Способ коррекции функциональных нарушений лимфатической системы при аллоксановом диабете у крыс

(51) 61 3/02 (2006.01) 61 3/06 (2006.01) 61 3/10 (2006.01) 61 36/48 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ функциональных нарушений организма при аллоксановом диабете у крыс. Способ коррекции функциональных нарушений в лимфатической системы при аллоксановом диабете у крыс, включающий применение антиоксидантов - соевого молока и масляного раствора -токоферола ацетата, который вводят внутримышечно в дозе 15 мкг/1 кг массы тела животного. Предлагаемый способ позволяет при аллоксановом диабете у крыс восстановить нарушенные функции лимфатических сосудов и узлов,путем увеличения лимфотока всей лимфатической системы, а именно, у дренажной,барьерной и транспортной функциях.(76) Абдрешов Серик Наурызбаевич Булекбаева Лиза Эртасовна Демченко Георгий Анатольевич Ахметбаева Нурумхан Ахметбаевна Балхыбекова Айгуль Орынбековна(56) Левицкий А.П., Селиванская И.О.,ЦисельскийЮ.В. Влияние соевого молока на экспериментальный сахарный диабет // Одесский медицинский журнал., 2004, 6, с.9-11(54) СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ НАРУШЕНИЙ ЛИМФАТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ ПРИ АЛЛОКСАНОВОМ ДИАБЕТЕ У КРЫС Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности, способу коррекции функциональных нарушений организма, при сахарного диабета. В настоящее время сахарный диабет стал сложной проблемой для здравоохранения всего мира, так как затрагивает все сферы жизнедеятельности человека(М.И.Балаболкин Диабетология. - Москва, 2000 И.И. Дедов, М.И. Балаболкин Журнал Врач. 2006. - 11. - с.3). Поэтому это изобретение может быть использовано в целях профилактики и коррекции организма при сахарном диабете. Аллоксан токсичен для различных клеток организма, но обезвреживается за счет реакции с-группами. Однако в островковой ткани содержание этих групп низкое и концентрация аллоксана в -клетках островков Лангерганса по сравнению с другими клетками организма быстрее достигает токсического повреждающего уровня. Структура аллоксана близко к мочевой кислоте(уреид мезоксалевой кислоты). (А.Д. Адо,В.В.Новицкого, Патологическая физиология. Томск,-1994, - с. 468). Установлено, что диабетогенная доза аллоксана оказывает повреждающее действие на островки поджелудочной железы,что связывают с особенностями метаболизма -клеток, тогда как эта же концентрация аллоксана не является токсической в других тканях органов (В.П. Лебедев,С.В.Биличенко, Н.Э. Ордян и др., Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова, 2006,Т.92, - 2, - с.204-213). Ваших исследования установлено,что однократно введение подкожно аллоксана в дозе 15 мг/100 г снижение инсулина в лимфе и плазме крови, повышение глюкозы крови и лимфы. Морфофункционального изменения поджелудочного железа, лимфатического сосуда и узлов. Снижение лимфотока из кишечного лимфатического сосуда и содержание общего белка в лимфе и плазме крови. Угнетение транспортная и моторная функция лимфатических сосудов и узлов(Л.Э. Булекбаева, Г.А. Демченко, А.О. Балхыбекова,С.Н. Абдрешов, Астана медициналы 7 журналы. 2008. 1 (46). - с. 181-184 С.Н. Абдрешов, Л.Э. Булекбаева, А.О. Балхыбекова, Вестник РУДН, сер. мед. - 2009, - 4, - с.415-419 С.Н. Абдрешов,Вестник лимфологии, 2009, 6, с.42-45). В гисто-химических исследованиях при аллоксановом диабете в стенке грудного протока,кишечного лимфатического ствола, в капсуле лимфатических узлов наблюдалось исчезновение терминальных волокон и нарушение целостности претерминальной части с уменьшением числа варикозных утолщений,являющихся депо катехоламинов (А.О. Балхыбекова, Н.А.Ахметбаева,Л.Э. Булекбаева, ИзвестияРК. сер. биол. и мед. - 2007. - 1. - с. 37-40). Описан способ коррекции аллоксанового диабета,путем использования таурина и тиоктацида. На 21-й сутки после введения внутрижелудочно таурин (750 мг/кг) и тиоктацид(60 мг/кг) оказало положительное воздействие на 2 физиологические показатели и нормализуя нарушений, вызванные аллоксаном, а также таурин и тиоктацид показывают гипогликемическое и антиоксидантное действие при аллоксановом диабете(Л.