Штамм бактерий lactobacillus brevis б-3/75, предназначенный для включения в состав лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний

(51) 12 1/20 (2006.01) 61 35/74 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ создании лечебно-профилактических препаратов против желудочно-кишечных заболеваний. Задача изобретения - получение штамма молочнокислых бактерий, устойчивого к желчи и низкому значению . Техническим результатом является получение нового штамма молочнокислых бактерийБ-3/75, устойчивого к желчи и низкому значению , обладающего широким спектром антимикробной активности, в том числе по отношению к возбудителям кишечной инфекции,включение которого в состав пробиотика позволит повысить его эффективность за счет сохранения жизнеспособности при прохождении через желудочно-кишечный тракт и высокой антимикробной активности.(76) Саданов Аманкелди Курбанович Гаврилова Нина Николаевна Ратникова Ирина Александровна(54) ШТАММ БАКТЕРИЙБ-3/75, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫЙ ДЛЯ ВКЛЮЧЕНИЯ В СОСТАВ ЛЕЧЕБНОПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано при Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм молочнокислых бактерий, который может быть использован в составе лечебнопрофилактических препаратов против кишечных заболеваний человека и животных. Известен штамм молочнокислых бактерий 8 р-А 3 (Фармакопейная статья Лактобактерин сухой ФС-252-ВС-89),который рекомендован для лечения дисбактериозов различной этиологии у взрослых и детей. Недостатком его является преимущественно бактериостатическая антимикробная активность к возбудителям кишечных заболеваний. Известен также штаммБ-3,входящий в состав препаратов лактолвит-К(Лактовит-К. Технические условия ТУ 10.07.175-91) для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц,средства против болезни Ньюкасла(Предварительный патент РК 17845. Средство для профилактики болезни Ньюкасла / Гаврилова Н.Н.,Березин В.Э., Ратникова И.А., Кадырбаев Ж., от 24.02.2005 г.), а также в состав средства для профилактики и комплексной терапии онкозаболеваний (Инновационный патент РК 28669, Средство для профилактики и коплексной терапии онкозаболеванийГаврилова Н.Н.,Ратникова И.А., Саданов А.К., Баякышова К.,Турлыбаева З.Ж., бюл. 7, 15.07.2014). Однако данный штамм имеет недостаточную устойчивость к желчи и низким значениям . Задача изобретения - получения штамма молочнокислых бактерий, устойчивого к желчи и низкому значению . Поставленная задача достигается получением нового штамма молочнокислых бактерийБ-3/75, устойчивого к желчи и низкому значению , обладающего широким спектром антимикробной активности, в том числе по отношению к возбудителям кишечной инфекции. ШтаммБ-3/75 выделен из популяции штамма .Б-3 после трехкратной адаптации его к кислой среде (рН 3) и желчи. Двухсуточная культура .Б-3/75 представляет собой палочки короткие и прямые,размером 0,7-1,02,0-4,0 мкм, с закругленными концами, одиночные и в коротких цепочках. Грамположительные,каталазоотрицательные,аспорогенные, неподвижные. Микроколонии на агаре незначительно выпуклые с цельным краем,непрозрачные, серо-белые, по консистенции маслянистые. При сбраживании глюкозы образует 0,68 молочной и 0,30 уксусной кислот. При росте на глюконате образует СО 2. Рибозу ферментирует до молочной и уксусной кислот без образования газа. Образует кислоты на средах с глюкозой, лактозой,мальтозой, маннитом, галактозой, фруктозой,ксилозой,арабинозой,сорбитом. Слабо ферментирует маннозу, целлобиозу, сахарозу. Не ферментирует глицерин и крахмал. Нитраты не редуцирует. Образует 3 из аргинина. Факультативный анаэроб. Оптимальная температура роста 30-35 С. Устойчив к желчи и кислой среде ( 3). Является антагонистом в отношении(15 мкг/мл). Культура. Б-3 депонирована в коллекции Института микробиологии и вирусолог МОН РК,коллекционный номер ИМВиВ В-27. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами. Пример 1. Культуры .Б-3 и .