Лекарственное средство – экстракт Вексибии лисохвостной, обладающее ранозаживляющим и противомикробным действием

(51) 61 36/00 (2006.01) 61 17/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ПОЛЕЗНОЙ МОДЕЛИ К ПАТЕНТУ Использование в народной медицине и в быту. Издательство -Лениздат, -1990, С.25(54) ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ЭКСТРАКТ ВЕКСИБИИ ЛИСОХВОСТНОЙ,ОБЛАДАЮЩЕЕ РАНОЗАЖИВЛЯЮЩИМ И ПРОТИВОМИКРОБНЫМ ДЕЙСТВИЕМ(57) Полезная модель относится к фармации, в частности к лекарственным средствам, обладающим противомикробным и ранозаживляющим действием. Применение Вексибии лисохвостной, в виде жидкого спиртового экстракта в качестве противомикробного и ранозаживляющего средства. Предлагаемый препарат расширяет арсенал лекарственных средств, применяемых в медицине в качестве фитотерапевтических.(72) Кустова Татьяна Сергеевна Карпенюк Татьяна Анатольевна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем экологии Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Казахский национальный университет им. аль-Фараби Министерства образования и науки Республики Казахстан Полезная модель относится к фармации, в частности к лекарственным средствам, обладающим ранозаживляющим и противомикробным действием. Биологически активные вещества(БАВ) растений представлены разнообразными классами органических соединений алкалоидами,гликозидами, дубильными веществами, сапонинами,флавоноидами, кумаринами и фурокумаринами,органическими кислотами, витаминами, жирными маслами, эфирными маслами, пектинами, лигнанами и другими веществами. Они поддерживают кислотно-щелочное равновесие в организме,предупреждают развитие атеросклероза,используются как бактерицидные, ветрогонные,мочегонные,желчегонные,болеутоляющие,успокаивающие и отхаркивающие средства,ускоряют заживление ран, регулируют секреторную функцию желудочно-кишечного тракта,стимулируют сердечную деятельность, обладают противовоспалительным,сосудорасширяющим,сосудоукрепляющим и другими видами фармакологического действия. При правильном применении растительные препараты обладают более мягким действием, менее токсичны, чем синтетические, и, в большинстве случаев, не вызывают привыкания и аллергии. Благодаря этому применение фитотерапии в комплексном лечении многих заболеваний приводит к предупреждению их прогрессирования и снижению количества осложнений. В последние годы в Казахстане уделяется большое внимание разработке и внедрению в производство отечественных фитопрепаратов разного спектра действия. Несмотря на это доля лекарственных средств отечественного производства на основе физиологически активных компонентов растений,составляет крайне малый процент по отношению к общему количеству зарегистрированных лекарственных средств. При этом на территории Республики Казахстан произрастает более 6000 видов растений, способных стать при надлежащем исследовании сырьевой базой для создания и производства новых оригинальных отечественных фитопрепаратов. В связи с этим испытание биологически активных соединений из высших и низших растений Казахстана представляет собой актуальную и перспективную задачу. Известен сбор лекарственных трав, включающий чертополох курчавый, зверобой продырявленный,траву татарника колючего,обладающий противовоспалительным,ранозаживляющим и противомикробным действиями.(Бендер К.И., Гоменюк Г.А., Фрейдман .Л. Указатель по применению лекарственных растений в научной и народной медицине. / Саратовский ун-т.- С., 1988.- С. 84-92.). Недостатком данного лекарственного сбора является его невысокая эффективность,возможность развития аллергических реакций. Известно лекарственное средство растительного происхождения Биосед, представляющее собой 2 водный экстракт свежей травы очитка большого. Препарат усиливает процессы обмена и регенерации, оказывает противовоспалительное и ранозаживляющее действия.(Машковский М.Д. Лекарственные средства. -М. Медицина.-1993.-Ч. 2.-С. 175). Однако Биосед обладает побочным эффектом,так как при его применении могут отмечаться гиперемия и уртикальная сыпь, а также он имеет противопоказания (ахилия и злокачественные новообразования), не обладает противомикробным действием, что ограничивает сферу его применения. Известно лекарственное средство растительного происхождения Салсоколин, содержащий сухой экстракт солянки холмовой,обладающий ранозаживляющим и гепатопротекторным действием, антиоксидантной активностью.(Ракишева А.С. Медико-социальные и клиникоэпидемиологические аспекты туберкулеза в пенитенциарных учреждениях. - Автореферат дисс док.мед.наук.-Алматы.-2002.-С.32-33.) Недостатком данного фитопрепарата является то, что он не обладает противомикробным действием. Известно лекарственное средство растительного происхождения, содержащее эфирные масла растений семейства губоцветных (Се. ) душицы(Патент 2127597, МПК А 61 К 35/78,20.03.1999 г.) Недостатками данного препарата является то,что он не обладает ранозаживляющим действием. Наиболее близким к заявляемому является лекарственное средство жидкий спиртовый экстракт хвоща полевого ,изготовленный методом перколяции на 60 спирте,обладающий противовоспалительным,антиоксидантным,ранозаживляющим,диуретическим, дезинтоксикационным действиями. Л.В.Пастушенков,А.В.Пастушенков,В.Л. Пастушенков Кн. Лекарственные растения. Использование в народной медицине и в быту. Издательство -Лениздат, -1990, С.25. Недостатками данного препарата является наличие большого количества противопоказаний,так, препарат не применяется при гипертиреозе,туберкулезе легких, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, нефрозе, нефрите,беременности, повышенной чувствительности к йоду. Кроме того, принимать препараты из хвоща полевого необходимо под наблюдением врача,строго соблюдая назначенный режим лечения. То есть применение жидкого спиртового раствора ограничено. Научная новизна данной разработки заключается в создании и изучении эффективности многокомпонентных комплексов БАВ из растений Казахстана, всестороннем изучении биологической активности природных соединений. Было изучено растение Вексибия лисохвостная всему миру насчитывается более 52 видов,большинство из них распространены в Азии. Около 15 видов данного рода широко используется в традиционной Китайской медицине. В последние десятилетия использование этого рода в традиционных китайских лекарственных средствах привело к быстрому росту информации по активным веществам и различным фармакологическим и лечебным свойствам,большинство алкалоидов софоры были признаны их главными активными химическими компонентами,включая матрин, оксиматрин, софорокарпин. А также флавониоды, изофлавоноиды, флавоны,флавонолы и их гликозиды,сапонины,тритерпеновые гликозиды,фосфолипиды,полисахариды, и жирные кислоты. Сырье. Объектом исследований являлось собранное в экспедиционных выездах по Алматинской области дикорастущее растение флоры Казахстана Вексибия лисохвостная ((.) .). Растение было собрано в фазу цветения. Идентификация растения проводилась сравнением его с коллекционным материалом Гербария Института ботаники и фитоинтродукции МОН РК и по определителям. Анализ имеющихся литературных источников показал, что систематические исследования данного растения в Казахстане не проводились, хотя имеются сведения о широком использовании растений этого вида в народной медицине Китая. Задача полезной модели разработка лекарственного средства,обладающего ранозаживляющим и антимикробным действием на основе лекарственного растения Вексибия лисохвостная ( ). Технический результат - расширение арсенала лекарственных средств, применяемых в медицине в качестве фитотерапевтических. Указанный технический результат достигается путем применения лекарственного растения Вексибии лисохвостной ( ) в виде жидкого спиртового экстракта в качестве ранозаживляющего и антимикробного средства. Ранозаживляющее и антимикробное свойства лекарственного препарата Вексибии лисохвостной,изготовленного в виде жидкого спиртового экстракта доказаны путем научных исследований. Изучение антимикробной активности экстракта Вексибии лисохвостной ( ). В связи с тем, что выделяемые микроорганизмы у больных с гнойно-некротическими формами диабетической стопы сильно разнятся в разных источниках. Был проведен бактериальный посев из раневой поверхности для установления точных микроорганизмов, поражающих стопы больных диабетом. Для этого кожу вокруг раны обрабатывали антисептиком, удаляли с помощью стерильной салфетки некротические массы, детрит и гной. Материал брали с помощью стерильного тампона. Тампон помещали в транспортную среду, в течение 3 часов доставляли в лабораторию. Идентификацию микроорганизмов проводили,выделив чистые культуры согласно стандартным процедурам и методикам. Бактериальный посев из раневой поверхности выявил наличие трех доминирующих микроорганизмов, ,(таблица 1),что свидетельствовало о смешанной флоре раневой поверхности, которая плохо поддается лечению антибактериальными препаратами. В связи с полученными результатами бактериального посева, для скрининга суммарных экстрактов,обладающих антибактериальной активностью были выбраны следующие сертифицированные штаммы микроорганизмов из Американской коллекции культур бактерии Таблица 1 Морфофункциональные признаки культур,,выделенных из раневой поверхности Параметры Морфология Форма колоний Профиль Оптические свойства Цвет Консистенция.С.Микроскопия исследуемого материала Грамположительные кокки в Грамотрицательные Грамположительно скоплениях (грозди) палочки окрашенные клетки Культуральные свойства микроорганизмов (рост на твердой среде) Круглая Круглая Круглая Выпуклый Выпуклый Плоская Непрозрачный Прозрачный Непрозрачный Желтый Мягкая Скрининг экстракта для выявления антимикробной активности определяли методом серийных разведений в бульоне. Первичный скрининг экстракта проводили в двух повторностях. Если исследуемый образец демонстрировал зону ингибирования роста тест-объектов, превышающую 3 50, то данный экстракт повторно исследовался для установления концентрации полумаксимального ингибирования (50). Результаты исследования. Полученные данные показали, что экстракт Вексибии лисохвостной( ) обладает избирательной антимикробной активностью и показал больше 50 ингибирование по отношению к представителям рода(см. таблицу 2). Для подтверждения полученных данных,провели повторное исследование антимикробной активности экстракта,чтобы установить концентрацию полумаксимального ингибирования(50). Результаты вторичного скрининга показали(таблица 3), что суммарный экстракт Вексибии лисохвостной обладает высокой антимикробной активностью в отношении(50 2,9 мкг / мл). Таблица 2 Первичный скрининг растительного экстракта на антимикробную активность Вторичный скрининг растительных экстрактов на антимикробную активность Исследуемый экстракт(корни) 50, 50 ингибирующая концентрацияв таблице представлены среднее значениестандартное отклонение (3) Экстракт является активным, если 5020 мкг / мл Также были проведены эксперименты по определению антимикробной активности фракций,полученных из суммарного экстракта Вексибии лисохвостной ( ). Из выделенных 10 фракций, три фракции , ,обладали избирательной антибактериальной активностью (таблица 4) по отношению к( 0,8 мкг / мл) иР..( 0,8 мкг / мл). Фракции Е и Н также обладали антимикробной активностью,однако помимо высокой антибактериальной активностью по отношению к( 0,8 мкг / мл), данные фракции обладали и антигрибковой активностью по отношению к штаммам . Таблица 4 Скрининг фракций экстракта Вексибии лисохвостной( ) на антимикробную активность Исследуемый экстракт 50 (мкг/мл) Фракции суммарного экстракта 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 0,8 0,8 20 20 20 0,8 0,8 20 15,08 20 1,290,4 1,70,7 20 20 20 4,68 5,31 20 20 20 0,8 0,8 20 3,82 17,73 1,72 0,8 20 20 20 11,10 6,46 20 20 20 0,10,02 0,10,01 0,10,01(контроль) Примечание - в таблице представлено среднее значениестандартное отклонение (3) Согласно данным антимикробной активности фракций Вексибии лисохвостной) наблюдается антагонистическое действие биологически активных веществ в составе данного экстракта, так как не наблюдается активности по отношению к роду , однако после фракционирования две фракции показали хорошую антимикробную активность по отношению к данному роду. Таким образом, доказана антимикробная активность данного экстракта. Изучение ранозаживляющей активности экстракта Вексибии лисохвостной). Для изучения влияния экстракта Вексибии лисохвостной) на морфометрическую и микробиологическую картину кожной раны крыс, была смоделирована гнойная рана в условиях экспериментального сахарного диабета. Для этого, через 8 суток после воспроизведения модели стрептозотоцинового диабета в асептических условиях было произведено удаление волосяного покрова и обработка кожи настойкой йода с последующим моделированием раны путем иссечения кожного лоскута 11 см в области холки, с дальнейшим внесением в раневой дефект . , содержащего в 1 мл 2107 микробных тел (концентрация определялась по стандарту мутности). Наличие местного гнойного процесса оценивали на 4 сутки. В работе использовался клинический штамм . , выделенный с раневой поверхности пациента больного диабетической стопой. После получения экспериментальной модели гнойновоспалительного очага, лабораторные животные были разделены на три группы по 6 животных в каждой группе. Первая группа контрольная - не леченные животные, вторая группа референтное вещество - мазь Левомиколь, третья группа животных, получала комплексный экстракт,выделенный из корней Вексибии лисохвостной( ). Препараты наносились в ввиде апликаций на раневую поверхность в течение 9 дней. Для подтверждения гипергликемии у крыс один раз в 7 дней замерялся уровень глюкозы в кови, в связи с тем что, в отличии от больных сахарным диабетом, гипергликемия у животных носит волнообразный характер, из-за регенерации части островков в поджелудочной железе. Наши исследования подтвердили сохранение гипергликемии на всем сроке эксперимента. Результаты исследования. При наблюдении за животными с экспериментальным сахарным диабетом отмечалась вялость животных,значительное увеличение потребления воды и обильное выделение мочи. Таким образом, путем ввдения стрептозотоцина удалось получить выраженные нарушения углеводного обмена, что подтверждается развитием гипергликемии (таблица 5) и потерей веса животных. Таблица 5 Уровень глюкозы крови у крыс Группа животных Уровень глюкозы до введения стрептозотоцина ммоль/л Уровень глюкозы животных на 7 сутки после введения стрептозотоцина ммоль/л 27,21,4 Уровень глюкозы р животных на 20 сутки после введения стрептозотоцина ммоль/л 23,41,2 0,01(нелеченные животные) Референтное вещество мазь Левомиколь,Экстракт На протяжении всего исследования наблюдалось достоверное снижение массы тела крыс (таблица 6), что подтверждается высоким уровнем глюкозы в крови. Таблица 6 Масса тела крыс в исследуемых группах Группа животных Вес животного до введения стрептозотоцина, г Контрольная группа 31311,3 Вес животногона 7 день после ввдения стрептозотоцина, г 2799,6 Вес животногона 20 день после ввдения стрептозотоцина, г Микробиологическую картину раневого процесса оценивали на 2 сутки от начала нанесения раны на 4, 6, 8, 10, 12. Проводили посев с раны на селективные среды, в том числе и с ЖСА с последующей идентификацией, для подтверждения инфицирования раны. На шестые сутки от начала лечения комплексным экстрактом, выделенным из корней Вексибии лисохвостной ( ), не наблюдается высев штамма .с раневой поверхности, что подтверждает антимикробые свойства данного экстракта. На протяжении всего периода лечения проводили ежедневный замер раны до окончания эксперимента. На четвертый день после заражения ран . , размеры ран увеличились и составили более 120 от первоначальных размеров. После санации раневой поверхности размер ран стал уменьшаться во всех исследуемых группах. Однако полученные нами данные свидетельствуют о значительном уменьшении площади раны именно в группе, пролеченой комплексным экстрактом,выделенным из корней Вексибии лисохвостной( ) на 9 день. И уже на 12 наблюдалось полное закрытие раневого дефекта, в области раны сформировался рубец, а в контрольной группе к 12 суткам только началось снижение площади раны. Полученные результаты представлены в таблице 7. Таблица 7 Динамика изменения площади ран в исследуемых группах от начала нанесения и заражения раны. Группа животных(не леченные животные) Референтное вещество мазь Левомиколь,Экстракт Таким образом экстракт, выделенный из корней Вексибии лисохвостной ( ),показал высокую ранозаживляющуую активность. ФОРМУЛА ПОЛЕЗНОЙ МОДЕЛИ Применение Вексибии лисохвостной, в виде жидкого спиртового экстракта в качестве противомикробного и ранозаживляющего средства.