К. Гавровская,О.В. Рыжова,А.Ф.Сафонова, И.Я. Александрова, Н.С. Сапронов. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2008 г. Т.71, - 3, - с.34-35). Однако авторы отмечают, что использование таурина и тиоктацида способствует нивелированию нарушений углеводного обмена, снижению летальности животных. Авторы применили оксованадийс гидразидом изоникотиновой кислоты для коррекции при аллоксановом диабете. В исследованиях показано, что соединения ванадия понижает сократительную способность гладких мышц трахеи крыс,а также не вызывает негативное функциональное изменение гладкой мускулатуры дыхательной пути,снижая реактивность гладкомышечных клеток трахеи к раствору карбохолина в максимальной концентрации(Р.Х.Хафизьянова,М.М. Миннебаев,Р.М. Галлямова, Р.С. Латыпов, А.Р. Госманов, Г.Н. Алеева Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003 г. Т. 135, - .6, - с.672-675). Однако авторы отмечают, что эффект, достигаемый препаратом, не связан с устранением диабета. Известен также способ коррекции антидепрессивное действие эмпоксипина и мексидола при аллоксановом диабете у мышей. Развитие аллоксанового диабета сопровождается увеличением длительности поведения отчаяния, и сопутствующим снижением активности животных в открытом поле. После применения эмпоксипина и мексидола через 14 дней их антидепрессивный эффект сопрвождается снижением содержания глюкозы крови у мышей (И.А. Волчегорский,Л.М.Рассохина,И.Ю. Мирошниченко,Экспериментальная и клиническая фармакология,2009, Т.72, - 2, - с.11-15). Однако авторы отмечают, что седативный эффект мексидола по сравнению эмокспина оказался значительно менее выражено. Применение эмоксипина данный эффект сопровождался тенденцией к увеличению концентрации глюкозы в крови. Применение этого лекарственного средства в относительно высоких дозах вызывало достоверно снижение содержания глюкозы в крови от начала экспериментальной терапии. Другой способ коррекции при аллоксановом диабете применение препарата асковертин (в дозе 70 мг/кг) и каровертин (в дозе 60 мг/кг) оказывают ретинопротекторное действие, защищая мембраны форменных элементов крови от свободнорадикального окисления. Курсовое введение асковертина и каровертина приводит к достоверному снижению площади очагов поражения при световом воздействии в 1,5 раз, при освещении на фоне аллоксанового диабета в 1,6 раза. Антирадикальная активность асковертина и каровертина способствует снижению указанных выше деструктивных изменений (Е.Ю. Варакута, 26881 А.А. Жданкина А.В. Потапов и др., Морфология. 2006. - Т. 129. -4. - с.29-30 Е.Ю. Варакута, С.В. Логвинов, М.Б. Плотников и др., Морфология. 2006. - Т.130. - 5. - с.31-32). Однако авторы отмечают, что более выраженный протективный эффект препаратов в отношении данных структур отмечен больше в группе с изолированным световым воздействием, что, вероятно, связано с различием в механизмах, ведущих к образованию высокоактивных радикалов при световом воздействии и аллоксановом диабете. Авторы применили соевое молоко для коррекции организма из расчета 2 г/100 г массы тела при аллоксановом диабете. Авторы для получения экспериментального сахарного диабета у животных аллоксана вводили после 2-х дневного голодания 100 мг/кг массы животных. Определяли содержание глюкозы в крови и массы печени и поджелудочной железы у животных. Авторы отметили, что регулярное употребление соевого молока способствует снижению уровню гипергликемии и содержание концентрации глюкозы в крови у животных (А.П. Левицкий, И.О. Селиванская, Ю.