Способ лечения структурно-функциональных нарушений печени при токсическом гепатите у крыс

(51) 61 3/02 (2006.01) 61 1/16 (2006.01) 61 31/355 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ лечения функциональных нарушений в печени и функции лимфатической системы при токсическом гепатите у крыс, включающий применение антиоксидантов -Селен актив(1,25 г/л) и -токоферола ацетата (1,5 мкг/кг) который вводят внутримышечно. Предлагаемый способ позволяет при токсическом гепатите восстановить нарушенные функции печени и лимфатических сосудов и узлов,путем увеличения лимфотока всей лимфатической системы, а именно у дренажной, компенсаторной,барьерной и транспортной функциях, и могут быть использованы в целях тяжести пораженный и организма на производстве при отравлением с летучими органическими токсикантами.(76) Абдрешов Серик Наурызбаевич Булекбаева Лиза Эртасовна Демченко Георгий Анатольевич(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ СТРУКТУРНОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ ПЕЧЕНИ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ У КРЫС(57) Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности, способу лечении структурнофункциональных нарушений печени и активации транспортной функции лимфатической системы при токсическом гепатите у крыс путем применения антиоксидантов. Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности, способу коррекции структурно-функциональных нарушений печени и активации транспортной функции лимфатической системы после отравления тетрахлорметаном, или четыреххлористым углеродом (СС 4). СС 4 - четыреххлористый углерод относится к хлорпроизводным метана, химическое название тетрахлорметан это прозрачная легко испаряющаяся практически негорючая жидкость со сладковатым напоминающим хлороформ запахом. Плохо растворяется в воде (0,5 г/л). Молекулярный вес 153,82. Плотность 1,59. Температура замерзания-23 С, температура кипения 76,7 С. В окружающей среде четыреххлористый углерод в основном находится в виде газа, запах которого большинство людей начинает ощущать уже при концентрации в воздухе на уровне 10 мг/л. Тетрахлорметан (СС 4) - продукт искусственного происхождения и в природе естественным путем не образуется. Тетрахлорметан производился во всем мире в больших количествах, в основном для последующего использования при изготовлении хлорфторуглеродных хладагентов . СС 4 также нашел применение в качестве растворителя при производстве масел, технических жиров, лаков,смол, мыла (Е.А. Лужников Клиническая токсикология. М Медицина. 1994, -254 с. Е.А. Лужников, Л.Г. Костомаров. Острые отравления руководства для врачей. М Медицина. 1989, - 432 с.), при изготовлении кабелей и полупроводников,а также в качестве каталитической среды при производстве полимеров,и в процессах хлорирования органических веществ. Особую опасность для здоровья человека представляют отходы нефтяной и химической промышленности, содержащие токсические летучие органические вещества. Поэтому это изобретение может быть использовано в целях профилактики и коррекции организма при токсическом гепатите. В настоящее время гепатит, в том числе,токсической гепатит стал одно из сложных проблемой для здравоохранения всего мира. Летучее органическое вещество - тетрахлорметан оказывает отрицательное влияние на состав крови,висцеральные функции, на ЦНС и периферическую нервную систему, нарушает функции печени(П.Ф. Забродский. Общая токсикология, под. ред. Б.А. Курляндского, В.А. Филов. М., 2002, - с. 352384.). В качестве экспериментальных моделей токсического гепатита наиболее часто используют воздействие на печень СС 4. Является прямым гепатотоксином и широко применяется в экспериментальной медицине(З.А. Блюгер,И.Н. Новицкий. Практическая гепатология. Рига Звайзгне. 1984,- 283 с.). Несмотря на то, что влияние СС 4 на организм изучено достаточно, но мало изучено участие лимфатической системы при токсическом гепатите. Поиск адекватных методов коррекции при токсическом гепатите, и фармакологического действия на печень представляется весьма 2 актуальным. С одной стороны, экспериментальные модели с использованием СС 4,широко используется в научных исследованиях не только для решения вопросов гепатологии, но и ряда общебиологических проблем(Н.