Способ реверсии Л-форм микобактерий туберкулеза

НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(21) 1786 (57) сносов гвввгсша лчюгм мико 2 ЛЮ 1284 БАКТЕРИ ТУБЕРКУЛЕЗА, включающий 4)201095 многократное пассирование суспензии(56) Муратов В.В. Изучение микобактериальной популяции Методом биологического пассажа// В сборнике трудов ЦНИИ туберкулеза, М., т.3 1, с.1 15-1 19. б 4)СПОСОБ РЕВЕРСИИ Л 4 ФОРМ 1 МИКОБАКТЕРИЙТУБЕРКУЛЕЗАПформ микобактерий через живой организи с одновременным контролем путем высева культуры на плотные йнта тельные среды и ммжроскопни мазков,от л и ч а ю щ и й с я .тем, что,с целью ускорения способа, пассирование проводят с интервалом в одни ъсутки через 7 дневные куриные эмбри оны, при этом суспензию Лформ микобактерий используют в дозе 010,2 мл на куриный эмбрион.Изобретение относится к ветеринарии в частности к изучени изменчивостн возбудителя туребкулеза.Целью изобретения является уско Арение способа.Способ осуществляют следующим образом.Верут 7-дневные куриные эмбрионы,путем овоскопирования определяют место расположения зародыша. Затем ссоблюдением правил асептики произво дят заражение эмбрионов в желточный мешок культурами Пформ микобактерий туберкулеза. Пастеровской пипеткой набирают культуру Л-форм с модифицированной среды Школьниковой и заправляют стерильный шприц. После чего скорлупу яйца с эмбрионом над воздушным пространством обрабатывают спиртом, в центре его прокалывают отверстие и прозводят заражение 0,192 мл в желточный мешок, расположенный с противоположной стороны от зародыша. Затем отверстие в скорлупе заливают парафином и зараженные эмб РИОНЪ ПОМЕЩЗЮТ В термостат С темпе ратурой 35-37 С и влажностью 60-65. По истечении одних суток отверстие над воздушной камерой вскрывают,пастеровской пипеткой набирают часть желтка для приготовления мазков и окраскних по Циль-Нильсену а также высева на питательные среды Левенштейна-Иенсена. Этим же желтком заражают свежие 7 дневные эмбрионы,в той же дозе. И так в последующем до получения ренерсии, которая наступает, начиная с 3-4-го пассажа. Обнаруживают ее в окрашенных мазках,где выявляются киспотоустойчнвые палочки. Рост типичных колоний возбудителя появляется на 12-14-е Сутив зависимости от вида микобактерий туберкулеза.П р и м е р 1. Взята культура Л-форм микобактерий, выращенная на полужидкой среде Шкопьниковой в модифнкацни И. Р. Дорожковой, выделенная из материала от животных. При фазовоконтрастной микроскопии нативныш Пре паратов обнаружены микроструктурные элементы Л-форм в виде скоплений сфе 4 ЩИрическнх вакуолизированньж элементов,шаровидных тел и однородной зернистой массы. С целью получения реверсин в желточный мешок 7 дневных куриных эмбрионов вводят 0,1-0,2 мл Л-культуры. Заражение и пассаж производятпо описанной методике. Через сутки из желтка зараженного эмбриона готовят препарат и окрашивают по методу ЦильНильсена. Микроскопия препаратапоказывает наличие скоплений сферических вакуопизированнык элементов и зерннсты масс, окрашенных в синий цвет. При микроскопии мазка,еприго товленного из желтка эмбриона 2-го пассажа, просматриваются некнслото устойчивые палочки различных размеровсферических элементов. микроскопией мазка из эмбриона 3-го пассажа устанавлиъают наличие отдельных кислотоустойчивын палочек в смеси с некислотоустойчивыми. В препаратах 4-го пассажа кислотоустойчивость хорошо вы ражена. Из желтка этого эмбриона производят высевы на среду Левенштейна Иенсена и через 14 сут наблюдаютрост типичным колоний микобактерий.П р и м е р 2. культурой Л-форм микобактерий, выделенной на лнфатнческих узлов крупного рогатого скота,заражен 7-дневный куриный эмбрион.В окрашенных препаратах первого пассажа просматривают кислотоустойчивую зернистую массу и скопления шаровидных тел, окрашенных в синий цвет.При микроскопии препарата из эмбриона 2-го пассажа наряду с кислотоусточивой зернистой массой обнаруживают некислотоустойчивые нити. При 3 м пассаже обнаРУены кислотоустойчивые палочки н нити в смеси с некислотоустойчивыми. При 7 о-м пассаже установлено наличие кислотоустойчивых бактерий. При посевежелтка из эмбриона 4-го пассажа на 20-е сутки получен рост типичных колоний микобактерийиспользование изобретения позволяет ускорить сроки получения ревертан товл-форм микобактерий туберкулеза.ВерсткаКа 3 патент,исполнитель Ь 1 ЬГорбунов Редактор Л.В.Сухарева Ответственный за выпуск Э.3. Фаизова