В. Цисельский, Одесский медицинский журнал, - 2004,-6(86),- с. 9-11). Задачей изобретения является разработка способа коррекции нарушений функции лимфатической системы при экспериментальном сахарном диабете путем использования соевого молока и антиоксиданта - -токоферола. Технический результат восстановление нарушенных функций лимфатических сосудов и узлов, увеличение лимфотока и дренажной,барьерной и транспортной функции лимфатической системы при сахарном диабете. В сое - белково-масляной культуре - есть не только углеводы, минеральные вещества, витамины,но и почти 40 легкоусваиваемого белка, который на 85 - 90 состоит из водорастворимых альбуминов и глобулинов,содержит все незаменимые аминокислоты в благоприятных для человеческого организма соотношениях. В соевом молоке содержатся флавоноиды - это натуральные мощные антиоксиданты, они оказывают содействие снижению уровня холестерина в крови, поэтому их уместно вводить в рацион людей, которые страдают на атеросклероз, гипертонию, сердечно-сосудистые заболевания и содержатся фитогормоны. А соевая клетчатка нормализует моторную функцию кишечника, снижает уровень глюкозы в крови. Флавоноиды - наиболее многочисленная группа как водорастворимых, так и липофильных природных биологически активных фенольных соединений, которые объединяют в одну группу в соответствии с их общим свойством - способностью укреплять стенку капилляров. Существенная роль в механизме действия флавоноидов может принадлежать их антиоксидантным свойствам, в частности,способности тормозить свободнорадикальные процессы перекисного окисления липидов, с чем связывают важную роль флавоноидов в профилактике сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний, а также их радиопротекторные свойства. Соевое молоко содержит полноценные белки,жиры и комплекс витаминов, флавоноидов и фитогормонов, которые могут стабилизировать антиоксидантную систему ферментов, активно препятствующих активации перекисного окисления липидов и образованию свободных радикалов. Соевое молоко приобреталось на фирме АО,продукт зарегистрирован в Государственном реестре сертификат соответствия 7500092.01.01.07662 от 19 ноября 2004.г и ТОО(та же фирма переименована) сертификат соответствия 7500092 01.01.11588 от 17 января 2008 г.-токоферол - является одним из наиболее мощных природных антиоксидантов и играет важную роль в механизмах защиты клеток от повреждающего действия свободных радикалов(А.А. Капралов, Г.В. Петрова, Г.В. Донченко. Успехи современой биологии. 1993, Т.113, - 2, с.313-326). Известно, что -токоферол играет важную роль в механизмах функционирования митохондрий. Обладая липофильными свойствами,-токоферол действует, главным образом, в составе клеток и внутриклеточных органелл, а также липопротеинов плазмы крови,препятствуя распространению свободно радикальных реакций,связанных в основном с участием липидных радикалов (., ., ., . . .. . 1997, .67, - 2, -.91-94 Г.В. Петрова,А.А. Капралов, Г.В. Донченко, Украинский биохимический журнал. 2003, Т.75, - 6, - с.25-34). Способ коррекции функциональных нарушений лимфатической системы в эксперименте осуществляют следующим образом. Для коррекции обменных и сосудистых нарушений при аллоксановом диабете крысам предварительно в течение 7 суток вводили в/м масляный раствор -токоферол (1,5 мкг/кг) исоевое молоко (2 мг/100 г) и в течение 21 суток после введения аллоксана. Опыты проведены на 80 взрослых белых лабораторных крысах массой тела 220-250 г. Было сформировано 4 групп крыс. 1-я группа контрольная (15 крыс), 2-я группа (15 крыс) получала по 15 мг/100 г подкожно аллоксана и через 5 дней они были взяты для опыта. 3-я группа (20 крыс) была взята для опыта через 30 дней после введения по 15 мг/100 г подкожно аллоксана. 