П. Скакун,Г.Т. Писько, И.П. Мосейчук. Поражение печени четыреххлористым углеродом, - Москва, 1989. 107 с. И.Ю. Ищенко, С.В. Мичурина, Бюллетень СО РАМН, - 1(115), - 2005, - С. 62-65). С другой стороны СС 4 продолжает применяться в различных областях народного хозяйстве и быту, поэтому вероятность непосредственного контакта человека с этим ядом достаточно высока (Ш. Шерлон,Дж. Дули. Заболевание печени и желчных путей. М ГЭОТАР. Медицина. - 1999, - 860 с. А.И. Мартынов, И.А. Макаров, А.А. Фищенко,Журнал Лечебное дело, 2006, - 3, - С. 19-28). После введение СС 4 и этанола в крови у животных повышалась активность ферментов щелочной фосфатазы, аланинаминотрансферазы,лактатгидрогеназы соответственно на 83, 94, 141 и 134 по сравнению контрольную группы. Отмечалось слияние капель жира в части гепатоцитов, наблюдалось некроз клетки и гидропическая дистрофия, а также формирование внеклточных жировых кист (Т.Г. Толстикова,Н.А. Жукова, Д.Е.Семенова и др., Фундаментальные исследование, - 2012, - 5, - С. 120-123.). В наших исследованиях установлено, что после введение СС 4 внутрибрушинно наблюдалась снижение лимфотока из кишечного лимфатического сосуда и содержание общего белка в лимфе и плазме крови. Угнеталась транспортная и моторная функция лимфатических сосудов и узлов(Л.Э. Булекбаева, Г.А. Демченко, Б.Н. Алибаева и др., Известия НАН РК, сери. биол. и мед., - 2013, 6(300). - С. 13-17 С.Н. Абдрешов, Известия НАН РК, сери. биол. и мед., - 2007, - 3 (261). - С. 50-54). В гистохимических исследованиях показано, что при токсическом гепатите в стенке грудного протока,в капсуле лимфатических узлов наблюдалась полное разрушение терминальных волокон и исчезновение их варикозных утолщений. В стенке сосудов сохранялись лишь отдельные претерминальные участки нервной сети, которые имели крайне низкое свечение катехоламинов(Н.А.Ахметбаева, С.Н. Абдрешов, Вестник КазНУ,сер. биол. - 2007. -1(34). - С. 14-16). Лечение больных с токсическими поражениями печени, несмотря на прогресс современной гепатологии все еще остается крайне сложным. Поэтому актуален поиск новых веществ обладающих гепатопротекторными свойствами. Несмотря на внедрение новых методов диагностики в современной гепатологии расшифровка этиологии и патогенеза многих острых и хронических заболеваний печени на клеточном и молекулярном уровне остается актуальной (М.А. Колпаков,О.Р. Грек, Ю.В. Башкирова, М.С. Любарский,Ю.Р. Равилова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001. - 5, - С. 554-556). При токсическом гепатите (введение подкожно СС 4 в дозе 2 мл/кг в оливковом масле при объемном соотношении 11) вызывает изменения биохимические показателей крови, нарушение морфологических структур в печени и изменение гепатоцитов у крыс. Авторы изучали гепатопротекторного свойств ксимедона. При применение препарата ксимедона в течении несколько суток после токсического поражении печени приводит к восстановлению ее функции и способствует восстановлению биохимических показателей крови (А.Б. Выштакалюк, Н.Г. Назаров,И.В. Зуева, А.В. Ланцова и др., Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, - 2013, Т.155, - 5, - С. 595-598). Однократное введение тетрахлорметан (в дозе 2 г/кг в виде 50 раствора на оливковом масле в желудок) вызываете печени крыс снижение активности НАДи НАДФ-зависимых альдегиддегдрогенеаз. Авторы изучали гепатопротекторного эффекта пантенола и липидидемического фактора-карнитина. Пантенол и -карнитин нормализовали активность альдегиддегидрогеназ, а их сочетание не оказало заметного эффекта(В.И. Сатановская,П.С. Пронько, А.В. Гайшманова, Д.А. Мискевич,Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, - 2009, - Т.72, - 2, - С. 39-40.). В экспериментах токсический гепатит моделировали введением в желудок 1 мл/кг тетрахлорметна в 20 масляном растворе ежедневно в течение 6 дней. Авторы изучали действие гепатопротекторная и антиоксидантная активность экстрактов из надземного лабазника вязолистного в дозе 100 мг/кг через зонд в желудок(И.