Штамм бактерий Lactobacillus plantarum 19, предназначенный для включения в состав лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний

(51) 12 1/00 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) 61 35/74 (2006.01) 61 1/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ Задача изобретения - получение штамма молочнокислых бактерий, устойчивого к желчи и низкому значению , обладающего более высокой антимикробной активностью. Техническим результатом является получение нового штамма 41,устойчивого к желчи и низкому значению ,обладающий высокой антимикробной активностью к возбудителям кишечных инфекций, в том числе к, включение которого в состав пробиотика позволит повысить его эффективность за счет сохранения жизнеспособности бактерий при прохождении через желудочно-кишечный тракт и высокой антимикробной активности.(76) Саданов Аманкелди Курбанович Гаврилова Нина Николаевна Ратникова Ирина Александровна(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ 19, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ВКЛЮЧЕНИЯ В СОСТАВ ЛЕЧЕБНОПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при создании лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний. Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм молочнокислых бактерий, который может быть использован в составе лечебнопрофилактических препаратов против кишечных заболеваний человека и животных. Известен штамм молочнокислых бактерий 8 р-А 3 (Фармакопейная статья Лактобактерин сухой ФС-252-ВС-89),который рекомендован для лечения дисбактериозов различной этиологии у взрослых и детей. Недостатком его является преимущественно бактериостатическая антимикробная активность к возбудителям кишечных заболеваний. Имеется также прототип 2, предназначенный для использования в составе лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний и проявляющий высокую антимикробную активность в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий, в том числе возбудителей колибактериоза,сальмонеллеза, пастереллеза, а также микобактерий(Предварительный патент РК 11843. Штамм бактерий .2, предназначенный для включения в состав лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний/ Гаврилова Н.Н., Ратникова И.А., от 15.08.2002). Однако данный штамм имеет недостаточную устойчивость к желчи и низким значениям . Задача изобретения - получения штамма молочнокислых бактерий, устойчивого к желчи и низкому значению , обладающего более высокой антимикробной активностью. Поставленная задача достигается получением штамма молочнокислых бактерий .41,устойчивого к желчи и низкому значению ,обладающего более высокой антимикробной активностью. Штамм .2 в/2 выделен из популяции штамма .2 после трехкратной адаптации его к кислой среде (рН 3) и желчи. Культура .2 в/2 представляет собой грамположительные аспорогенные палочки с закругленными концами диаметром 0,6-0,80,82,8 мкм, одиночные, парные или в изогнутых цепочках. Тип размножения - бинарное деление. При росте на твердой питательной среде образует круглые гладкие колонии с ровным краем, не пигментированные, размером 1-3 мкм. При росте в жидкой питательной средепри 37 С в течение 18-24 ч происходит помутнение среды с прозрачным кольцом в верхнем слое. При этом происходит подкисление среды до 3,8. Факультативный анаэроб. Оптимальная температура роста 37 С,максимальная - 40 С, минимальная - 10 С. В качестве источника углерода использует арабинозу,рибозу, целлобиозу, галактозу, глюкозу, глюконат,мальтозу, мелибиозу, сахарозу, лактозу, сорбит,дульцит, маннит, маннозу. Использует органические источники азота пептон, дрожжевой автолизат или экстракт, мясной экстракт, кукурузный экстракт,экстракт солодовых ростков. Воздействия на желатин и крахмал не оказывает. 2 и индол не образует. Не обладает каталазной активностью. Не патогенен. Устойчив к желчи и низкому значению, проявляет высокую антимикробную активность широкого спектра действия в отношении грамотрицательных и грамположительных бактерий, в том числе возбудителей кишечных инфекций. Штамм депонирован в коллекции Института микробиологии и вирусологии МОиН РК. Коллекционный номерИМиВ В-39. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами. Пример 1. Культуры .2 и .41 выращивают отдельно в течение 24 ч при 37 С в питательной среде(г/л) дрожжевой экстракт 5.0 мясной экстракт - 10,0 пептон - 10,0 глюкоза 20,0 лимоннокислый аммоний - 2,0 уксуснокислый натрий - 5,0 твин 80 - 1,0 24 - 2,0 КН 2 РО 4 2,0 472 - 0,2 442 - 0,05( - 6,2 - 6.6). Затем из них отбирают по 1 мл,вносят в 10 мл стерильного физиологического раствора с 3,0 и выдерживают в термостате при 37 С в течение 30 и 60 мин. После этого пробы нейтрализуют и определяют в них количество выживших бактерий путем высева из соответствующих разведений в чашки Петри на агаризованную питательную среду . Подсчет количества выросших колоний производят на 3 сутки после термостатирования чашек при температуре 37 С. Результаты представлены в таблице 1. Таблица 1 Выживаемость молочнокислых бактерий при 3 Штаммы Содержание жизнеспособных клеток, КОЕ/мл исходное 30 мин при 3 60 мин при рН 3 3,4 х 109 2,2109 2,1 х 109 9 8 6,010 3,010 2,7107 Как видно из представленной таблицы, при экспозиции в среде с 3 в течение 30 минут у культуры .2 происходит снижение числа жизнеспособных клеток на 1 порядок, а в течение 60 минут - на 2 порядка. В этих же условиях титр бактериальных клеток у культуры .41 практически остался без изменений. 2 Пример 2. Культуры .2 и .41 выращивают в питательной среде ,описанной в примере 1, с добавкой 3 желчи в течение 24 часов при температуре 37 С. После этого в них определяют количество жизнеспособных бактерий путем высева из соответствующих разведений в чашки Петри на агаризованную среду. Подсчет количества выросших колоний производят на 3 сутки после термостатирования чашек при температуре 37 С. Результаты исследований представлены в таблице 2, из которых видно, что предлагаемый штамм молочнокислых бактерий намного превосходит противопоставляемый по устойчивости к желчи. Таблица 2 Рост молочнокислых бактерий в питательной средес 3 желчи Штаммы Содержание жизнеспособных клеток, КОЕ/мл исходная питательная среда с добавкой 3 желчи 6,6109 3,2 х 109 9 2,010 1,0105 Пример 3. Культуры .2 и .41 выращивают в питательной среде ,описанной в примере 1, в течение 24 часов при температуре 37 С. После этого в них определяют антагонистическую активность следующим образом. Чашки Петри с ровным дном помещают на горизонтальную поверхность. На водяной бане расплавляют в колбах стерильную плотную питательную среду следующего состава (г/л) бульон Хоттингера - 30,0 пептон - 5,0 натрий хлористый - 5,0 глюкоза - 10,0 агар - агар - 20,0 вода питьевая для доведения объема среды до 1 дм 3. После охлаждения до 45-50 С в агаризованную среду вносят взвесь тест - культуры из расчета 1,0 см 3 одномиллиардной взвеси на 100 см 3 среды. Содержимое колбы перемешивают и разливают в чашки Петри по 10 см 3 в каждую. В застывшей среде бором вырезают лунки,обычно по шесть. В приготовленные лунки вносят по 0,1 см 3 односуточной культуры молочнокислых бактерий. Затем чашки выдерживают около 3 ч при комнатной температуре для диффузии раствора в агар, после чего помещают в термостат при температуре 37 С на 16-18 ч. Измеряют диаметр зон подавления роста тест-культур. Для каждого образца рассчитывают среднее арифметическое значение не менее чем из трех определений. Результаты представлены в таблице 3. Таблица 3 Антагонистическая активность различных штаммов молочнокислых бактерий Тест-культуры 79/10/76-9-3316. Зоны подавления роста тест-культур, мм Как видно из представленной таблицы, штамм.41 при росте на средепревосходит противопоставляемый штамм по величине антимикробной активности в отношении 79/1,, клинического штамма 41 превосходит противопоставляемый .2 по устойчивости к желчи и низкому значению , что позволяет ему проходить через желудочнокишечный тракт без потери жизнеспособности. Кроме того, штамм обладает широким спектром действия и высокой антимикробной активностью, к возбудителям кишечных инфекций, в том числе и к. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий 19,депонирован в РГП на ПХВ Институт микробиологии и вирусологии под номером ИМиВ В-39, предназначенный для включения в состав лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний.