Способ получения вещества, обладающего противоклещевой и глистогонной активностью

Изобретение относи гся к микробиологической прошнленности и касаетсяИзвестен способ получения вещества В-П, обладающего инсектицидный и противоклецевой активностью, с испольоованиеи шторма Зсгерссяпусез 8415известен также способ получении вещества В-М ( мильбеиицина) обладаЩего также и гпистогонной активностьо с использованием того не продукт та 2Однако известные способа не обеспечивает получения внести ООВНУП 1Поставленная цела достигается так, что согласно способу получение ве цества, о 6 ледавцего противоклецевогт и глистогонной активностью Формулыот- на питательной, среде, соперницей источники-углерода- и аорта при 22-й 3 Пс с последите-г виделся-пни целесого продукта на культуральной жидкости,концентрировании и- очисткой.При втои внрецнввние осуществлю-г на. среде, содержащей в каваестве основного источника углерода гпжоау в концентрации 6-82 и дополнительного. та - смесь внуки соевых бобов-крупногопомола 0,551 и снятого молока 1-22. Кроме того, концентрирование и очистку проводят до содержанки цем вого продукта 25-502.Вещество, обладающее противоклег щеаой и глистогонной активностью,получают путем культивирования штамиа-Зсгерсоппусез В-дН-Ньб, Этот штамм депонироеан в Исследовательском ин 1СТИЧТФ ферментации. Агентств Посад ленных Наук и- Текнологищнинистерстеа Внешней торговли и промышленности, Япония, под номером 1 д 38, а также под наименованием Бикокен-кинки 1163.Вноаинваот штамм в питательной средгэ СОДЧЗРИЦой источники усваиваеиого УГМРОДЭ И Усваиваемого-авота. К нсТОЧНИКЭН Углерод относятся глюкоза,68880038. Крахмал, глицерин, экстракт солода, молоза и несло соевьк бобов. предпочтя-втоптан источником углерода является глокоаа, используемая в ко-глюкозой используют дополнительные . источники углерода - лактозу, мальтоэу- и крахмал моиса в количестве 0.52.02 (вот/об). Чтобы поддерживать величину рН- постоянной, в процессе выращивания добавляют избыточное количество гткоен.К источникам азота относятся мука крупного помола соевых бобов, зерна тенты, мясной экс-тракт, понтон, свежие дротики, крутой наисовьй. лисхер, сульфат аннония инитрат аннонии В-качестве источника азота испогцьауот смесь. муки соевых добра крупного - помола 0 , 5-1 О снятого поиске 1 -, 0-2, О . При необходимости, о средугдгшенюацичачия ктлътуръг добавите аминокислота (например глицин или аргинин. -Пръг-необходиюсти добавляют так яке-неорганические соли. такие как карбонат - кальция, хлорид Натрий. НЛО вид. калии или эосеатнь- нит также добдщштьдругиц органические или неорганические материала, которые. способ- струит рост НИКВООРГт-ддддд. И виске рант-обмывание вецества. вцсокщщнход. вещества получают при катамаран-сии- Среда КОТОВ 00 держит 6-81 тткоан, 0,542 лактозы и/нли ушки соевыибобов КОННОГО 00 мола и 14192.02 снятого нотка. . Вырщиванпе осуществляет в аэрбб ник устами при ЗЕ-ЗЪРС. предтечитепьно прич 28. Нексииальной Про иэеодительиости вещества достигают. спустя 5 ю дн после начала выращивания, которое осуществляли либо при встрякииъии, либо в резервуаре с ненецкой, Количество вещества в бульоне опредеппот следящим образом. Известное количество, например 3 г, бульона для. выращивания купьтут рн. заливают в небольшую пробирку, в3 которую добавляют 10 мл ацетона, Затем смесь экстрагируют при встряхивании и подвергают центрифугированию. В образующийся сверку раствор добавляют ацетон до общего объема 10 мл. П 0 ЛУченный в результате.раствор помещают на заранее подготовленное место на пластинке для тонкослойНОЙ ХВ 0 НаТ 0 ГВаФии силикагель, например Кизельгель 60 Р 25 д 7 в количестве, например, 10-20 нл. Затем пластинку проявляют а течение д ч смесью 1882 Соб.) диоксана.