В. Шилова, Т.В. Жаворонок, Н.И. Суслов и др.,Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, - 2006, - Т. 142, - 8, - С. 181-185). Для профилактики и лечения различных заболеваний печени все шире используется антиоксиданты природного происхождения. Авторы применили биофлавоноидный комплекс лиственницы (1 г/кг массы тела) и ларивитол(0,5 г/кг массы тела) для коррекции при токсическом гепатите. В исследованиях показано,что применение биофлавоноидный комплекс лиственницы и ларивитол положительно влияют на восстановление функции печени и гепатоцитов,проявляет нормализацией содержании уровня ферментов переаминирования и щелочной фосфатазы в сыворотке крови (Ю.А. Харченко,С.В. Еременко, О.О. Авдонина, Современные проблемы науки образования, - 2012, - 1, - С. 152159). Известен другой способ коррекции при токсическом гепатите авторы применили растительного экстракта бересты березы повислой. Исследование гепатопротекторного действие экстракт березы при повреждении печени,вызванном СС 4 (в дозе 100 мг/кг в течение 3-х дней), показало, что в крови у животных при токсическом гепатите снижется активность АЛТ,ММП и щелочной фосфатазы (В.В. Иванова, Ю.В. Лигостаева, О.Н. Потеряева и др.,Фундаментальные исследования, - 2013, - 3, С. 277-279). Однако авторы отмечали, что более выраженный эффект экстракт березы было снижение долю -глобулинов и увеличение глобулинов после коррекции при токсическом гепатите. В экспериментах на крысах изучено влияние гипоксена на метаболическое процессы в ткани печени в условиях интоксикации животных СС 4. Курсовое введение гипоксена в дозе 10 мг/кг/сут в течение 7 дней оказывает выраженное протекторное действие на морфофункциональное состояние печени при отравлении четыреххлористым углеродом (В.Е. Новиков, Е.И. Климкина,Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, - 2009, - Т.72, - 5, - С.43-45). В данном время проблема лечения гепатитов различной этиологии является чрезвычайно актуальной, в связи с этим авторы изучали лекарственных агентов растительного происхождении аланинамида бетулоновой кислоты на биохимические показатели крови, численность гепатоцитов и морфологию печени у крыс при хроническом токсическом гепатите. При энтеральном применении аланинамид бетулоновой кислоты у крыс увеличивается регенераторный потенциал, полностью предотвращает развитие фибриоза и цирроза печени, а также купирует признаки холестаза и цитолиза (Т.Г. Толистикова,Н.А. Жукова, Д.Е. Семенова и др., Журнал фундаментальные исследования, - 2012, - 5, С. 120-123.). С каждым годом растет число больных,страдающих токсическими поражениями печени(Е.А. Ушкалова, Фарматека, - 2003, - 104, - С. 4047). В комплексном лечении таких пациентов используются гепатопротекторы фармакологическую группы с избирательным защитным действием в отношении печени(В.Е. Новиков, Е.И. Климкина Гепатопротекторы, Смоленск, - 2006, - 117 с). Авторы изучали влияние иммуномодулина, соединений фитина-фитин-С и фитата кобальта и их комбинаций при отравлений четыреххлористым углеродом. Установлено антиоксиданты оказало однонаправленное действие,а при комбинировании введении иммуномодулина с соединениями фитина антиоксидантная активность усиливался(К.Т. Мирзаахмедова,А.А. Абдусаматов, А.Н. Набиев, Сибирский медицинский журнал, - 2009, - 5, - С. 122-124). Авторы применили гепатина для коррекции организма 25 мг/кг массы тела при токсическом гепатите. Определяли содержание АлАТ и АсАТ,мочевина, билирубина в крови у животных. Авторы отметили, что использование минерало-солевой препарат гепатина способствует защита гепатоцитов от развития цитолиза и холестаза. После введение внутрь специальным зондом, гепатина в течении 10 дней оказало положительно воздействии,сопровождалось уменьшением синдрома цитолиза,АлАТ в сывортке крови в 2,1 раза, АсАТ в 1,3 раза. Уровень общего билирубина снижался в 1,6 раза, а 3 непрямого билирубина в 2,7 раза, а также гепатин показывает гепатопротекторное действие при токсическом гепатите (Р.Т. Тулаганов, А.Н. Набиев,Сибирский медицинский журнал. 2008, - 5, - С.3639). Задачей изобретения является разработка способы лечения структурно-функциональных нарушений функции печени при токсическом гепатите путем применение Селен актива и антиоксиданта - а-токоферола. Технический результат восстановление нарушенных функций печени,а также лимфатических сосудов и узлов, увеличение лимфотока и дренажной, барьерной и транспортной функции лимфатической системы при токсическом гепатите, и могут быть использованы в целях тяжести пораженный и организма на производстве при отравлением с летучими органическими токсикантами. Селен присутствует в качестве кофактора в ряде окислительно-восстановительных систем. Важным селеносодержащими ферментами являются глутатионпероксидаза и глутатионредуктаза. Они предохраняют клетки от токсического действия перекисных радикалов. Пищевые добавки с селеном усиливают антиоксидантную защиту организма(О.И. Галимов, Т.П. Бондарь и др., МатериалыМеждународного симпозиума Экологофизиологического проблемы адаптации, - Москва,- 2007, - С.98-99.) Устранение селенодефицита в организме непростая задача. Селен предохраняет от отравлений тяжелыми металлов и выхлопными газами. Недостатка селена не только снижает иммунитет и работоспособность, но приводит к развитию нарушению организма. Селен важнейший и эссенциальный микроэлемент антиоксидантной защиты организма, необходим для нормальной жизнедеятельности человека и животных, однако в больших количествах он может оказаться токсичным. Селен является окислителем и обладает низкой биодоступностью, как часть селенопротеинов,выполняет функции антиоксиданта и иммуномодулятора, а также применяется в медицинской практике, так и в животноводстве ( ., . . . . 1993.. 2. . 121-126.,,,.,15 804-810. 2006.,.,.,. 168 404410. 2008.). Известно, что селен входит в состав ферментов, которые осуществляют сложные химические и обменные процессы, таким образом,участвуя в подержании в клетке перекисного гомеостаза (В.В. Племенков, Вестник РГУ им. Канта, сер. Естественные науки, - 2007, - 1, - С.5163.,,,2003, -1, - . 133, - . 1457-1459). Роль селена в предотвращения развития атеросклероза и нормализации липидного метаболизма показали Иванов В.Н. с соавторами- 1.- С. 39-43). В условиях дефицита селена наблюдается активация свободнорадикальных и развитие дистрофических процессов,что способствует развитию миокардиодистрофии,атеросклероза, ишемической болезни сердца,возникновению инфаркта миокарда и др.(М.Д. Савина, А.Н. Кудрин, Фармация. - 1992. ., - 1. - С. 39-46). Селенит натрия, получаемый с водой (4 мг/л) тормозил плевральный канцерогенез у крыс Вистар,индуцированный внутриплевральным введением асбестосодержащей пыли хризотил-токоферол является основным компонентом витамина Е в различных органах животных и человека. Наличие специальных связывающих и переносящих белков предохраняет его от быстрого разрушения. - токоферол, как правило, обладает и наиболее выраженной биологической активностью среди компонентов витамина Е. (И.О. Захарова,Т.В. Соколова,Н.Ф. Аврова,Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, - 2013,Т.155, - 1, - 51-54. И.А. Волчегорский, Л.М. Рассохина, И.Ю. Мирошиниченко, Проблемы эндокринологии, - 2008, -Т.54, - 5, - С.43-49).-токоферол предотвращает повышенную свертываемость крови, благоприятно влияет на периферическое кровообращение, обеспечивает максимальную защиту от свободных радикалов,окисляющих полиненасыщенные жирные кислоты,участвует в биосинтезе гема и белков ( ., .,., . . . - 2006, 44(3), - . 381-396), а также снижает риск возникновения сердечно-сосудистых заболеваний и злокачественный опухолей и т.д. ( ., С., . . - 2007, - . 76. - . 281308).-токоферол - является одним из наиболее мощных природных антиоксидантов и играет важную роль в механизмах защиты клеток от повреждающего действия свободных радикалов(А.А. Капралов, Г.В. Петрова, Г.В. Донченко,Успехи современной биологии. 1993, Т. 113, -2, С.313-326). Известно, что -токоферол играет важную роль в механизмах функционирования митохондрий. Обладая липофильными свойствами,-токоферол действует, главном образом, в составе клеток и внутриклеточных органелл, а также липопротеинов плазмы крови,препятствуя распространению свободно радикальных реакций,связанных в основном с участием липидных радикалов (., ., ., . .,. . . 