Способ получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина
Номер инновационного патента: 20776
Опубликовано: 16.02.2009
Авторы: Сайдулдин Тлеуберды, Ильгекбаева Гульназ Дуйсековна, Ильгекбаева Алтынай Куанышкызы
Формула / Реферат
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к области диагностики и может найти широкое применение для одновременной серологической диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов.
Задачей изобретения является получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина путем объединения оптимального соотношения бруцеллезного и овисного антигенов.
Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в использовании экстракта штаммов В.abortus 19 и B.ovis 10/1 в одинаковом объеме.
В способе получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина берут 3-4 суточного роста бактериальную массу, смывают физиологическим раствором, доводят концентрацию по стандарту мутности, бактериальную массу получают из штаммов В.abortus 19 и B.ovis 10/1, в каждую суспензию добавляют 0,05 М триса и подвергают воздействию ультразвуковых волн с частотой колебательных движений 25 кгц и мощности 80 Вт/см2, генерируемых УЗДН в течение 20 минут с охлаждением и 20 минут без охлаждения, лизат центрифугируют при 20000 об/мин 30 минут, надосадочную часть сливают, консервируют 0,5%-ным фенолизированным физиологическим раствором до 60 млрд микробных тел в 1 см3 по бруцеллезному стандарту мутности, берут суспензии в соотношении 1:1, перемешивают.
Текст
(51) 6139/10 (2006.01) 01 33/53 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в использовании экстракта штаммов В. 19 и . 10/1 в одинаковом объеме. В способе получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина берут 3-4 суточного роста бактериальную массу, смывают физиологическим раствором, доводят концентрацию по стандарту мутности, бактериальную массу получают из штаммов В. 19 и . 10/1, в каждую суспензию добавляют 0,05 М триса и подвергают воздействию ультразвуковых волн с частотой колебательных движений 25 кгц и мощности 80 Вт/см 2, генерируемых УЗДН в течение 20 минут с охлаждением и 20 минут без охлаждения, лизат центрифугируют при 20000 об/мин 30 минут, надосадочную часть сливают,консервируют 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором до 60 млрд микробных тел в 1 см 3 по бруцеллезному стандарту мутности,берут суспензии в соотношении 11, перемешивают.(72) Сайдулдин Тлеуберды Ильгекбаева Алтынай Куанышкызы Ильгекбаева Гульназ Дуйсековна(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЕДИНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ В РЕАКЦИИ САЙДУЛДИНА(57) Изобретение относится к области ветеринарии,а именно к области диагностики и может найти широкое применение для одновременной серологической диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов. Задачей изобретения является получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина путем объединения оптимального соотношения бруцеллезного и овисного антигенов. 20776 Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к области диагностики и может найти широкое применение для одновременной серологической диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов. Уровень известной техники. Наиболее близким к предполагаемому изобретению является способ получения единого бруцеллезного антигена для РА,РСК и РДСК Иванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. 2-е изд. Испр., доп. - Алматы,2007. - с.417-427. В способе получения единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК берут 3-4 суточного роста бактериальную массу штамма В. 19,смывают фенолизированным физиологическим раствором, доводят концентрацию по стандарту мутности и прогревают в водяной бане при температуре 70-80 С. Недостатком этого способа является то, что отсутствует чувствительность в отношении антител к -форм бруцелл в сыворотке крови овец. Также наиболее близким к предполагаемому изобретению является способ получения антигена для РДСК изИванов Н.П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. 2-е изд. Испр., доп. Алматы, 2007. - с.427-432. В способе получения антигена для РДСК изберут 3-4 суточного роста бактериальную массу штамма, смывают физиологическим раствором,доводят концентрацию по стандарту мутности,добавляют 0,05 М триса и подвергают воздействию ультразвуковых волн с частотой колебательных движений 22-35 кгц и мощности 70-90 Вт/см 2,генерируемых УЗДН в течение 20 минут с охлаждением и 20 минут без охлаждения, лизат центрифугируют при 18000-20000 об/мин 30-40 минут, надосадочную часть сливают, консервируют фенолом до 0,5 конечного его содержания. Недостатком этого способа является то, что отсутствует чувствительность в отношении антител к -форм бруцелл в сыворотке крови овец. Задачей изобретения является получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина путем объединения оптимального соотношения бруцеллезного и овисного антигенов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в использовании экстракта штаммов В. 19 и В. 10/1 в одинаковом объеме. В указанных признаках общими являются следующие в обоих случаях берут 3-4 суточного роста бактериальную массу, смывают раствором,доводят концентрацию по стандарту мутности. Отличительные признаки В способе получения единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК используют корпускулярный антиген, а в способе получения антигена для РДСК из- экстракт штамма. В предлагаемом способе берется экстракт обоих штаммов в одинаковом соотношении и перемешивается тщательно. В способе получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина берут 2 3-4 суточного роста бактериальную массу, смывают физиологическим раствором, доводят концентрацию по стандарту мутности, бактериальную массу получают из штаммов В. 19 и . 10/1, в каждую суспензию добавляют 0,05 М триса и подвергают воздействию ультразвуковых волн с частотой колебательных движений 25 кгц и мощности 80 Вт/см 2, генерируемых УЗДН в течение 20 минут с охлаждением и 20 минут без охлаждения, лизат центрифугируют при 20000 об/мин 30 минут, надосадочную часть сливают,консервируют 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором до 60 млрд микробных тел в 1 см 3 по бруцеллезному стандарту мутности,берут суспензии в соотношении 11, перемешивают. Способ получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина состоит в следующем. Пример 1. Для получения посевного материала в ампулу или пробирку с выращенной культурой штамма 10/1 наливают стерильный физиологический раствор до первоначального объема. После полного растворения микробной массы из взвеси готовят 10-кратные разведения в пробирках до 10-7-10-9, в которые перед разведением разливают физиологический раствор в количестве 4,5 см 3. Из двух последних разведений производят посевы по 0,1 см 3 на 3-5 чашек Петри с питательным агаром. Чашки с агаром перед посевом предварительно подсушивают в термостате при 3738 С в течение 24 часов. Микробную взвесь,засеянную на чашки, равномерно распределяют по поверхности агара и выдерживают в термостате при 37-38 С в течение 4-6 суток. Посевы просматривают на чистоту и типичность роста колоний. Из чашек отбирают типичные колонии, которые отсевают на пробирки с одной из названных питательных сред. Выращенная в течение 3 суток при 37-38 С культура является исходным материалом. Выращенную культуру смывают физиологическим раствором и засевают одну колбу. Через 24 часа после засева поверхности агара в колбе увлажняют вторично для лучшего роста. Через 2 суток после этого выращенную культуру проверяют на чистоту, типичность роста, затем смывают физиологическим раствором и готовят 5 млрд взвесь для засева питательной среды, из расчета 5-7 см 3 на одну колбу. Через 4 суток колбы, где на питательном агаре засеяна культура штамма, просматривают на чистоту и типичность роста и отбирают для смыва. Культуру смывают физиологическим раствором (30 см 3 на одну колбу) и освобождают от возможных примесей питательной среды путем фильтрации через 3-слойныймарлевый фильтр. Смытую с колб культуру отсасывают в одну стеклянную емкость, проверяют на чистоту и типичность морфологических признаков(микроскопированием), определяют оптическую концентрацию, разводят до 60 млрд микробных клеток бруцелл в 1 см 3. 