4-ая группа (30 крыс) получала предварительно в течение 7 суток соевое молоко 1 (2 мг/100 г) и токоферол (15 мкг/кг), затем ввели аллоксан в дозе 15 мг/100 г и продолжали вводить антиоксидант в течение 21 суток. По истечении указанных сроков для каждой группы крыс после наркотизации регистрировали лимфоток из кишечного лимфатического протока. Были изучены морфофункциональные характеристики лимфатических сосудов и узлов, взяты пробы лимфы и крови. Пример 1. Крысе массой тела 220 г. (из 2-ой группы) после введения аллоксана через 5 дней 3 была взята для опыта. Лимфоток из кишечного лимфатического сосуда составил 0,24 мл/час и уменьшился на 25 от контроля. В наших экспериментах было показано, что через 5 дней после введения аллоксана содержание глюкозы в крови повышалось до 10,92,7 ммоль/л, в лимфе до 13,6 ммоль/л (в норме при норме 5,91,2 и 6,41,1 ммоль/л). У крыс контрольной группы содержание инсулина в плазме крови было 20,51,8 мкМЕ/мл. В лимфе оно было значительно ниже 7,70,8 мкМЕ/мл. После получения аллоксана у крыс через 5 дней содержание инсулина в лимфе и крови через 5 дней снижалось 7,50,3 и 6,00,7 мкМЕ/мл, что отражено в таблице 1. Пример 2. Крыса массой тела 220 г (из 3-й группы) для опыта была взята через 30 дней. Лимфоток был низким и равен 0,21 мл/час (в норме 0,32 мл/час). Артериальное давление составило 88102 мм рт. ст. (90-100 мм рт. ст.). Через 30 дней содержание инсулина в лимфе и крови снижалось 3,40,2 и 5,50,4 мкМЕ/мл. Содержание глюкозы в крови составило 16,72,5 ммоль/л, в лимфе 17,93,2,а в моче 7,21,5 ммоль/л, что видно в таблице 1. Как видно из таблицы 2, у крыс после введения аллоксана наблюдалось возрастание уровня ферментов АЛТ в 1,0 раза ив 1,5 раза по сравнению с контрольными группами (0,510,1 и 0,510,1 ммоль/л). Мочевина и креатинина в плазме крови снижалось 5,70,4 и 57,83 ммоль/л (в норме оно составило 8,30,3 и 64,45 ммоль/л соответственно). У крыс 3-ой группы при аллоксановом диабете биохимические исследования лимфы и плазмы крови показали серьезные сдвиги. Содержание глюкозы в крови и лимфе повышалось в 3-3,5 раза (в норме в крови 5,81,3 и в лимфе 6,21,5 ммоль/л). После применения протекторных веществ у крыс 3-ей группы содержание глюкозы в крови и лимфе снижалось по сравнению с 3-ой группой на 43-46(таблица 3). Результаты экспериментов на 2-й и 3-й группах (35 крыс) с аллоксановым диабетом выявили серьезные функциональные нарушения лимфатических сосудов и узлов на, поджелудочной железы и печени, содержания биохимических показателей лимфы и плазмы крови, что представлено на таблице 1 и 2. Содержание общего белка в плазме крови снижалось на 25, а в лимфе - на 36 по сравнению с контролем. Из этих данных следует, что снижается синтез белка в печени и, отсюда, сократился объем фильтрации и резорбции белка в корни лимфатической системы,следовательно,уменьшался процесс лимфообразования,показателем которого является снижение содержания общего белка в лимфе. Полученные данные характерны для начальной формы сахарного диабета. Пример 3. Крыса массой тела 220 г получиласоевое молоко (2 мг/100 г) и -токоферола (15 мкг/кг), в течение 7 дней, затем ввели аллоксан в дозе 15 мг/100 г и продолжали вводить 4 антиоксидант течение 21 суток. Через 28 суток от начала коррекции у крысы отмечены положительные сдвиги, особенно глюкозы и инсулина в плазме крови и лимфе. Динамика биохимических показателей в лимфе и плазме крови у крыс изменились в сторону нормализации(таблица 3). Лимфоток из кишечного лимфатического сосуда крыс группы 3 повышался по сравнению с группой 2 (0,210,02 мл/час) и составил 0,290,02 мл/час. Артериальное давление было в пределах контрольных значений (90-105 мм.рт.ст.). После коррекции содержание общего белка в лимфе 38,72,1 г/л, в плазме крови было 64,54,2 г/л. Концентрация мочевина и креатинина в плазме крови составила - 6,90,2 и 59,80,4 ммоль/л соответственно. Уровень АЛТ составил - 0,80,2, - 1,020,3 ммоль/л, тимоловой пробы - 0,90,04 Ед, билирубина - 10,90,2 мкмоль/л, (таблица 3). В опытах на 4-й группе крыс проведение коррегирующих мероприятий до и после аллоксановым диабетом у крыс оказало положительное действие на морфофункциональное состояние лимфатических сосудов и узлов, на биохимические показателей лимфы и плазмы крови(таблица 3). В лимфе у крыс группы 3 содержание общего белка снижалось на 22, а в плазме крови - на 20 по сравнению с контролем. После коррекции выявленных нарушений антиоксидантными веществами отмечено повышение уровня общего