1997, .67, - 2, -.91-94 Г.В. Петрова, А.А. Капралов, Г.В. Донченко,Украинский биохимический журнал. 2003, Т.75, 6, -С.25-34). Авторы установили, что биорегулятор токоферол в дозах 2-10 мг/кг, стабилизирует мембраны клеток и способен оказывать корригирующее воздействие на показатели лейкоцитарной формулы периферической крови при действии дапсона (С.А. Лужнова, М.А. Самотруева и др., Фундаментальные исследования, - 2013, - 7,- С.580-583). Способ лечения структурно-функциональных нарушений печени в эксперименте осуществляют следующим образом. Для лечения нарушений функций печени и обменных и сосудистых нарушений при токсическом гепатите крысам предварительно в течение 7 суток вводили в/м масляный раствор токоферол (1,5 мкг/кг) иселен актива (1,25 г/л) и в течение 21 суток после введения СС 4. Опыты проведены на 90 взрослых белых лабораторных крысах массой тела 220-250 г. Было сформировано 3 групп крыс. 1-я группа контрольная (25 крыс), 2-я группа (30 крыс) с токсическом гепатитом, получала СС 4 - в дозе 0,3 мл на 100 г массы тела 3 раза через 1 сут., 3-ая группа (35 крыс) получала предварительно в течение 7 сутокселен актива (1,25 г/л) и атокоферол (15 мкг/кг), затем раствор - СС 4 (0,3 мл на 100 г массы тела 3 раза через 1 сут.), после чего в течение 21 сут. животным продолжали давать селен актива и антиоксиданта. По истечении указанных сроков для каждой группы крыс после наркотизации регистрировали лимфоток из кишечного лимфатического протока. Было изучено морфофункциональные характеристика печени,лимфатических сосудов и узлов, взяты пробы лимфы и крови. Для гистологических исследований брали ткани печень, кусочки ткани печени фиксировали в 10 нейтральной формалине,проводили через спирты и заливали в парафином. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилин-эозином,для выявление соединительной ткани по Ван Гизону. Пример 1. В наших экспериментах было показано, крысе массой тела 220 г. (из 2-ой группы) при токсическом гепатите масса печени, в среднем,возрастала от 100,4 (в контроле) до 130,7 г после интоксикации СС 4, что характерно для жировой дистрофии печени, у крыс 3-й группы - 120,2 г. У крыс линейные размеры периферических лимфатических узлов незначительно изменялись. Это видно на примере брыжеечных лимфатических узлов. Длина этих узлов уменьшались от 5,00,1 в норме до 4,40,1 мм при токсическом гепатитом после введения СС 4, а ширина от 2,00,3 в норме до 1,80,1 мм соответственно. Размеры шейных лимфатических узлов почти не изменялись, либо незначительно возрастали (таблица 1). Вероятно,при отравлении СС 4 происходит некоторая гипоплазия клеточных элементов брыжеечных лимфатических узлов под влиянием его повреждающего действия на мембраны клеток узлов. В экспериментах на препаратах брыжеечных лимфатических узлов были зарегистрированы фазные ритмические сокращения. У крыс контрольной группы наблюдались спонтанные сокращения изолированных брыжеечных лимфатических узлов с частотой 5,00,2 в минуту и амплитудой - 7,20,7 мг. При токсическом гепатите(2-я группа) резко угнетается моторная функция лимфатических узлов и снижается их чувствительность к действию вазоактивных веществ. При токсическом гепатите (2-я группа) частота сокращений в брыжеечных узлах составляла 1,30,2 в минуту и амплитуда - 1,20,3 мг. Отмечены более низкие сократительные реакции на фоне медленных тонических волн. Это снижение составляло 60-65 от контрольных величин. У крыс 3-й группы после коррекции протекторными веществами частота сокращений в брыжеечных изолированных лимфатических узлах составляла 3,30,2 в минуту, амплитуда - 3,90,3 мг,спонтанная и вызванная сократительная активность лимфатических узлов приближалась к нормальным значениям (таблица 2). При токсическом гепатите наблюдались уменьшение лимфотока из кишечного лимфатического сосуда на 47 по сравнению с контрольной группы. У животных 2-ой группы угнеталась сократительной активности брыжеечных лимфатических узлов по сравнению контрольную группы. Снижение сократительных активных узлов на действие к вазоактивных