и тетрахлорида углерода. Пробу-исследуют при Помощи сканиРУЮЩего устройства или тонкослойной хроматографии в области с длиной волны 2 д 5.Вещество выделяют из бульона для ВНРЗЩИБВННЯ культуры, используя наТупальный адсорбент (например, акти ВИВ 0 Ванннй углерод, двуокись алюми-.ния или силикагель), синтетический адсорбент Кналример, лианен НР-20),абсорбент (например, Авицеп), ионообменную смолу, ионообменный гелег вый фильтр. Выделение осуществляют следующим образом. - Бульон для ферментации фильтруют С использованиемуск 0 рителя ФИПЬТПО вания (такого.квк диатомовая-земля) с тем, чтобы получать фильтровальную ЛЗПЗЩКУ, КОТОПУЮ ЗЗТВМ подаергапт зкстрагированию метанолом. Затем в водный метановый раствор добавляют воду и полученный в результате раствор экстрагируют гексаном. Фазу гексане отделяют и концентрируют выпариванием при пониженном давлении,в результате чего образуется маслянистый материал, содержащий искомое вещество. Этот маслянистый Материал помещают в колонну, содержаиую.силикегель (например, Вакогель С-2001.и элюируют, например, смесью 9525 (об) гексане и ацетона с тем,-чтобы собрать фракции, содержаЩИеИСК 0 М 09 вемество. эти фракции концентрируют выпариванием при пониженном давлении причем снова образуется маслянистый материал, который растворяется в небольщом количестве метанола, и добав.ляют в колонну из материала.Сефадекс ЬН-20, затем зпюируот нетанолом. Собирают Фракции, содержащие искомое ВЕЩВСТОО ВЭСТВОВИТВЛЬ УДЗЛЯПТ И ОС таток растворяют в небольшом количестве метанола. добавляют воду и смесь выдеряивают при комнатной температу 4Ре- В Везультате получают вещество ПВНДС ЦНН ИЛИ пузырьков, КОТОБЬВ после разрушения дают аморфный порошок.ПОСЛЕ ПВПЕКДИСТЗЛПИЗОВНБВНИЯ ИЗ смеси 201( об.) гексане и этилацетата вещество получают в виде небольшихочистки вещества можно проводить на любой стадии и использовать неочищенный.продукт. который содержит смесь мильбемицинов и искомое вещество. Еспи смесь,.содержащая два или-более таких веществ, используется без полного разделения, то достаточно, чтобы полученный ь результате продукт давал 100 эффект при применении против клещей с концентрацией 5 ч./млн. Содержание вещества в неочищенном продукте составляет предпочтительно. не менее 25-50 вес.2.Полученное вещество обладает высокой противоклецевой при применении против взрослых клещей и яиц, а также глистогонной активностью.Вещество может быть применено поотив такикклещей, как клещик паутинный двупятнистый (ТесгаЬуспн 5 игкгеее), европейскийкрасный клещ (Рапопуслоз и 1 т 1), цитрусовый красный клецик (Рапопусли 5 сгг) и клещи видов Ац 1 ор 5 или дсо 1 и 5, которые паразитируот на фруктах, растениях и цветах. Вещество такйе обладает активностью против-клещей вида 1 к оо 1 баэ 1 ооегта пуззтоаз и агеорТоае,-КОТОВНВ Папа зитируют на животных. Вещество обладает также енсокойактивиостью противтаких эктопаразитовкак Оевсгив,ЬосЕ 1 га Нуробегта, Ва 5 цгорпЕ 1 и. блох, вшей и т.д., а также насекомых(такихкак тараканы или муки) и некоторых других видрв насекомых, явля.ющикся вредителями садового и сельского хозяйства, такик.как тля и личинки насекомых других Ьергоорвега. Кроме того, вещество является активным при применен и против круглых червей, таких ка черви вида НеоЕ ооцуле, и клещей. которые обитают якпочве.При использовании против клещей или насекомых вещество предпочтительно разбавляют носителем с целью получения композиций, таких как порошки,крупные порошки, гранулы, мелкие грамулы, смачиваемые порошки, змупЬгниУ емые.концентраты или масло.-ния таких композиций,-может быть син тетическим или натуральным, неорганическим или органическим и, в общем. сЩищлШшнщмыш,ттшйфш но добавляют в инсектициды или акарициды для того, чтобы активныйингре диент бысдрее достигал объекта, который подвергается обработке например, растения, клеща или насекомоговредителя), или упростить хранение, транспортировку и работу с активным ингредиентом.