Способ культивирования вируса катаральной лихорадки овец роллерным методом

(51) 12 5/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ показателями вирусной репродукции(биологическая и антигенная активности) монослой клеток ПС одно-двухсуточного возраста,выращенных в круговых 3,0 л сосудах роллерным методом инфицировали вирусом катаральной лихорадки овец из расчета 0,1 ТЦД 50/кл. В качестве поддерживающих использовали среды ПСП с содержанием 2-ной нормальной сыворотки крови КРС, инактивированной при 56 С в течение 30 мин. Инкубацию инфицированных сосудов с культурой клеток проводили при 37 С. Состояние клеточного монослоя в сосудах ежедневно контролировали под микроскопом с целью обнаружения выраженных, характерных для вируса катаральной лихорадки овец цитопатических изменений и прекращали на 4 сут культивирования при поражении монослоя клеток на 80-90. Культивирования вируса катаральной лихорадки овец роллерным методом по экономическим показателям, а также по производительности и воспроизводимости результатов является перспективной для массового получения биологического сырья,необходимого при разработке диагностических и профилактических препаратов против вируса катаральной лихорадки овец.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Абдураимов Ергали Орынбасарович Ершебулов Закир Джаппарович Таранов Дмитрий Сергеевич Жугунисов Куандык Даулетбаевич Кошеметов Жумагали Каукарбаевич Нурабаев Сергазы Шуратбаевич Ажибаев Азамат Жасуланович(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(56) Балышева В.И., Сливко В.В., Жестерев В.И., и др. Культивирование вируса блютанга в культурах клеток животных. Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук, 2002,6, с. 46-48(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСА КАТАРАЛЬНОЙ ЛИХОРАДКИ ОВЕЦ РОЛЛЕРНЫМ МЕТОДОМ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и используется при изготовлении диагностических и профилактических препаратов против вируса катаральной лихорадки овец. Для получения культуральной суспензии вируса катаральной лихорадки овец с высокими Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии, и используется в приготовлении инактивированной вакцины против вируса катаральной лихорадки овец и диагностического набора. Известен 4 серотип вируса катаральной лихорадки овец (В.И.Балышева, В.В.Сливко,В.И.Жестерев и др. Культивирование вируса блютанга в культурах клеток животных. Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук,2002. 6,46-48),полученный путем культивирования вируса в круговом монослое перевиваемой культуре клеток ПСГК-60 (почки сибирского горного козерога), с биологической активностью 1065 ТЦЦ 50/см 3. Наблюдения проводилось в течении 7-8 суток. Иммунитет после первого введения инактивированной вакцины из этого серотипа проявляется на 21 сутки в виде образования вируснейтрализующих антител в титрах 116. Недостатком данного аналога является длительный процесс культивирования вируса в культуре клетки. Отличительной особенностью данного метода культивирования вируса является сокращение продолжительности культивирования,выбор чувствительной культуры клеток почки сайги (ПС),наработка активного вируссодержащего материала,а так же получение больших объемов вируссодержащей суспензии за короткий промежуток времени. Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является разработка способа культивирования вируса роллерным методом для получения больших объемов вируссодержащей суспензии за короткий промежуток времени, используемую в дальнейшем для приготовления инактивированной вакцины. Для получения культуральной суспензии вируса катаральной лихорадки овец с высокими показателями вирусной репродукции(биологическая и антигенная активности) монослой клеток ПС одно-двухсуточного возраста,выращенных в круговых 3,0 л сосудах роллерным методом инфицировали вирусом катаральной лихорадки овец из расчета 0,1 ТЦЦ 50/кл. В качестве поддерживающих использовали среды ПСП с содержанием 2-ной нормальной сыворотки крови КРС, инактивированной при 56 С в течение 30 мин. Инкубацию инфицированных сосудов с культурой клеток проводили при 37 С. Состояние клеточного монослоя в сосудах ежедневно контролировали под микроскопом с целью обнаружения характерных для вируса катаральной лихорадки овец цитопатических изменений и прекращали на 4 сут культивирования при поражении монослоя клеток на 80-90. Выращивание вируса блютанга в роллерных культурах, в сравнении со стационарными, обладает более высокой производительностью за счет использования в процессе культивирования клеток всей внутренней поверхности сосудов. Кроме того,перемещение питательной среды по монослою клеток способствует удалению с поверхности клеток продуктов метаболизма, а также постоянной аэрации культуры за счет кислорода воздушной фазы. Таким образом, культивирования вируса КЛО роллерным методом по экономическим показателям,а также по производительности и воспроизводимости результатов является перспективной для массового получения биологического сырья,необходимого при проведении исследований по разработке диагностических и профилактических препаратов против вируса КЛО. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ культивирования вируса катаральной лихорадки овец роллерным методом, включающий использование 4-го серотипа вируса блютанга,отличающийся тем, что культивируют вирус за короткий промежуток времени, используют линии клеток почки сайгака, выращенных в роллерных условиях.