веществ как частота, так и амплитуда сокращении лимфатических узлов(таблица 2). Пример 2. Крыса массой тела 220 г получиласелен актива (1,25 г/л) и -токоферола (15 мкг/кг), в течение 7 дней, затем ввели в/б в дозе СС 4 0,3 мл на 100 г массы тела 3 раза через 1 сут. и продолжали вводить антиоксидант течение 21 суток. Через 28 суток от начала лечении у крысы отмечены положительные сдвиги, динамика биохимических показателей в лимфе и плазме крови у крыс изменились в сторону нормализации. Лимфоток из кишечного лимфатического сосуда крыс при токсическом гепатите был ниже контрольного уровня на 47. После лечении применением-токоферола и селен-актива лимфоток у 3-ей группы животных повышался по сравнению с группой 2 и составил 0,270,03 мл/час(таблица 3). У крыс 2-й группы с токсическим гепатитом отмечено достоверное снижение содержания общего белка, мочевины и креатинина в лимфе и плазме крови. В лимфе содержание общего белка снижалось до 44, а в плазме крови до 30 по сравнению с контролем. Были определены в лимфе и плазме крови показатели, характеризующие функцию печени. Содержание общего билирубина в лимфе и плазме крови повышалось на 16-20 и уровень тимоловая проба увеличивалось на 66-65 от контрольного уровня. В лимфе и плазме крови возрастали уровень активности АлАТ на 450-445 (в контроле лимфе 0,350,1 и плазме крови 0,600,1 ммоль/л) и АсАТ на 250-252 (в контроле лимфе 0,330,1 и плазме крови 0,440,1 ммоль/л) по сравнению с контрольной группой (таблица 3). Эти данные свидетельствуют о развитии у крыс 2-й группы токсического гепатита. Из полученных материала видно, что наличие токсического гепатита негативно отражается на состоянии внутренней среды 5 организма животных, на лимфодинамике и биохимическом составе лимфы и крови. После лечении антиоксидантами концентрация общего белка, мочевины, содержание билирубина,креатинина, уровень тимоловой пробы, АлАТ и АсАТ в лимфе и плазме крови у 3-й группы, после коррекции получавших селен-актива и -токоферол были в границах физиологических норм с небольшими отклонениями. После лечения содержание общего белка в лимфе - 33,72,1 г/л. В лимфе концентрация мочевина составила - 6,80,6 ммоль/л, креатинин - 82,7,2 мкмоль/ л, АлАТ составил - 0,530,1, АсАТ - 0,460,2 ммоль/л(таблица 3). У крыс после лечении показатели билирубина и тимоловой пробы в плазме крови у крыс группы 3 повышались, слегка отличаясь от контроля. Уровень билирубина - 10,90,2 мкмоль/л,тимоловой пробы - 0,40,04 Ед (таблица 3). Положительный эффект при применении селенактива при токсическом гепатите связан селена с его высокими антиоксидантными свойствами и способствовал повышение функциональной активности организма. -токоферол как мощный антиоксидант защищает мембраны клеток от пагубного действия окислительного стресса,которым сопровождается действие четыреххлористого углерода. Таким образом, способ лечении выявленных нарушений в организме при токсическом гепатите путем предварительного применения селен-актива и-токоферола, примененные до и после введения животным 4-хлористого углерода,оказывая защитное действие на клеточные мембраны,значительно ослаблял развитие токсического гепатита и снижал его негативное действие на биохимические показатели крови и лимфы и на структуру и функцию печени. После применения комплексное лечение антиоксидантной веществ отмечено улучшение спонтанной и индуцированной сократительной активности лимфатических узлов. Пример 3. Крыса массой тела 220 г получиласелен актива (1,25 г/л) и -токоферола (15 мкг/кг), в течение 7 дней, затем ввели в/б в дозе СС 4 0,3 мл на 100 г массы тела 3 раза через 1 сут. и продолжали вводить антиоксидант течение 21 суток. Через 30 сут животных 2-й и 3-й группы животных брали в эксперимент. После декапитации животного брали кусочки ткани печени. Для изучение морфофункциональное состояние печени и брыжеечных лимфатических узлов при токсическом гепатите и после коррекции антиоксидантами. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилин-эозином,для выявление соединительной ткани по Ван Гизону. Печень является центральным звеном в обмене белков, углеводов, липидов и многих других веществ, нормальное течение биохимических процессов в печени зависит от функционального состояния печеночных клеток. Относительная масса печени у интактных крыс составляла 100,3 г, при гистологическом исследовании выявлено нормальное строение тканей печени, характерна для данного вида животных. Печеночные дольки 6 представлены сетью балок. Гепатоциты имели полигональную форму с четко выраженными границами (фиг.1 А, ув х 200). Как видно, в наших экспериментах при токсическом гепатите масса печени увеличивалось на 20-25 (130,7 г). Летальные случаи во 2 группе составили 40-45. При токсическом гепатите в срезах печени обнаружены значительные изменения структуры гепатоцитов по сравнению с контролем, в частности, большое число соединительнотканных образований. В печени видны зоны дискомплексации печеночных балок с мелкими очагами кровоизляния. Была значительно нарушена гистоархитектоника печеночных клеток,в большинстве долек отмечена жировая дистрофия. Отмечено резкое неравномерное расширение и кровенаполнение центральных вен, междольковых кровеносных сосудов и некоторых синусоидов. Наблюдались участки развития соединительной ткани на месте некроза гепатоцитов, умеренно выраженный портальный склероз. Видны светлые тяжи соединительной ткани, заменившей погибшие гепатоциты (фиг.1 Б, ув х 200). Лечения выявленных нарушений при токсическом гепатите путем введения селен актива и а-токоферола в течение 28 суток (группа 3) снижала негативное действие СС 4 на гистологическую картину печени. При проведении профилактики токсического гепатита (группа 3) путем введения селен актива и -токоферола на срезах печени резких нарушений в строении гепатоцитов не отмечено. Печеночные дольки представлены сетью балок с четко выраженными границами,размеры синусоидов достигли контрольных величин (фиг.1 В, ув х 200). При гистологическом и морфологическом исследовании брыжеечных лимфатических узлов у контрольных животных обнаружено, что их строение соответствует описанному в литературе(М.Р. Сапин, Н.А. Юрина, Л Этинген Лимфатический узел. - М. Медицина, -1978, -271 с. А. Хэм, Д. Кормак Гистология (пер. с англ.). - М.,Мир,-1983,Т.2,-254 с.). Брыжеечные лимфатические узлы были покрыты хорошо выраженной тонкой капсулой, краевой синус не определялся. Корковой слой был представлен множеством лимфатических фолликулов, среди которых основную массу составляли фолликулы без светлых центров. Фолликулы со светлыми центрами встречались редко. Мозговое вещество узла имело более рыхлое строение. В нем отчетливо выявлялись соединительно-тканные трабекулы,мозговые синусы, ретикулярная ткань и сосуды. В некоторых местах видны тонкие соединительные трабекулы,отходящие от капсулы (фиг.2, А ув х 200). В лимфоидной ткани коркового и мозгового вещества в большинстве случаев встречались малые лимфоциты, а в светлых центрах средние. В мозговых синусах обнаруживалось большое количество ретикулярных клеток. Встречаемость плазматических клеток, лимфобластов и больших лимфоцитов была наиболее выражена в брыжеечных лимфатических узлах. Это, по 31221 видимому, связано с их более высокой функциональной активностью, напряженностью иммунологических процессов,регионарными особенностями притекающей лимфы (Д.А. Жданов Общая анатомия и физиология лимфатической системы. - Ленинград, - 1952, - 336 с. Ю.И. Бородин, В.Н. Григорьев Лимфатический узел при циркуляторных нарушениях. - Новосибирск,Наука, - 1986, - 267 с.). При токсического гепатите, вызванном СС 4 у крыс, обнаружили значительные изменения в структуре лимфатических узлов отек капсулы и трабекул, просветы синусоидов были расширены,местами резкое расширение лимфатических синусов и кровеносных сосудов. Отмечены рыхлость,отечность и кровоизлияния, наличие единичных эритроцитов в синусах узла. Особых изменений клеточного состава тканей, нарушений зонального распределения клеток и микроциркуляции не обнаружили. В капсуле и корковом слое брыжеечных лимфатических узлов отмечено деформирование мелких кровеносных сосудов,питающих лимфоузлы, деструкция терминальных нервных волокон, фрагментация их, разрывы и нарушение целостности