20776 Затем в полученную суспензию добавляют 0,05 М триса и подвергают воздействию ультразвуковых волн с частотой колебательных движений 25 кгц и мощности 80 Вт/см 2, генерируемых УЗДН в течение 20 минут с охлаждением и 20 минут без охлаждения, лизат центрифугируют при 20000 об/мин 30 минут, надосадочную часть сливают,консервируют 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором до конечного его содержания. После 3-4 суточного роста на питательной среде бактериальную массу штамма 19 смывают стерильным фенолизированным физиологическим раствором (рН-7,2-7,4) из расчета 30 см 3 на одну колбу. Полученную суспензию сливают через двойной марлевый фильтр в бутыли и прогревают на водяной бане при температуре 80 С в течение 60 минут. Прогретую суспензию выдерживают в холодильнике при температуре 2-4 С в течение 8 суток. Одновременно ее проверяют на чистоту,стерильность микроскопически и путем высева. Затем в суспензию добавляют 0,05 М триса и подвергают воздействию ультразвуковых волн с частотой колебательных движений 25 кгц и мощности 80 Вт/см 2, генерируемых УЗДН в течение 20 минут с охлаждением и 20 минут без охлаждения, лизат центрифугируют при 20000 об/мин 30 минут, надосадочную часть сливают,консервируют 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором до 60 млрд микробных тел в 1 см 3 по бруцеллезному стандарту мутности. Берут суспензии 10/1 и 19 в одинаковом объеме, перемешивают и используют в качестве антигена. Пример 2. Активность приготовленного антигена определяли путем титровали шахматным методом в присутствии позитивных бруцеллезной и овисной сывороток в реакции Сайдулдина . Титрование антигена и бруцеллезной сыворотки впоказало, что в разведениях антигена 1501100 титр сыворотки установлен 180 (таблица 1). При последующих разведениях антигена титр бруцеллезной сыворотки поднимался и в разведении 1600 титр сыворотки составил 12560. Начиная с разведения антигена 1700 титр сыворотки снижался. Таким образом,рабочим титром приготовленного антигена в присутствии позитивной бруцеллезной сыворотки в реакции Сайдулдина являлся его разведение 1600, а титр позитивной сыворотки составил 12560. При титровании антигена в присутствии позитивной овисной сыворотки в , в разведение антигена 150 активность сыворотки была 110. Начиная с разведения антигена 1100 до 1600 титр сыворотки поднимался с 120 до 1640. Начиная с разведения антигена 1700 титр сыворотки начал снижаться. Таким образом, рабочий титр приготовленного антигена в присутствии позитивной овисной сыворотки всоставил 1600. При этом титр противоовисных антител установлен 1640. Вышеприведенные данные свидетельствуют о том, что приготовленный антиген является активным и специфичным при бруцеллезе овец и инфекционном эпидидимите баранов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина,включающем взятие 3-4 суточного роста бактериальной массы, смывание физиологическим раствором, доведение концентрации по стандарту мутности, отличающийся тем, что бактериальную массу получают из штаммов 19 и 10/1, в каждую суспензию добавляют 0,05 М триса и подвергают воздействию ультразвуковых волн с частотой колебательных движений 25 кГц и мощности 80 Вт/см 2,генерируемых УЗДН в течение 20 минут с охлаждением и 20 мин без охлаждения, лизат центрифугируют при 20000 об/мин 30 минут,надосадочную часть сливают, консервируют 0,5 ным фенолизированным физиологическим раствором до 60 млрд микробных тел в 1 см 3 по бруцеллезному стандарту мутности,берут суспензии в соотношении 11, перемешивают.
МПК / Метки
МПК: G01N 33/53, A61K 39/10
Метки: способ, баранов, единого, получения, реакции, диагностики, бруцеллеза, сайдулдина, эпидидимита, инфекционного, антигена, овец
Код ссылки
<a href="https://kz.patents.su/3-ip20776-sposob-polucheniya-edinogo-antigena-dlya-diagnostiki-brucelleza-ovec-i-infekcionnogo-epididimita-baranov-v-reakcii-sajjduldina.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Способ получения единого антигена для диагностики бруцеллеза овец и инфекционного эпидидимита баранов в реакции Сайдулдина</a>
Предыдущий патент: Способ изготовления аллергена из бруцелл
Следующий патент: Способ оздоровления органов дыхания
Случайный патент: Способ очистки раствора сульфата цинка от кобальта