтынай Танибергеновна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ ВЕРБЛЮДОВ(57) Изобретение относится к области микологии, а именно к способу получения противомикологической вакцины и может быть 23842 Изобретение относится к области микологии, а именно к способу получения противомикологической вакцины и может быть использовано для активной профилактики и лечения трихофитии верблюдов. Известен способ получения инактивированной вакцины против трихофитии животных,включающий накопление биомассы культуры трихофитийных спор и е инактивирование Патент Российской Федерации 02084241, кл. А 61 39/00,1997. Недостатком способа получения вакцины против трихофитии животных является низкая эффективность. Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики и лечения трихофитии верблюдов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов. Способ получения инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов, включающий накопление биомассы культур трихофитийных спор и е инактивирование, в качестве антигена используют штамм-0080,который дезинтегрируют в УЗДН-1 при частоте 22 кГц и мощности 100 Вт/см 2 ультразвуковых волн до полного разрушения споровых элементов гриба,затем доводят концентрацию белка до 1,5 мг/см 3 и получают целевой продукт. Изобретение осуществляется следующим образом. Штамм гриба, используемый для получения инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО КазНИВИ и обладает следующими свойствами. Штамм гриба-0080. Культуральные свойства. Культуры гриба медленно растущие, рост колоний заметен в течение 24 ч после посева, на 4-5-й день начиналось образование типичных канделябров и рогов северного оленя, через 7 дней гриб разрастается по всему объему среды. Первичные культуры развивается очень медленно, к 30-му дню формируется сероватые, плоские, плотносросшиеся с субстратом и глубокими отпрысками в питательную среду колонии диаметром от 7 до 10 мм. Форма колонии ровная,бархатистая концентрическими кругами. Размер колонии достигает от 25 до 40 мм. Цвет колонии бежевый,возвышенный, бугристый, складчатый. Обратная сторона колонии окрашена в коричневый цвет. Обладает полиморфизмом. В питательную среду выделяет коричневый пигмент. Гифы разной ширины (от 1,6 до 9 мм), которая преобладают широкий неравномерно утолщенной ветвящийся мицелий. Часто можно обнаружит ветвление конечных гиф в виде рогов северного оленя. При созревании культур образуются цепочки артроспор(6-18 мкм), а затем обильные хламидоспоры (6-17 мкм). Очищенные культуры гриба на питательных средах увеличивают энергию роста и способствуют спорообразованию. Степень развития мицелия приходится на 18-21 день. Размеры макроконидии от 16 до 50 мкм, а микроконидии - значительно варьируют в размерах 2,5-5,0 х 3,0-10,0 мкм. Биохимические свойства. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13 не испытывают потребности в витаминах для роста и спорообразования. Никатиновая, фолиевая кислоты,тиамин, придоксин, рибофлавин, цианкобаламин не стимулируют развитие культур данного штамма. Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме верблюжат, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 14 0 - 11280. Маркерные признаки. Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 200 - 250 млн/см 3. Макроконидии отсутствуют или единичные, удлиненно-овальные. В очищенных культурах с увеличением микроконидии образуются в небольшом количестве макроконидии (размером от 16 до 50 мкм). Микроконидии отсутствуют или единичные, значительно варьируют в размерах 2,55,03,0-10,0 мкм. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13 патогенен для верблюдов, человека и лабораторных животных,обладают цитопатогенным действием на культуры клеток. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 20106 микроконидии создают напряженный иммунитет у привитых верблюжат, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13 безвреден для верблюжат, кроликов и морских свинок в дозе 6 2010 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13 слабореактогенен для верблюдов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение 2-х недель. Споророобразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 200-250 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0080 КазНИВИ 13 2 23842 отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0080 КазНИВИ 13 стабильно сохраняются на протяжении 3-4 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0080 КазНИВИ 13 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев,при 20 С ниже в течение 2 года. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия с рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28-30 С в течении 5 час, при 4 С 3 сут. Пример 1. Для получения инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов берут 18 сут культуру штамма-0080 и выращивают в матровых колбах на сусло-агаре при рН 7,2-7,4 и температуре 26-28 С в течение 18 дней. Выращенную грибницу культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и помещают в стерильные банки. На собранный вакцинный штамм из расчета 11 добавляем по 300,0 см 3 стерильный физиологический раствор. Грибную массу штамма гомогенизируют в миксерах, затем подвергают разрушению ультразвуком на УЗДН-1 частотой волн 22 кГц, интенсивностью 100 Вт/см 2 в течение 1 часа. После разрушения гомогенная масса помещается в холодильник при температуре 4-8 С в течение 1 сут. Затем берется проба для микроскопического анализа на наличие не разрушенных спор с последующим посевом на питательные среды. После этого берутся 3 пробы для бактериологического и микологического контроля в дозе 1,0 см 3 . Далее полученную гомогенную массу центрифугируют при 6000 об/мин в течение 20 мин. Верхний слой гомогената необходимо для изготовления моновакцины. С помощью фотоэлектроколориметром определяют концентрацию полученного белка в 1,0 см 3 полученного супернатанта. После к грибной суспензии антигена на солевом растворедобавляют гель гидрата окиси алюминия (8-12) по сухому веществу. Посуточную смесь ставят в термостат до 1 сутки и время от времени перемешивают 3-5 раз. После этого к вакцине добавляют глицерин (98 химически чистый) из расчета 8-12 от объема гомогената. Все тщательно перемешивают, разливают по 2,0 см 3 в стерильные ампулы объемом 2,0-5,0 см 3 или по 10, 50, 100, 200 и 500 см 3 во флаконы объемом от 10, 50, 100, 200 и 500 см 3, затем запаивают ампулы в стерильных условиях с помощью газовой горелки, а флаконы закрывают резиновыми пробками, завальцовывают алюминиевыми калпочками и этикетируют. Пример 2. Для изучения иммуногенной активности инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов берут одну группу животных, в которых находятся пять голов кроликов. Опытной группе вводят внутримышечно по 1,0 см 3 ресуспензированной инактивированной вакцины в область крупа дважды с интервалом 14 дней. Спустя 25-28 дней после второй иммунизации,все 5 голов животных опытной группы, а также по 5 голов из контрольной группы(не иммунизированных животных) экспериментально заражают гомологичной вирулентной эпизоотической культурой рода. В течение 30-35 дней за опытными и контрольными группами животных ведут наблюдение, а клинический осмотр животных осуществляют через каждые 3-5 дней. От животных с клиникой трихофитии отбирают патологический материал, и проводят высевы на питательные среды и уточняют визуально полученный диагноз заболевания данных животных трихофитией. При обнаружении у животных трихофитии, а также подтверждения диагноза, животных подвергают лечению двух или трехкратному введению профилактической дозы жидкой инактивированной вакцины в тех же интервалах, что и профилактические дозы данного биологического препарата. Результаты проведенной работы учитываются спустя 25-30 дней после второй иммунизации заболевших животных терапевтической дозой инактивированной вакциной против трихофитии верблюдов. Результаты иммуногенной активности(профилактической и терапевтической дозы) инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов отражены в таблицах 1 и 2. Из таблицы 1 и 2 видно, что инактивированная вакцина против трихофитии верблюдов при ее проверке на иммуногенную активность проявила высокую профилактическую и терапевтическую эффективность, в том числе и при лечении заболевших животных с явной клинической формой трихофитии верблюдов. Использование предлагаемого способа получения инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по профилактике и терапии от возбудителя трихофитии верблюдов в Республике Казахстан. Профилактическая эффективность инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов Количество Результаты опытов (количество заболевших животных при голов экспериментальном заражении гомологичной вирулентной эпизоотической культурой гриба рода) Не заболело Заболело Диагноз подтвердился Диагноз не подтвердился Проверка терапевтической эффективности инактивированной вакцины против трихофитии верблюдовгрупп животных ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения инактивированной вакцины против трихофитии верблюдов, включающий накопление биомассы культуры трихофитийных спор и ее инактивирование, отличающийся тем,что в качестве антигена используют штамм Результаты исследования выздоровело не выздоровело 5-0080,который дезинтегрируют в УЗДН-1 при частоте 22 кГц и мощности 100 Вт/см 2 ультразвуковых волн до полного разрушения споровых элементов гриба,затем доводят концентрацию белка до 1,5 мг/см 3 и получают целевой продукт.