Примерами соответствующих твердых носителей могут служить неорганические материалы, такие как глина,тальк. диатомовая земля, каолин, бентонит,силикат кальция натуральные или сиитетические сиолы, такие как кумароновые, алкидные и поливинилхлоридн носки, такие как пальмовый и парафин ореховая скорлупа, например скорлупа грецкого ореха, или мука соевыхПримерами соответствующих жидких носителей могут служить вода спирТН, такие как ЭТЗНОЛ ИЛИ ИЗОППОПЗНОЛБ ГЛИКОЛИ такие как ЭТИЛВНГЛИКОЛЬЗ простые эфиры гликолей, такие как монофенилоаый простой эфир этиленгликоля или моноэтиловый простой эфир ДИЗТИЛЕНГЛИКОЛЯБ кетоны,такие Ка ацетон, метилиаобутилкетон, цикло пексанон, ацетофенон или иэофоронпростые эфиры, такие как тетрагидрофуран или диоксаи ароматические углеводороды, такие как бенаол.толуол, ксипюл.илн метилнафталин хлорированные углеводороды, такие как ТПИХЛОРЭТИЛЭН И ТЕТПЗХЛОВИД-УГЛВПО да фракции нефти, имепцие ниакие,средниеътвысокие тенпературн-кипения, содержащие керосин, светлые нефтепродукты или ароматические углеводороды, Вещество можно готовить в виде аэрозоля, в этом случае носителем могут быть фторуглероды (включая те,которые известны под торговой маркойФреон 1, омиженный нефтяной гаэ, диметиловый простой эйр и ви гПри необходимости композиции могут такие содержать поверхностно-активный.агент с целью эмульгирования,диспергирования, СНЭЧИВЭНИЙ ИЛИ распространения ЭКТИВНОГО СОВДИНЕНИЯ,который можетбыть как ионным, так иветствующих анионных повеохностно-акТИЕННХ ЗГВНТОВ МОГУТ СЛУЖИТЬ СОЛИ натрия и кальция лигно(моно)сульФоКИСЛОТЫ СОЛИ натрия И калия ОПЕИНО вой кислоты, соль натрия лаурил(моно) СУЛЬФОКИСЛОТН И СОЛИ НЗТВИЯ И кальция додеиилбенаол(монодсульоокислоты. Примерами соответствующих катионных поверхностно-активных агентов могут служить высшие алифатические амины и конденсаты высших алифатических амиНОЦ С ОКИСЪП ЭТИЛЕНЭ. ЙОИНЕВЭМИ НЕМ онных поверхностно-активных агентов могут служить глицерины жирных кислот, слтчнне эфиры сахарозы жирных кислот, конденсата окисиэтилена с высшими алифатическими спиртами, окиси этилена с высшими жирными кислотами иокиси этилена с алкилфенолами или алкилнафтолами и сополимеры окиси.этилена с окисью пропилена.Противоклещевые или инсектицидные композиции-в дополнение к вышеуказанным добавкам содержат защитный коллоид (такой как желатин, арабская смола, казеин, поливиниловый спирт или карбоксиметилцеллплоэа) или тиксотропный агент (такой как полЙосфатнатрия или бентонит) Композиция моЖЕТ ТЗКЖЕ СОДВВПЗТБ ДРУГИЕ соединения, обладающие противоклещевой активностью, например 2-(1-метилпропил)-д,6-динитрооенил-Р, диметилакрилат, ди 1(п-хлорфенил -циклопролихи карбонил, Н-(д-хлор-2-метилфеиил)-Н,Н-диметилформамин й,д,д 5-тетрахлордифенилсульфон 1,1-бис-(п-хлорФемил)-222-трихлорэтанол 2-вторбутилфеннл-Н-метилкарбамат, мтолил-Нметилкарбамат или минеральное масло, чтобы в некоторых случаях увеличить активность композиции в неко- ТОРНХ СЛУЧЗЯХ МОЖНО ОЖИДЭТЬ СИНВОГЕ тический эффект.Вещество мошнотакие использовать в смеси с другими Фунгицидаии, гербицидами регуляторами роста растений,привлекающими вредителей веществами или удобрениямиполученное известным способом вещество обладает активностью против гельминитов у человека и животных и применяется в виде напитка или капсулы. Оно может применяться в виде водного раствора или раствора в доугих подходяцихнетоксичных растВООИТЕПЗК ИЛИ.