Штамм бактерий Brucella abortus B-0477, используемый для приготовления диагностических препаратов

(51) 61 39/10 (2010.01) 12 1/20 (2010.01) 12 7/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к области ветеринарии,в частности к ветеринарной микробиологии и иммунологии и может быть использовано для диагностики бруцеллеза животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в сохранении стабильной-формы штаммапри длительном культивировании,с хорошими ростовыми свойствами бактериального газона. Штамм бактерийВ-0477158,депонирован в Лаборатории Национальной коллекции депонированных штаммов микроорганизмов Государственного учреждения Национальный центр мониторинга, референции,лабораторной диагностики и методологии в ветеринарии Комитета государственной инспекции в агропромышленном комплексе Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан,используемый для получения диагностических препаратов.(72) Калыкова Гульжан Кентаевна Сейдахметова Роза Джаровна Зинина Надежда Николаевна Еспембетов Болат Аманбаевич Турлубеков Сейльбек Айдарович Кожакова Ботагоз Кабышевна Гуляева Оксана Владимировна(73) Государственное учреждение Национальный центр мониторинга, референции, лабораторной диагностики и методологии в ветеринарии Комитета государственной инспекции в агропромышленном комплексе Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан(56) Предварительный патент РК 5198, кл. 61 39/10, 1997(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ-0477, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к ветеринарной микробиологии и иммунологии, и может быть использовано для диагностики бруцеллеза животных. Известен диагностический препарат,включающий выращивание культуры 19 на питательной среде с последующим смывом, отмывание и суспензирование бруцелл,инактивацию полученной суспензии нагреванием и добавление буферного разбавителя Предварительный патент Р К 5198, кл. А 61 К 39/10, 1997. Недостатком штамма 19 при изготовлении диагностических препаратов является недостаточное накопление бакмассы на питательной среде (эритрит-агаре). Задачей изобретения является получение слабовирулентного штаммадля приготовления диагностических препаратов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в сохранении стабильной-формы штаммапри длительном культивировании,с хорошими ростовыми свойствами бактериального газона. Штамм бактерийВ-0477158,депонирован в Лаборатории Национальной коллекции депонированных штаммов микроорганизмов Государственного учреждения Национальный центр мониторинга, референции,лабораторной диагностики и методологии в ветеринарии Комитета государственной инспекции в агропромышленном комплексе Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан,используемый для получения диагностических препаратов. Штамм получен путем ступенчатого отбора колоний в-форме по Уайт-Вильсону. Полученный штамм бактерийВ 0477158, депонирован в Лаборатории Национальной коллекции депонированных штаммов микроорганизмов Государственного учреждения Национальный центр мониторинга,референции,лабораторной диагностики и методологии в ветеринарии Комитета государственной инспекции в агропромышленном комплексе Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан. Идентификацию штаммов бруцелл проводят по морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам согласно определителя-, -, -,/, 2005. -.. . -370-386 . Штамм характеризуется следующими признаками, которыми обладает культураВ-0477158. Морфологические признаки. Бактерии штамма грамотрицательные, овоиды, красные от 0,4-2,50,40,6 мкм, неподвижные, специализированные клетки не образуют. Культуральные свойства. На эритрит агаре с добавками вырастают янтарные, прозрачные,выпуклые колонии, круглые с гладкими краями. Накопление бакмассы наблюдается через 24-48 часов выращивания. В питательном бульоне образуют равномерную муть с пристеночным кольцом. Аэроб. Оптимальная температура выращивания 37 С при рН 6,8-7,2. Биохимические свойства. Обладает уреазной,оксидазной и каталазной активностью. Антигенная структура. Содержит типичный набор антигенных детерминант, характерных дляв-форме. Патогенные свойства. При определении вирулентности по методу Коротича-Галота установлено, что штаммВ-0477158 имеет слабую вирулентность. Маркерные признаки штамма и методы их выявления Генетические - растет на средах с пенициллином в дозе 75 ЕД/мл среды. Иммунохимические - иммуноферментный анализ(ИФА), полимеразно-цепная реакция (ПЦР), штамм с монорецепторной антимелитензисной (180) сывороткой дает позитивную реакцию. Дополнительные сведения. ШтаммВ-0477158 свободен от бактериальных,грибковых,микоплазменных и вирусных контаминантов. Пример. Питательной средой для выращивания бакмассы в целях приготовления диагностического препарата служит биофабричная Питательная среда для выделения и культивирования бруцелл сухая (эритрит-агар) с добавлением глюкозы,глицерина, дрожжевого экстракта и -цистина. Данную среду растворяют в дистиллированной воде, доводят до кипения, кипятят 2-3 мин до полного растворения агара, затем вливают глицерин и через 1 минуту засыпают глюкозу, дрожжевой экстракт и -цистин, доводят до кипения и фильтруют через ватно-марлевый фильтр,разливают в колбы Тартаковского и автоклавируют в течение 20 мин при температуре 121 С. После автоклавирования колбам придают горизонтальное положение до застывание агара. Для контроля стерильности их помещают на 48 часов в термостат при температуре 37 С. Выращенную и проверенную на чистоту 3 матриксную культуру в объеме 5-10 см 100 млрд взвеси микробных тел с соблюдением условий стерильности засевают в колбы Тартаковского с твердой питательной средой. Культуру, засеянную в колбы, выращивают 4872 часа в термостате при температуре 37 С), затем проводят смыв физиологическим раствором хлористого натрия. Взвесь бруцелл 2-3 раза отмывают от примесей питательной среды с помощью центрифугирования при 5000 об/мин в течение 30-40 мин доводят до 100 млрд. м.к. концентрации в физиологическом растворе и 3 расфасовывают по 20,0 см в стерильные флаконы, 2 которые закрывают резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками. Хранят диагностический препарат (антиген) при температуре 4 С. Предложенный штамм эпизоотически актуален для Республики Казахстан, а изготовленный из штаммаВ-0477158 антиген является более эффективным в сравнении с противопоставленным 19. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерийВ-0477,депонирован в лаборатории Национальной коллекции депонированных штаммов микроорганизмов Государственного учреждения Национальный центр мониторинга, референции,лабораторной диагностики и методологии в ветеринарии Комитета государственной инспекции в агропромышленном комплексе Министерства сельского хозяйства Республики Казахстан, под регистрационным номером 158, используемый для приготовления диагностических препаратов.