Способ суспензионного культивирования вируса катаральной лихорадки овец

(51) С 12 5/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и вирусологии,может использоваться для наработки вирусной биомассы при приготовлении диагностических и профилактических препаратов против КЛО. Объектом изобретения является способ культивирования вируса катаральной лихорадки овец в культуре клеток почки сирийских хомячков в суспензионных условиях для наработки большого количества вирусной биомассы, используемой в приготовлении диагностических и профилактических препаратов. Способ культивирования вируса катаральной лихорадки овец в суспензионной культуре клеток при постоянном перемешивании с определенно заданной скоростью включает культивирование культур клеток почки сирийских хомячков (ВНК 21/17) в реакторах (ферментерах), инфицирование клеток вирусом, инкубирование при температуре 37,00,5 в течение 43-72 час и сбор вирусной биомассы путем охлаждения при 42 С. Наработанная указанным способом вирусная суспензия имеет высокие титры и пригодна для использования в приготовлении диагностических тест-систем и профилактических препаратов.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Абдураимов Ергали Орынбасарович Ершебулов Закир Джаппарович Кулманбетов Куат Датенбаевич Таранов Дмитрий Сергеевич Жугунисов Куандык Даулетбаевич Саметова Жанна Жумабековна Кипшакбаева Назым Бейсехановна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(56) Балышева В.И., Сливко В.В., Жестерев В.И. Культивирование вируса блютанга в культурах клеток животных // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук, 2002,6, с.46-48(54) СПОСОБ СУСПЕНЗИОННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСА КАТАРАЛЬНОЙ ЛИХОРАДКИ ОВЕЦ 22285 Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и вирусологии,может использоваться для наработки вирусной биомассы при приготовлении диагностических и профилактических препаратов против КЛО. Известен способ культивирования вируса катаральной лихорадки овец в культурах клеток почки овцы (ПО), сайгака (ПС), сирийских хомячков(ВНК-21), сибирского горного козерога (ПСГК-60) и свиньи (ППК-66 б), в стационарных, роллерных условиях в культуральных сосудах и на микроносителях (сферические шарики диаметром от 100 до 250 мкм) при постоянном их перемешивании(Балышева В.И., Сливко В.В., Жестерев В.И. Культивирование вируса блютанга в культурах клеток животных // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук, 2002.6. с.46-48). Указанные стационарный и роллерный способы культивирования позволяют нарабатывать клеточную и вирусную биомассу на ограниченной поверхности культуральных сосудов, что является трудоемкими и главным их недостатком. Способ культивирования на микроносителях при их постоянном перемешивании хотя является близким аналогом заявленного изобретения, также имеет существенные недостатки к которым относятся использование дополнительных дорогостоящих микросфер, которые в свою очередь имеют также ограничения в поверхности,дополнительные трудности при их перемешивании в связи с их массой они постоянно оседают на дно сосудов и слипаются, что в конце приводит удорожанию стоимости получаемой вирусной биомассы. Способ суспензионного культивирования позволяет культивировать отдельные изолированные клетки во взвешенном состоянии и достигать их концентрации до нескольких миллионов на см 3, что позволяет в конечном итоге получать высокоактивную суспензию, так как уровень накопления вируса зависит от концентрации клеток, поэтому, больше чем клеток,тем выше урожай вирусной биомассы. Отличительной особенностью предлагаемого способа культивирования является использование суспензионной линии почки сирийских хомячков(ВНК-21, клон 17), с выходом вирусного урожая в 2 раза больше по сравнению с существующим способом. Суспензионное культивирование вируса КЛО проводиться следующим образом. В установки реакторного типа вносится суспензия клеток ВНК 21 с посевной концентрацией 500-550 тыс/см 3. Клетки культивируют при постоянном перемешивании среды при температуре 37,00,5 С в течение 48 часов. Затем после подсчета клеток добавляют необходимое количество свежей среды для того, чтобы получить исходную концентрацию клеток и, вновь инкубируют. Данную операцию повторяют до получения необходимого объема суспензии с концентрацией клеток в конечном объеме не менее 1 млн./см 3. При достижении указанной концентрации перемешивание останавливают на 30-40 мин для осаждения клеток на дно реактора, удаляютростовой среды и вносят, свежую порцию поддерживающей среды, в которой разведен вирус в соотношении от 1100 до 11000. Инфицированные клетки инкубируют в течение 2-3 сут при постоянном перемешивании. Репродукцию вируса контролируют путем ежедневного взятия пробы и подсчета живых клеток. При поражении не менее 80 живых клеток суспензию переливают в другой сосуд, охлаждают при 42 С и хранят до использования. Приготовленная по данному способу вирусная суспензия имеет биологическую активность не ниже 107,0 ТЦД 50/см 3. Предлагаемый способ культивирования вируса прошел комиссионную апробацию и рекомендован для наработки вирусной биомассы при приготовлении диагностических и профилактических препаратов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ суспензионного культивирования вируса катаральной лихорадки овец,включающий культивирование клеток в реакторах,инфицирование их вирусом и инкубирование,отличающийся тем, что проводят культивирование культуры клеток почки сирийских хомячков (ВНК 21/17) и сбор вирусной суспензии путем охлаждения при 42 С.