В виде СУСПЕНЗИИ ИЛИ ДИСПВВСИИ С ИСПОЛЪЗОВЗНИЕН УСКООИТВДлей суспендирования и смачнвающнх агентов, таких как бентонит, или дВУ гнх составляющих. напиток должен также содержать противопенный агент. Предпочтително, чтобы напиток содержал активное соединение в количестве 0,01-0,5 или 0,01-0,1 вес.2, Кроне того, вещество можно применять в форме сухих твердых капсул,пилюль или таблеток, содержащих заранее определенное количество активного соединения. Такие композиции можно получать при помощи гомогенизируощего перемешивания активного соединения с одним или несколькими тонкоизмельченными материалами. такими как разбавители, наполнители, дезинтеграторы или связывающие агенты (например, крахмал, Лактоза, тальк, стеарат магния или растительные смолы).Вес активного ингредиента можно тварьировать в широких пределах в зависимости от вида животногокоторого подвергают обработке, степени заболевания и веса тела животного.Вещество можно вводить животным путем равномерного.распределения его в корме или применять в форме шариков. С целью достижения удовлетворительного антипаразитического эффек та КОПИ ДОЛЖЕН СОДЗВЖЗТЬ ЗКТИВНОВ СОВещество можно также растворить или диспергировать в жидком носителе И ПВИНВНЯТЬ ПЭВЗНТЗВЗЛЬНЦ ЖИЕ 0 Т ным в виде инъекции в желудок, иыш- ау, легкие или под кожу. При парентеэальном применении в качестве носитетя предпочтительно используют растигельное масло, такое, как арахисопое или хлопковое масло. при парентеральном применении активное соединениесодержится в количестве 0,05 50 вес.2 от всей композиции. Вещест В 0 МОЖНО ИСПОЛЬЗОВЗТЬ НОСТНО, Н 3 П 0средствеино на открытом участке кожи, например, распылением. Обработку животных можно проводить в тече нив КОООТКОГО ПВОНЗЖУТКЗ времени,-на пример в-течение 1-5 дн. П р и м е р 1. Получение вещества. 600 мл предварительно подготовленной среды, содержащей 2 вес./об. глюкозы, 3 муки соевых бобов крупного помола, 0,5 насыщенного маисового ликера и 0,22 хлорида натрия, по мещают в колбу Зрлемебера емкостью1 л. Колонии спор штаииа 5 геротусе 5 В-1-Пнб прививают на упомянутуюсреду и затем выращивают в течение д 3 ч при 27 С. По истечении этого промежутка времени содержимое двух таких 2- литровых колб Эрленмейера переносятв ферментер, снабженный устройством для его встряхивания, емкостью 30 л,который уже содержит 20 л тщательно стерилизованной среди для выращивания культуры, содержащей д 2 вес./об. глюкозы, 12 вес./об. муки соевых бобов крупного помола, 05 вес./об. маисового крахмала, 1 вес./об. снятого молока, 0,2 вес./об. насыценного маисового ликера и 0,32 хлорида натрия. Значение рн перед стерилизацией 7,2-7,5. Затем культуру инкубируют.при 28 С.при.давлении внутри Ферментера 0,5 кг/см в течение 10 дн.После завершения этой стадии 20 л бульона для выращивания культуры подкисляот до рН 3 добавлением серной кислоты, а затем после добавления 1 кг Селита, вспомогательного фильтрувцего материала, смесь фильтруют под давлением, в результате чего образуется фильтровальная лепешка весомпримерно 3 кг. Эту лепешку экстрагиру отпри помощи 15 л метанола и экстракт Фильтрупт.15 л метаиолового раствора, полученного таким образом,разбавляют-5 л воды и экстрагируют 20 л гексана. Полученный гексановый раствор сушат над безводным сульфаТОМ НЗТРИП И ЗЭТВМ концентрируют ВЫ париванием при пониженном давлении в водяной бане при д 0 д 5 С, в результате чего обрвзуетсн 22 г маслянисъ ТОГО МВТВВИЗЛЗ.полученный маслянистый материап растворяют в 30 мл гексане и адсоцбируют на колонне, содержащей 2 кг силикагеля, сбалансированного гексаном. Колонну злюируют сиесьо гексана и ацетона 955(об.). Фракцию объемом 2 л, содержащую искомое соединение, собирают и затем концентрируют при пониженном давлении в водяной бане при до-д 5 С. в результате чего образуется 550 мг маслянистого материала. Этот материал растворяют в 1 мл метанола и раствор помещают в колонну, содержащую 200 мл Сафадекса ЬН-20, который сбалансирован метанолом. Затем-колонну эпюируют метанолом в результате чего образуется Фракция объемом 65 мл, со