волокон, исчезновение варикозных утолщений (фиг.2, Б ув х 200). Наблюдались участки развития соединительной ткани на месте некроза гепатоцитов, умеренно выраженный портальный склероз, В брыжеечных лимфатических узлах отмечены рыхлость, отечность и кровоизлияния, наличие единичных эритроцитов в синусах узла. После применения комплексное лечение антиоксидантной веществ (группа 3) отек капсулы в лимфатических узлах уменьшается, значительно исчезает рыхлость лимфатических синусов и кровеносных сосудов. В лимфатических узлах,восстановлено количество лимфоцитов в корковом слое, в просвете синусоидов не обнаружены остатки разрушенных эритроцитов и сидерофагов, что свидетельствует об отсутствии гемолиза эритроцитов в крови (фиг.2, В ув х 200). Среди лимфатических сосудов, нет сосудов с утолщенной стенкой, что показывает на снижение нагрузки на дренажную функцию лимфатическую систему. Таким образом, при токсическом гепатите,полученном путем введения высоких доз 4 ххлористоого углерода, наблюдалось значительное нарушение структуры печени с развитием соединительной ткани на месте гибели гепатоцитов. В наших экспериментах показано, что развитие токсического гепатита,помимо,морфофункциональных сдвигов в деятельности печени, сопровождается нарушениями в структуре лимфатических узлов, транспортной функции лимфатических сосудов и состава лимфы. Резко угнетается моторная функция лимфатических узлов и снижается их чувствительность к действию вазоактивных веществ. После лечения протекторными веществами спонтанная и вызванная сократительная активность лимфатических узлов приближалась к нормальным значениям. Установлено эффективности сочетанной немедикаментозной коррекции структурнофункционального состояния печени и функции лимфатической системы на фоне экспериментального токсического гепатита. Таблица 1 Линейные размеры лимфатических узлов в норме и при токсическом гепатите Наименование Контрольная группа узлов длина, мм ширина, мм Брыжеечные 5,00,1 2,00,3 Шейные 3,30,3 2,90,2 Примечание достоверно по сравнению с контролем, р 0,05 Таблица 2 Сократительная активность брыжеечных лимфатических узлов при токсическом гепатите и после лечении антиоксидантами Наименование Частота сокращении, сокр/мин Амплитуда сокращении, мг Лимфоток и биохимические показатели плазмы крови и лимфы при токсическом гепатите и после применение антиоксидантов Показатель Лимфоток, мл/час Общий белок, г/л Мочевина, ммоль/л Креатинин, мкмоль/л 1-я группа 2-я группа 0,350,1 1,570,3 0,330,1 0,820,1 10,40,7 12,10,9 0,30,02 0,50,06 Плазма крови Общий белок, г/л 68,10,5 47,3 1,2 Мочевина, ммоль/л 8,30,4 5,2 0,3 Креатинин, мкмоль/л 64,22,1 52,01,3 АлАТ, ммоль/л 0,600,1 2,670,2 АсАТ, ммоль/л 0,440,1 1,110,2 Билирубин общий, мкмоль/л 9,8 0,7 11,70,9 Тимоловая проба, Ед 0,40,1 0,660,02 Примечание-достоверно по сравнению с контролем, р 0,05, -р 0,01 Гемотоксилин-эозин х 200 Обозначение А- гистоструктура печени в норме,Б - состояние печени при токсическом гепатите, В после протекторными веществами. Фиг.1 - Морфологическая картина печени в норме, при токсическом гепатите и на фоне введения селен актива и -токоферол ацетата Гемотоксилин-эозин х 200 Обозначение А гистоструктура лимфатического узла в норме, Б - состояние узла при токсическом гепатите. Видны разрежения,отеки, эритроциты в краевом синусе, который расширен, В - морфологическое состояние узла после протекторными веществами. Видно значительно исчезает рыхлость лимфатических синусов и кровеносных сосудов. Фиг.2 - Гистологическая структура брыжеечного лимфатического узла в норме, при токсическом гепатите и после применения селен актива итокоферол ацетата ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ лечения структурно-функциональных нарушений печени при токсическом гепатите у крыс, включающий комплексное лечение с использованием-токоферола ацетата,отличающийся тем, что перед интоксикацией животным предварительно назначают антиоксиданты, в качестве гепатопротектора используют Селен актив в дозе 1,25 г/л, а масляный раствор-токоферола ацетата вводят внутримышечно в дозе 15 мкг/кг массы тела животного в течение 28 дней.