Б-3/75 выращивают отдельно в течение 24 ч при 37 С в питательной среде(г/л) дрожжевой экстракт 5.0 мясной экстракт - 10,0 пептон - 10,0 глюкоза 20,0 лимоннокислый аммоний - 2,0 уксуснокислый натрий - 5,0 твин 80 - 1,0 24 - 2,0 КН 2 Р 4 2,0 472 - 0,2 4 4 Н 2 - 0,05 (рН 6,2-6,6). Затем из них отбирают по 1 мл, вносят в 10 мл стерильного физиологического раствора с 3,0 и выдерживают в термостате при 37 С в течение 30 и 60 мин. После этого пробы нейтрализуют и определяют в них количество выживших бактерий путем высева из соответствующих разведений в чашки Петри на агаризованную питательную среду. Подсчет количества выросших колоний производят на 3 сутки после термостатирования чашек при температуре 37 С. Результаты представлены в таблице 1. Таблица 1 Выживаемость молочнокислых бактерий при 3 Штаммы Содержание жизнеспособных клеток, КОЕ/мл исходное 40 мин при 3 60 мин при рН 3 1,2108 2,0107 2,7 х 107 9 9 3,010 2,3 х 10 2,5109 Как видно из представленной таблицы, при экспозиции в среде с 3 в течение 30 и 60 минут у 2 культуры .Б-3 происходит снижение числа жизнеспособных клеток на 1 порядок. В этих же условиях титр бактериальных клеток у культуры.Б-3/75 остался практически без изменений. Пример 2 Культуры . Б-3 и . Б-3/75 выращивают на питательной среде , описанной в примере 1, с добавкой 3 желчи в течение 24 часов при температуре 37 С. Затем в культурах определяют количество жизнеспособных бактериальных клеток путем высева из соответствующих разведений в чашки Петри на агаризованную среду . Подсчет количества выросших колоний производят на 3 сутки после термостатирования чашек при температуре 37 С. Результаты исследований представлены в таблице 2, из которых видно, что предлагаемый штамм молочнокислых бактерий намного превосходит противопоставляемый по устойчивости к желчи. Так,титр бактерий у противопоставляемого штамма при росте в питательной среде с 3 желчи на 5 порядков ниже,чем в среде без желчи, а у предлагаемого штамма Рост молочнокислых бактерий в питательной средес 3 желчи Штаммы Содержание жизнеспособных клеток, КОЕ/мл исходная питательная среда с добавкой 3 желчи 5,3108 9,0103 9 3,0 х 10 4,5 х 108 Пример 3 Культуры . Б-3 и . Б-3/75 выращивают в питательной среде , описанной в примере 1, в течение 24 часов при температуре 37 С. После этого в них определяют антагонистическую активность следующим образом. Чашки Петри с ровным дном помещают на горизонтальную поверхность. На водяной бане расплавляют в колбах стерильную плотную питательную среду следующего состава (г/л) бульон Хоттингера - 30,0 пептон - 5,0 натрий хлористый - 5,0 глюкоза - 10,0 агар-агар - 20,0 вода питьевая для доведения объема среды до 1 дм 3. После охлаждения до 45-50 С в агаризованную среду вносят взвесь тест-культуры из расчета 1,0 см 3 одномиллиардной взвеси на 100 см 3 среды. Содержимое колбы перемешивают и разливают в чашки Петри по 10 см 3 в каждую. В застывшей среде бором вырезают лунки,обычно по шесть. В приготовленные лунки вносят по 0,1 см 3 односуточной культуры молочнокислых бактерий. Затем чашки выдерживают около 3 ч при комнатной температуре для диффузии раствора в агар, после чего помещают в термостат при температуре 37 С на 16-18 ч. Измеряют диаметр зон подавления роста тест-культур. Для каждого образца рассчитывают среднее арифметическое значение не менее чем из трех определений. Результаты представлены в таблице 3. Таблица 3 Антагонистическая активность различных штаммов молочнокислых бактерий Тест-культуры 79/10/76-9-3316.5 Зоны подавления роста тест-культур, мм Как видно из представленной таблицы, штамм. Б-3/75 при росте в средепревосходит противопоставляемый штамм по величине антимикробной активности в отношении 79/1,, клинического штамма. Б-3/75 превосходит противопоставляемый .Б-3 по устойчивости к желчи и низкому значению , что позволяет ему лучше сохранять жизнеспособность при прохождении через желудочно-кишечный тракт. Кроме того, штамм обладает широким спектром действия и высокой антимикробной 3 микробиологии и вирусологии МОН РК под коллекционным номером ИМиВ В-27,предназначенный для включения в состав лечебнопрофилактических препаратов против желудочнокишечных заболеваний.