Штамм бактерий Lactobacillus plantarum 48, предназначенный для включения в состав микробных препаратов против желудочно-кишечных заболеваний

(51) 12 1/00 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) 61 35/74 (2006.01) 61 1/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ профилактических препаратов против желудочнокишечных заболеваний. Задача изобретения - получение штамма молочнокислых бактерий, устойчивого к желчи и низкому значению , обладающего высокой антимикробной активностью по отношению к возбудителям желудочно-кишечных заболеваний. Техническим результатом является получение нового штамма молочнокислых бактерий 48, устойчивого к желчи и низкому значению , обладающего высокой антагонистической активностью по отношению к возбудителям желудочно-кишечной инфекции, в том числе и к, включение которого в состав пробиотика позволит повысить его эффективность за счет сохранения жизнеспособности при прохождении через желудочно-кишечный тракт и высокой антимикробной активности.(76) Саданов Аманкелди Курбанович Гаврилова Нина Николаевна Ратникова Ирина Александровна(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ 48, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ВКЛЮЧЕНИЯ В СОСТАВ МИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ ЖЕЛУДОЧНОКИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм молочнокислых бактерий, который может быть использован в составе лечебно 31196 Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм молочнокислых бактерий, который может быть использован в составе лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний. Известен штамм молочнокислых бактерий 8 р-А 3 (Фармакопейная статья Лактобактерин сухой ФС-252-ВС-89), который рекомендован для лечения дисбактериозов различной этиологии у взрослых и детей. Недостатком его является преимущественно бактериостатическая антимикробная активность к возбудителям кишечных заболеваний. Известен штамм молочнокислых бактерий,обладающий высокой антагонистической активностью (Предварительный патент РК 11845. Штамм бактерий 53 н,предназначенный для включения в состав лечебнопрофилактических препаратов против гнойной инфекции и желудочно-кишечных заболеваний/Гаврилова Н.Н., Ратникова И.А. 24.01.2001). Недостатком штамма является его чувствительность к желчи и низкому значению , что может быть причиной снижения его эффективности при применении. Задача изобретения - получение штамма молочнокислых бактерий, устойчивого к желчи и низкому значению , обладающего высокой антимикробной активностью по отношению к возбудителям желудочно-кишечных заболеваний. Поставленная задача достигается получением штамма молочнокислых бактерий .48,устойчивого к желчи и низкому значению ,обладающего высокой антагонистической активностью по отношению к возбудителям желудочно-кишечной инфекции, в том числе и к. Штамм .48 выделен из кишечника здорового человека и адаптирован к желчи и 3. Культура .48 представляет собой грамположительные аспорогенные палочки с закругленными концами диаметром 0,6-0,80,82,8 мкм, одиночные, парные или в изогнутых цепочках. При росте на твердой питательной среде образует круглые гладкие колонии с ровным краем,не пигментированные, размером 1-3 мкм. При росте в жидкой питательной средепри 37 С в течение 18-24 ч происходит помутнение среды с прозрачным кольцом в верхнем слое. При этом происходит подкисление среды до 3,7. Факультативный анаэроб. Оптимальная температура роста 37 С,максимальная - 40 С, минимальная - 10 С. В качестве источника углерода использует арабинозу, рибозу,целлобиозу, галактозу, глюкозу, глюконат, рафинозу,мальтозу, сахарозу, лактозу, сорбит, дульцит, маннит,маннозу. Использует органические источники азота пептон, дрожжевой автолизат или экстракт, мясной экстракт, кукурузный экстракт, экстракт солодовых ростков. Воздействия на желатин и крахмал не оказывает. 2 и индол не образует. Не обладает каталазной активностью. Не патогенен. Устойчив к желчи и низкому значению , проявляет высокую антимикробную активность широкого спектра действия, в том числе по отношению к возбудителям кнойных и кишечных инфекций. Штамм депонирован в коллекции Института микробиологии и вирусологии МОН РК. Коллекционный номерИМиВ В-38. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами. Пример 1. Культуры .53 и.48 выращивают отдельно в течение 24 ч при 37 С в питательной среде(г/л) дрожжевой экстракт - 5,0 мясной экстракт - 10,0 пептон - 10,0 глюкоза- 20,0 лимоннокислый аммоний - 2,0 уксуснокислый натрий-5,0 твин 80 - 1,0 2 О 4 2,0 КН 2 РО 4 - 2,0 О 472 - 0,2 О 442 0,05 ( - 6,2-6,6). Затем из них отбирают по 1 мл,вносят в 10 мл стерильного физиологического раствора с 3,0 и выдерживают в термостате при 37 С в течение 30 и 60 мин. После этого пробы нейтрализуют и определяют в них количество выживших бактерий путем высева из соответствующих разведений в чашки Петри на агаризованную питательную среду . Подсчет количества выросших колоний производят на 3 сутки после термостатирования чашек при температуре 37 С. Результаты представлены в таблице 1. Таблица 1 Выживаемость молочнокислых бактерий при 3 Штаммы Содержание жизнеспособных клеток, КОЕ/мл 30 мин при 3 60 мин при рН 3 2,8109 2,0109 7 3,210 2,5107 Как видно из представленной таблицы, в культуре.53 н после экспозиции в среде с 3 в течение 30 и 60 минут происходит снижение числа жизнеспособных клеток на 2 порядка. В этих же условиях титр бактериальных клеток в культуре.48 выращивают на питательной среде 2, описанной в примере 1, с добавкой 3 желчи в течение 24 часов при температуре 37 С. Затем определяют количество жизнеспособных бактерий путем высева из соответствующих разведений в чашки Петри на агаризованную среду . Подсчет количества выросших колоний производят на 3 сутки после термостатирования чашек при температуре 37 С. Результаты исследований представленные в таблице 2, свидетельствуют, что предлагаемый штамм молочнокислых бактерий намного превосходит противопоставляемый по устойчивости к желчи. Так, если снижение титра бактериальных клеток при росте культуры .53 н в питательной среде с 3 желчи произошло на 5 порядков по сравнению с исходной питательной средой, то у культуры .48 при тех же условиях титр бактерий был ниже на 1 порядок. Таблица 2 Рост молочнокислых бактерий в питательной средес 3 желчи Штаммы Содержание жизнеспособных клеток, КОЕ/мл исходная питательная среда с добавкой 3 желчи 6,8109 9,3 х 108 9 3,010 2,5 х 104, описанной в примере 1, в течение 24 часов при температуре 37 С. Затем определяют содержание в них количества жизнеспособных бактерий аналогично примеру 1, а также антагонистическую активность. Антагонистическую активность в отношении взятых в опыт тест-культур устанавливают следующим образом. Чашки Петри с ровным дном помещают на горизонтальную поверхность. На водяной бане расплавляют в колбах стерильную плотную питательную среду следующего состава(г/л) бульон Хоттингера-30,0 пептон-5,0 натрий хлористый-5,0 глюкоза - 10,0 агар-агар - 20,0 вода питьевая для доведения объема среды до 1 дм 3. После охлаждения до 45-50 С в агаризованную среду вносят взвесь тест-культуры из расчета 1,0 см 3 одномиллиардной взвеси на 100 см 3 среды. Содержимое колбы перемешивают и разливают в чашки Петри по 10 см 3 в каждую. В застывшей среде бором вырезают лунки,обычно по шесть. В приготовленные лунки вносят по 0,1 см 3 односуточной культуры молочнокислых бактерий. Затем чашки выдерживают около 3 ч при комнатной температуре для диффузии раствора в агар, после чего помещают в термостат при температуре 37 С на 16-18 ч. Измеряют диаметр подавления роста тест-культур. Для каждого образца рассчитывают среднее арифметическое значение не менее чем из трех определений. Результаты исследований представлены в таблице 3. Таблица 3 Антагонистическая активность различных штаммов молочнокислых бактерий Тест-культуры 79/1-9.Как видно из представленной таблицы, штамм.48 при росте на средепревосходит противопоставляемый штамм по величине антимикробной активности в отношении 79/1,,., клинического штамма,. Таким образом,предлагаемый штамм молочнокислых бактерий .48 превосходит противопоставляемый .53 н по устойчивости к желчи и низкому значению 3 Зоны подавления роста тест-культур,мм, что свидетельствует о лучшей его выживаемости при прохождении через желудочно-кишечный тракт. Кроме того, штамм обладает широким спектром действия и высокой антимикробной активностью к возбудителям кишечных инфекций, в том числе и к. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий 48,депонирован в коллекции РГП Институт микробиологии и вирусологии КН МОН РК под номером ИМиВ для включения в микробных препаратов кишечных заболеваний.