Способ получения овисного антигена для постановки реакции длительного связывания комплемента при диагностике инфекционного эпидидимита баранов

(51) 61 39/10 (2010.01) 61 10/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ длительного связывания комплемента при диагностике инфекционного эпидидимита баранов. Способ получения овисного антигена для постановки реакции длительного связывания комплемента при диагностике инфекционного эпидидимита баранов, включающий выращивание бруцелл на питательной среде с последующим смывом, отмывание и суспензирование бруцелл,инактивацию полученной бактериальной суспензии нагреванием и добавление буферного разбавителя, в качестве бактериальной культуры используют штамм бактерийВ-0108 КазНИВИ 6,который выращивают на твердой питательной среде, смывают, после чего отмывают и суспендируют в физиологическом растворе,полученную суспензию инактивируют, после инактивации бактериальной взвеси добавляют раствор 0,05 М триса и подвергают воздействию с помощью ультразвукового диспергатора УЗДН-1 при частоте 35 кГц, мощности 70-90 Вт/см 2 ультразвуковых волн до просветления в течение 3040 мин,затем микробный дизентеграт центрифугируют при 18000-20000 об/мин в течение 30 мин, затем надосадочную жидкость сливают,консервируют фенолом до 0,5 концентрации и получают целевой продукт.(72) Барамова Шолпан Аузаровна Зинина Надежда Николаевна Оспанов Ержан Калиолдинович Алпысбаева Сабира Егизбаевна Мырзалиев Ахан Жахангерович Адамбаева Акмарал Ауелхановна Шманова Балымзия Тастановна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Иванов И.И. Бруцеллез животных методы и средства борьбы с ним. Алматы, 2002, с. 351(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОВИСНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ДЛИТЕЛЬНОГО СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано при изготовлении препаратов для серологической диагностики бруцеллеза животных. Технический результат,обеспечиваемый,изобретением выражается в получении чувствительного овисного антигена для реакции 23846 Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано при изготовлении препаратов для серологической диагностики бруцеллеза животных. Известен способ получения овисного антигена для постановки реакции длительного связывания комплемента при диагностике инфекционного эпидидимита баранов, включающий выращивание культуры 63/290 на питательной среде с последующим смывом,отмывание и суспензирование бруцелл, инактивацию полученной суспензии нагреванием и добавление буферного разбавителя Бруцеллез животных методы и средства борьбы с ним. - Алматы, 2002. - с. 351. Недостатком существующего овисного антигена является невысокая диагностическая активность. Задачей изобретения является получение специфического антигена из штамма,для постановки реакции длительного связывания комплемента при диагностике инфекционного эпидидимита баранов. Технический результат,обеспечиваемый,изобретением выражается в получении чувствительного овисного антигена для реакции длительного связывания комплемента при диагностике инфекционного эпидидимита баранов. Способ получения овисного антигена для постановки реакции длительного связывания комплемента при диагностике инфекционного эпидидимита баранов, включающий выращивание бруцелл на питательной среде с последующим смывом, отмывание и суспензирование бруцелл,инактивацию полученной бактериальной суспензии нагреванием и добавление буферного разбавителя, в качестве бактериальной культуры используют штамм бактерийВ-0108 КазНИВИ 6,который выращивают на твердой питательной среде, смывают, после чего отмывают и суспендируют в физиологическом растворе,полученную суспензию инактивируют, после инактивации бактериальной взвеси добавляют раствор 0,05 М триса и подвергают воздействию с помощью ультразвукового диспергатора УЗДН-1 при частоте 35 кГц, мощности 70-90 Вт/см 2 ультразвуковых волн до просветления в течение 3040 мин,затем микробный дизентеграт центрифугируют при 18000-20000 об/мин в течение 30 мин, затем надосадочную жидкость сливают,консервируют фенолом до 0,5 концентрации и получают целевой продукт. В изобретении используется штамм бактерий 6,депонированный в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт. Штамм характеризуется следующими признаками, которыми обладает культура. Морфологические признаки. Бактерии штамма по Граму не окрашиваются, окрашиваются по методу Козловского, овоиды, красные от 0,71,20,5-0,7 мкм, неподвижные. Культуральные свойства. На питательном агаре вырастают янтарные, прозрачные, серовато-белые в проходящем свете, круглые, менее выпуклые, часть колонии не правильно контурированные. Накопление бакмассы наблюдается через 24-48 часов выращивания. В питательном бульоне образуют помутнение бульона в течение суток, в дальнейшем хлопчатый осадок зоны просветления над осадком. Аэроб. Оптимальная температура выращивания 36-37,5 С при рН 6,8-7,0. Биохимические свойства. Отсутствует оксидазная и уреазная активность, интенсивно выделяет каталазу. Антигенная структура. Содержит типичный набор антигенных детеримант, характерных дляв-форме. Патогенные свойства. При определении вирулентности по методу Коротича-Галота установлено, что штаммВ-0108 КазНИВИ 6 имеет слабую вирулентность. Способ получения овисного антигена состоит в следующем. Пример 1. 3-суточную культуруВ 0108 КазНИВИ 6 смывают 0,85-ным физиологическим раствором с рН-7,2. В взвеси определяют концентрацию бруцелл и готовят 100 млрд. взвесь с последующей инактивацией бакмассы на водяной бане при 70-80 С 1-2 часа,после инактивации бактериальной взвеси добавляют раствор 0,05 М триса и подвергают воздействию с помощью ультразвукового диспергатора УЗДН-1 при частоте 35 кГц, мощности 70-90 Вт/см 2 ультразвуковых волн до просветления в течение 3040 мин,затем микробный дизентеграт центрифугируют при 18000-20000 об/мин в течение 30 мин, затем надосадочную жидкость сливают,консервируют фенолом до 0,5 концентрации и получают целевой продукт. Приготовленный антиген разливают в стерильных условиях во флаконы объемом 10,0-20,0 мл из нейтрального стекла, закупоривают резиновыми пробками и затыкают металлическими колпачками. Специфичность овисного антигена определяют в лабораторных условиях. Пример 2. Реакцию длительного связывания комплемента овисным антигеном проводят в чистых сухих стеклянных пробирках Флоринского. На наружной стенке пробирки указывают номер испытуемой пробы сывороток крови. Реакцию ставят на 0,85-ным физиологическом растворе в разведениях антигена 1100. При каждой постановке реакции одновременно с испытуемыми пробами ставят контроли с негативной и позитивной овисной сыворотками в разведениях 15. Результаты реакции учитывают визуально и определяют в крестах. За диагностический титр антител принимают последнее разведение сыворотки, в которым произошла агглютинация не менее чем в 2 креста, что отсутствует количеству международных единиц антител в 1 мл сыворотки. Контролем 2 23846 служат заведомо отрицательная и положительная овисная пробы сывороток крови животных. При изучении специфичность предложенного овисного антигена в сравнении с биофабричным(РДСК) подвергают исследованию поливалентные сыворотки против бруцелл, салмонелл, лептосир,пастерелл, энтерекокка, кампилобактерий (вибриофетус венериалис, вибрио-фетус интестинались,вибробубулис). При этом во всех случаях получают отрицательный результат, что свидетельствуют о специфичности приготовленных диагностикумов. Специфичность и чувствительность реакцию длительного связывания комплемента с разработанным антигеном в сравнении общепринятым методом (РДСК с биофабричным овисным антигеном) изучают также путем исследования 200 сывороток крови баранов из различных по эпизоотическому состоянию ферм(хояйств) по инфекционному эпидидимиту баранов. Результаты серологических реакций при исследовании сывороток крови баранов на инфекционный эпидидимит, показаны в таблице 1. Из таблицы 1 видно, что все благополучные по бруцеллезу группы животных имеют отрицательные показания по РДСК с биофабричным антигеном, так и с разработанным антигеном, а при исследовании на инфекционный эпидидимит 22 проб сыворотки крови баранов из неблагополучных хозяйств получены в РДСК с биофабричным антигеном 5 случаях и 2 проба давала сомнителный результат, а разработанным овисным антигеном в РДСК - 7. Использование предложенного способа позволит повысить чувствительность и специфичность РДСК по сравнению с биофабричным овисным антигеном при исследовании сывороток крови баранов. Таблица 1 Результаты исследований сывороток крови баранов на инфекционный эпидидимит Количество исследован ных голов Сыворотки крови РДСК с биофабричным овисным антигеном Способ получения овисного антигена для постановки реакции длительного связывания комплемента при диагностике инфекционного эпидидимита баранов, включающий выращивание бруцелл на питательной среде с последующим смывом, отмывание и суспензирование бруцелл,инактивацию полученной бактериальной суспензии нагреванием и добавление буферного разбавителя,отличающийся тем, что в качестве бактериальной культуры используют штамм бактерийВ-0108 КазНИВИ 6, который выращивают на 15 7 15 твердой питательной среде, смывают, после чего отмывают и суспендируют в физиологическом растворе, полученную суспензию инактивируют,после инактивации бактериальной взвеси добавляют раствор 0,05 М триса и подвергают воздействию с помощью ультразвукового диспергатора УЗДН-1 при частоте 35 кГц, мощности 70-90 Вт/см 2 ультразвуковых волн до просветления в течение 3040 мин,затем микробный дизентеграт центрифугируют при 18000-20000 об/мин в течение 30 мин, затем надосадочную жидкость сливают,консервируют фенолом до 0,5 концентрации и получают целевой продукт.