Способ приготовления вакцины против катаральной лихорадки овец

(51) А 61 К 39/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КАТАРАЛЬНОЙ ЛИХОРАДКИ ОВЕЦ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и используется в приготовлении вакцины для профилактической иммунизации против катаральной лихорадки овец. Способ приготовления вакцины включает культивирование вируса катаральной лихорадки овец в суспензионной культуре клеток почки сирийских хомячков (ВНК-21/17) в реакторах(ферментерах) при температуре 37,00,5 С в течение 48-72 час и сбор вирусной биомассы путем охлаждения при 42 С, инактивацию вируса димерэтиленимином и сорбцию на гидрате окиси алюминия. Приготовленный данным способом препарат по своим физическим и биологическим характеристикам пригоден для профилактической вакцинации овец и сохраняет свои иммунобиологические свойства при температуре хранения (42)С в течение 1 года.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Абдураимов Ергали Орынбасарович Ершебулов Закир Джаппарович Кулманбетов Куат Датенбаевич Таранов Дмитрий Сергеевич Жугунисов Куандык Даулетбаевич Хайруллин Берик Мухитович(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(56) Балышева В.И., Недосекова В.В., Жестерев В.И. и др. Изучение иммуногенности экспериментальных серий инактивированной вакцины против блютанга. Сборник трудов ВНИИВиМ, 2002,с.96-98 22259 Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и вирусологии, используется при изготовлении биопрепарата для профилактической иммунизации овец против катаральной лихорадки. В настоящее время в мире разработаны различные виды инактивированных и живых вакцин против катаральной лихорадки овец, которые применяются для предупреждения распространения заболевания среди овец, коз и крупного рогатого скота. Все разработанные вакцинные препараты против катаральной лихорадки овец выращиваются в культурах клеток, в зависимости от производителя для инактивации вируса используются различные инактиванты формалин, тиомерсал, теотропин,бетапропиолактон и др. В качестве адъюванта используется гидрат окиси алюминия. В последнее время в связи с возможной реверсией вируса в составе живых вакцин, большое признание получают инактивированные препараты в силу их высокой эффективности и безопасности. Известен способ приготовления вакцины против катаральной лихорадки овец (Балышева В.И.,Недосекова В.В., Жестерев В.И.и др. Изучение иммуногенности экспериментальных серий инактивированной вакцины против блютанга. Сборник трудов ВНИИВиМ, 2002. 96-98), с использованием культуры клеток почки сибирского горного козерога(ПСГК-60). Данная инактивированная вакцина в организме животных после введения создает иммунитет на 21 сутки образованием вируснейтрализующих антител в титрах 12-14. Задачей заявленного изобретения является предупреждение распространения инфекции среди овец и создание иммунитета у восприимчивых животных проведением вакцинации. Проведение иммунизации животных позволит предупредить проникновение в республику экзотической опасной инфекции и предотвратить нанесение экономических потерь слагаемых от ликвидации последствий заболевания овец и коз и не допустить дальнейшее распространение заболевания среди животных. Отличительной особенностью предлагаемого способа приготовления вакцины является использование суспензионной линии почки сирийских хомячков (ВНК-21, клон 17) с выходом вирусного урожая в 2 раза больше по сравнению существующим методом и использование инактиванта димерэтиленимина. Способ приготовления вакцины состоит из следующих этапов культуру клеток ВНК-21/17 инкубируют в условиях суспензии на установках реакторного типа. При достижении концентрации клеток не менее 1,0 млн/см 3 их инфицируют вирусом в дозе 0,1-0,2 ТЦД 50/см 3. Инфицированные клетки инкубируют в течение 2-3 сут при постоянном перемешивании. Репродукцию вируса контролируют путем ежедневного взятия пробы и подсчета живых клеток. При поражении не менее 80 живых клеток суспензию переливают в другой сосуд, охлаждают при 42 С и хранят до использования. Приготовленная по данной технологии вирусная суспензия имеет биологическую активность не ниже 107,0 ТЦД 50/см 3. На следующем этапе вирус инактивируют 8 раствором димерэтиленимина в конечной концентрации 0,1 при 37,00,5 С в течение 72 час. После этого проводят сорбцию инактивированного вируса 6 раствором гидрата окиси алюминия, в конечной концентрации 10 мг/см 3 при 42 С в течение 24 час при регулярном (через каждые 6 час) перемешивании. По окончании удаляют верхнюю треть суспензии и к осадку добавляют, свежую порцию инактивированного вируса до первоначального объема, оставляют еще на 24 час. Затем в суспензию вносят сапонин в концентрации 5 мг/см 3, тщательно перемешивают и разливают во флаконы, закрывают стерильными резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками. Авирулентность. Проверяют по окончании времени инактивации введением 4 новорожденным мышам интрацеребрально в объеме 0,01 см 3 суспензии. Подопытные новорожденные мышатасосуны остаются живыми без проявления патологических признаков в течение 5 сут наблюдения. Безвредность. Вакцина при внутримышечном введении овцам в объеме 4 см 3 (4-кратное превышение) не вызывает каких-либо отклонений в физиологическом состоянии животных в течение 14 суток наблюдения. Иммуногенность. При внутримышечной иммунизации овец в объеме 1 см 3 вакциной невосприимчивость к заражению вирулентным вирусом наступает через 21 сутки и сохраняется не менее 12 месяцев при более 90 защите вакцинированных животных. Устойчивость. При температурах 371 С и 221 С вакцина сохраняется без существенного снижения активности в течение 3 и 5 суток соответственно, при 41 С вакцина сохраняется на протяжении 1 года. Предлагаемая технология приготовления вакцины прошла внутриинститутские комиссионные испытания и рекомендована для профилактики катаральной лихорадки овец. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ приготовления вакцины против катаральной лихорадки овец, включающий культивирование вируса в культуре клеток, инактивацию вируса и сорбцию на гидрате окиси алюминия,отличающийся тем, что инактивацию вируса проводят 8 раствором димерэтиленимина в конечной концентрации 0,1.