Штамм – А/Алматы/331/06(H7N7) вируса гриппа человека, используемый для приготовления диагностических прпаратов

(51) 12 7/00 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ также для приготовления диагностических и вакцинных препаратов против гриппа. Задачей изобретения является получение штамма А/Алматы/331/06, позволяющего его использовать для изучения особенностей первичной структуры генома, а также для приготовления диагностических и вакцинных препаратов против гриппа. Вирус репродуцируют в системе куриного эмбриона при оптимальной (37 С) температуре до инфекционного титра 9,5 ЭИД 50/0,2 мл. Аллантоисная культура выделенного штамма А/Алматы/331/06 имеет гемагглютинирующую активность (в пределах 1512/мл),допустимая длительность хранения при -20 С -2 года. Инфекционная активность изолята А/Алматы/331/06 методамина культуре клеток МДСК составляла 6,0 ЭИД 50/0,2. БОЕ изолята А/Алматы/331/06 на культуре клеток МДСК составила 8,4106. Штамм депонирован в коллекции микроорганизмов ДГП НИИПББ НЦБ МОН РК М-16-08/Д. Штамм А/Алматы/331/06 также может быть использован для производства диагностических препаратов, предназначенных для определения циркулирующих вирусов гриппа в природных популяциях.(72) Икранбегийн Риза Глебова Татьяна ИвановнаБаймаханова Байкен Бекарыстановна Шаменова Мира ГалаутдиновнаБекишева Айгуль Нурпапаевна Ксетаева Гульзакира Куралбековна Утегенова Ильмира Сеитбековна Тастанбеков Батыр Жунусович Исмаилова Юлия Сиязбековна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Центр биологических исследований Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММ - А/АЛМАТЫ/331/06(Н 77) ВИРУСА ГРИППА ЧЕЛОВЕКА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для научных целей, а 22286 Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано для научных целей, а также для приготовления диагностических и вакцинных препаратов против гриппа человека. Известен штамм //2004, выделенный от больного и отличается низкой патогенностью( .,В.,..77// .-2004.-.363.-.587593.).А также известен вирус ///1902(77), который отличается от А/Алматы/331/06 тем, что является высокопатогенным для домашних птиц, что не приемлемо для приготовления диагностических препаратов., В.,..77// .-2004.-.363.-.587-593.). Задачей изобретения является получение нового штамма А/Алматы/331/06, позволяющего его использовать для изучения особенностей первичной структуры генома, а также для приготовления диагностических и вакцинных препаратов против гриппа. Получен штамм А/Алматы/331/06 (77),обладающий оригинальным антигенным составом. Хранится в коллекции микроорганизмов ДГП НИИПББ НЦБ МОН РК М-16-08/Д. Предлагаемый вариант А/Алматы/331/06 (77) представляет собой вирус, РНК - относится к семейству , роду,серотипуА сероподтипу 77,выделен из носоглоточного смыва в феврале 2006 г.,от больного ребенка поступившего 7.02.06 в 3 отделение 1 ГКДБ с диагнозом ОРВИ, острый бронхит с обструктивным синдромом (возраст ребенка 9 месяцев), идентифицирован в РТГА с набором диагностических сывороток к вирусу гриппа А. Вирус репродуцируют в системе куриного эмбриона при оптимальной (37 С) температуре до инфекционного титра 9,5 ЭИД 50/0,2 мл. Аллантоисная культура выделенного штамма А/Алматы/331/06 имеет гемагглютинирующую активность (в пределах 1512/мл). Инфекционная активность изолята А/Алматы/331/06 методамина культуре клеток МДСК составляет 6,0 ЭИД 5 О/0,2. БОЕ изолята А/Алматы/331/06 на культуре клеток МДСК составила 8,4106. Допустимая длительность хранения при -20 С - 2 года. Молекулярно-генетическая характеристика А/Алматы/331/06 проведена в лаборатории Молекулярная генетика птичьего гриппа Университета Мэриленд, США. Идентификация выделенных изолятов проведена методом ПЦР анализа с использованием универсальных и специфических праймеров для 8 генов вируса гриппа А (фиг. 1). Изолят А/Алма-Ата/5/98 по сравнению нуклеотидных последовательностей на близок к изоляту/1902 (77) с 97,2, 94,8 и 94,5 процентами гомологии, соответственно. Антигенная структура .Результаты МИФА, РИД,РТГА и РПНА с использованием набора референссывороток к вирусам гриппа с подтипами гемагглютининов Н 1-Н 14 и нейраминидазы 1-10, представленные в (таблице 1), показывают, что изолят является вирусом гриппа А с гемагглютинином Н 7 и с сероподтипом нейраминидазы 7. Спектр гемагглютинации. Вирус имеет гемагглютинирующую активность с эритроцитами кур и человека 0 группы. Терморезиситентность. В отличие от обычного лабораторного штамма исследуемый вирус отнесен к термостабильным, изолят А/Алматы/331/06(77) оказался более термоустойчивым в сравнении эталонным штаммом ///15/30,а его нейраминидазная активность снижалась в 2 раза при прогревании при 56 С, а при 61 С,наоборот повысилась в 1,6 раз. Выделение вируса гриппа было подтверждено электронно-микроскопическим методом, который показал наличие характерных вирусных частиц(фиг. 2). Лабораторный штамм вируса гриппа характеризуется размерами 80-120 нм, преимущественно округлыми формами. Они равномерно покрыты шипиками - пепломерами гликопротеидов. А изолят вируса А/Алматы/331/06 характеризуется в первую очередь отсутствием четко видимых шипиков - пепломеров . Препарат содержит агрегаты флеоморфных частиц размерами от 20 до 200 нм. К выделенному изоляту А/Алматы/331/06(Н 77)получена иммунная кроличья сыворотка. Схема иммунизации. Иммунную сыворотку получали путем двукратной иммунизации кроликов вирусной суспензией 1. Первая иммунизация подкожно с полным адъювантом Фрейда 150 мкг белка 2. Вторая иммунизация подкожно и внутривенно по 150 мкг белка с трех недельным интервал 3. Титр иммунной сыворотки заявляемого штамма в РТГА с гомологичным антигеном составляет 1640. Таким образом, в аллантоисном изоляте предлагаемого штамма присутствуют вирусные частицы, сходные с эталонным штаммом вируса гриппа птиц, но отличающийся от них значительной хрупкостью, меньшей электронной плотностью,отсутствием видимых поверхностных шипов,чрезмерным агрегированием. Судя по антигенной формуле поверхностных антигенов, которые характерны для вирусов гриппа человека А/Алматы/331/06 низкопатогенный изолят вируса гриппа с сочетанием гемагглютинина Н 7 и нейраминидазы 7 впервые выделен на территории Казахстана в г.Алматы от людей, является эпидемиологическим, контагиозным природным изолятом. 22286 Таблица 1. Серологическая характеристика штамма А/Алматы/331/06 (77) Антигенное свойство в Вирус МИФА РИД РТГА РПНА А/Алматы/331/06 Серотип А Серотип А Сероподтип Н 7 Сероподтип 7 Примечание С диагностическими сыворотками к вирусам гриппа с подтипами гемагглютинина 2-14 и нейраминидазы 2-9 получены отрицательные результаты. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм - А/Алматы/331/06(Н 77) вируса гриппа человека,семейства ае,рода микроорганизмов ДГП Научно-Исследовательский Институт Проблем Биологической Безопасности Научный Центр Биотехнологии МОН РК под номером М-16-08/Д,используемый для приготовления диагностических препаратов.