Способ культивирования вируса чумы мелких жвачных животных на микроносителях

(51) С 12 5/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСА ЧУМЫ МЕЛКИХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ НА МИКРОНОСИТЕЛЯХ(57) Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и вирусологии, может быть использовано для наработки вирусной биомассы при приготовлении диагностических препаратов против чумы мелких жвачных. Способ культивирования вируса чумы мелких жвачных животных в культуре клеток на носителях при постоянном перемешивании с определенно заданной скоростью включает культивирование культур клеток почки молодого бычкана поверхности носителей до формирования плотного клеточного пласта,инфицирование клеток вакцинным штаммом -45 МК, инкубирование при температуре 37,00,5 С в течение 7-8 суток и сбор вирусной биомассы обработкой 2 М . Приготовленная таким образом вирусная суспензия пригодна для использования в приготовлении диагностических тест-систем.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Абдураимов Ергали Орынбасарович Ершебулов Закир Джаппарович Кулманбетов Куат Датенбаевич Таранов Дмитрий Сергеевич Жугунисов Куандык Даулетбаевич Саметова Жанна Жумабековна Кипшакбаева Назым Бейсехановна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан 22179 Изобретение относится к ветеринарной биотехнологии и вирусологии, может быть использовано для наработки вирусной биомассы при приготовлении диагностических препаратов против чумы мелких жвачных. Известен способ культивирования вируса чумы мелких жвачных животных в культуре клеток почки ягнят (ПЯ), в стационарных, роллерных условиях в культуральных сосудах (Предварительный патент 16916 Способ приготовления вакцины против чумы мелких жвачных животных). Указанные стационарный и роллерный способы культивирования позволяют нарабатывать клеточную и вирусную биомассу на ограниченной поверхности культуральных сосудов, что является весьма трудоемким и главным их недостатком. Недостатками этого способа культивирования является фиксированный объем получаемой вирусной суспензии и связанные с этим трудности для наработки достаточного количества биомассы. Отличительной особенностью предлагаемого способа культивирования является то, что выход вирусного урожая примерно в 2-3 раза больше по сравнению с существующим способом. Заявленное изобретение направлено на решение задачи по одномоментной наработке вирусной биомассы в большом объеме для его дальнейшего использования при изготовлении диагностического препарата. Получение вирусной биомассы в большом объеме за короткое время, позволит сократить экономические затраты и время для приготовления тест-системы для диагностики инфекции. Культивирование вируса чумы мелких жвачных животных проводиться следующим образом. Выращивание культуры клеток почки молодого бычкапроизводится на микроносителях в условиях суспензии на установках реакторного типа или в биологических мешалках. Посевная концентрация клеток составляет 300-450 тыс/см , на каждый дм 3 клеточной суспензии вносят 1,0 г микроносителей. Клетки культивируют при постоянном перемешивании среды со скоростью 4050 об/мин при температуре 37,00,5 С в течение 48 часов. Затем перемешивание останавливают на 30 мин для осаждения микроносителей с клетками,удаляют 2 3 ростовой среды. Для инфицирования клеток вносят свежую порцию поддерживающей среды, в которой разведен вирус в концентрации 0,1-0,2 ТЦД 50/см 3. Инфицированные клетки инкубируют в течение 7-8 сут при постоянном перемешивании. Пораженные вирусом клетки с поверхности микроносителей снимают 2 М раствором. Полученную суспензию подвергают однократному замораживанию при температуре минус 20 С с последующим оттаиванием при 20 С. Приготовленная по данной технологии вирусная суспензия имеет биологическую активность не ниже 105,0 ТЦД 50/см 3. Способ культивирования на микроносителях при постоянном перемешивании позволяет достигать концентрации клеток до нескольких миллионов на см 3, что позволяет в конечном итоге получать высокоактивную суспензию, так как уровень накопления вируса зависит от концентрации клеток,поэтому, чем больше клеток, тем выше урожай вирусной биомассы. Предлагаемая технология культивирования вируса прошла комиссионные испытания и рекомендована для наработки вирусной биомассы при приготовлении диагностических тест-систем. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ культивирования вируса чумы мелких жвачных животных на микроносителях,включающий культивирование вируса в клетках в стационарных и роллерных условиях, отличающийся тем, что при культивировании вируса используют клетки, выращенные на искусственных носителях инкубируемые в биореакторах во взвешенном состоянии при постоянном перемешивании.