белка в лимфе на 17 (при аллоксановом диабете 32,24,2 г/л), а в плазме крови на 15 (при аллоксановом диабете 54,23,28 г/л) по сравнению с группой 3 (таблица 3). Концентрация мочевины в плазме крови у 2-й группы крыс уменьшилась с 8,2 до 5,3 ммоль/л, а после коррекции ее содержание повышалось, однако, оставалось несколько ниже,чем в контроле (таблица 3). Содержание креатинина в плазме крови группы 4 изменялось незначительно и недостоверно по сравнению с контролем (таблица 3). У крыс 4-й группы в плазме крови после применения комплекса коррегирующих мероприятий (соевое молоко и инъекция в/б-токоферола) содержание ферментов АЛТ иснижалось, но оставалось выше контроля на 56 и 57 соответственно (таблица 3). Из полученного материала видно, что наличие аллоксанового диабета негативно отражается на состоянии внутренней среды организма животных,на лимфодинамике и биохимическом составе лимфы и крови. После коррекции концентрация общего белка в лимфе и плазме крови у крыс 4-й группы,получавших соевое молоко и -токоферол,возрастала, но не достигала контрольного уровня(таблица 3). Время свертывания крови и лимфы в группе 3 несколько увеличивалось, чем в группе 2, в которой крысы с аллоксановым диабетом не получали антиоксиданты. Вязкость снижалась. Таким образом, в наших опытах применение протекторных веществ соевого молока и токоферола при аллоксановом диабете у крыс защищает мембраны -клеток от повреждающего действия аллоксана, дало значительно более высокий эффект - сохранялась первоначальная масса тела и, кроме того, снижался негативный эффект диабета на структуру и функцию лимфатической системы. После применения антиоксиданта отмечено улучшение спонтанной и индуцированной сократительной активности лимфатических узлов. Результаты данных серий опытов позволяют заключить, что предварительная профилактическая процедура антиоксидантными средствами оказала положительное влияние на устойчивость организма,ослабив течение аллоксанового диабета, уменьшала негативный эффект аллоксанового диабета на транспортную функцию лимфатических узлов. В основе положительного эффекта соевого молока и-токоферола на сократительную активность лимфатических узлов лежит защитное влияние антиоксидантов на -клетки поджелудочной железы к повреждающему действию аллоксана. Эти антиоксидантные средства предотвращали резкие нарушения углеводного обмена и адренергической иннервации лимфатических структур. Таблица 1 Содержание глюкозы и инсулина в крови, лимфе и моче у крыс с аллоксановым диабетом Показатели до введения через 5 дней через 30 дней до введения через 5 дней через 30 дней Кровь Лимфа Содержание глюкозы (ммоль/л) 5,91,2 6,41,5 10,92,7 13,62,2 16,72,5 17,93,2 Содержание инсулина мкМЕ/мл 20,51,8 7,70,8 7,50,3 6,00,7 5,50,4 3,40,2 Примечание - достоверно по сравнению с контролем при- р 0,05 Таблица 2 Динамика биохимических показателей в лимфе и плазме крови у крыс при аллоксановом диабете Наименование 1-я группа 3-я группа 30 дней Общий белок г/л Лимфа 41,33,5 32,24,2 Плазма крови 68,32,3 54,23,28 Мочевина, ммоль/л 8,30,3 5,70,4 Креатинин, ммоль/л 64,45 57,83 Билирубин общий, мкмоль/л 10,40,7 11,70,9 Тимоловая проба, Ед 0,70,02 1,00,6 АЛТ, ммоль/л 0,510,1 1,020,2, ммоль/л 0,650,1 1,630,2 Примечание - достоверно по сравнению с контролем, р 0,05,-р 0,01 Таблица 3 Лимфо - и гемодинамика и биохимические показатели лимфы и плазмы крови у крыс при аллоксановом диабете и после антиоксидантной коррекции Наименование Лимфоток, мл/час АД, мм рт. ст. В лимфе В крови В моче В лимфе В крови, ммоль/л 0,650,1 1,630,2 1,020,3 Примечание - достоверно по сравнению с контролем, - р 0,05, - р 0,01 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ коррекции функциональных нарушений лимфатической системы при аллоксановом диабете у крыс, включающий применение соевого молока в качестве антиоксиданта, отличающийся тем, что дополнительно внутримышечно вводят масляный раствор -токоферола ацетата, в дозе 15 мкг/кг массы тела животного.