Лекарственное средство экстракт цистанхе солончаковой жидкий, обладающее противовоспалительным, антиоксидантным и анальгетическим действием

(51) 61 36/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ПОЛЕЗНОЙ МОДЕЛИ К ПАТЕНТУ(54) ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ЭКСТРАКТ ЦИСТАНХЕ СОЛОНЧАКОВОЙ ЖИДКИЙ,ОБЛАДАЮЩЕЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ,АНТИОКСИДАНТНЫМ И АНАЛЬГЕТИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ(57) Изобретение относится к фармации, в частности к лекарственным средствам, обладающим противовоспалительным,антиоксидантным и анальгизирующего действиями. Применение цистанхе солончаковой в виде жидкого спиртового экстракта в качестве противовоспалительного,антиоксидантного и анальгезирующего средства. Предлагаемый препарат расширяет арсенал лекарственных средств, применяемых в медицине в качестве фитотерапевтических.(72) Сакипова Зуриядда БектемировнаДатхаев Убайдулла Махамбетович Ибрагимова Лилия НиколаевнаКартбаева Эльмира БекболовнаКапсалямова Эльмира НиколаевнаТернинко Инна ИвановнаЕртаева Меруерт Сериковна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Казахский национальный медицинский университет им. С.Д. Асфендиярова Министерства здравоохранения и социального развития Республики Казахстан Полезная модель относится к фармации, в частности к лекарственным средствам, обладающим противовоспалительным,антиоксидантным и анальгетическим действием. Применение лекарственных средств растительного происхождения имеет ряд преимуществ перед синтетическими аналогами. Сложный комплекс биологически активных веществ лекарственных растений оказывает более мягкий, но достаточно выраженный лечебный эффект, что крайне важно при лечении хронических заболеваний. Лекарственные средства растительного происхождения воздействуя системно на организм, регулируют функции различных взаимосвязанных систем и органов,практически не имеют побочных эффектов и могут применяться как для лечения, так и для профилактики. Хорошая переносимость и высокая безопасность природных лекарственных препаратов делают их незаменимыми для проведения профилактики и противорецидивного лечения у взрослых и детей. Применение препаратов природного происхождения позволяет сделать перерыв в лекарственной терапии, избежать развития привыкания и лекарственной зависимости,стимулировать собственные адаптационные и защитные системы организма. В виду вышесказанного поиск природных источников лекарственных субстанций и разработка новых отечественных лекарственных препаратов,является актуальной задачей фармакологии. Известен сбор лекарственных трав, включающий чертополох курчавый, зверобой продырявленный,траву татарника колючего,обладающий противовоспалительным,антиоксидантным,мочегонным, противомикробным действиями.(Бендер К.И., Гоменюк Г.А., Фрейдман С.Л. Указатель по применению лекарственных растений в научной и народной медицине. / Саратовский унт.- С., 1988.- С. 84-92.). Недостатком данного лекарственного сбора является его невысокая эффективность,возможность развития аллергических реакций. Известно лекарственное средство Биосед,представляющее собой водный экстракт свежей травы очитка большого. Препарат усиливает процессы обмена и регенерации, оказывает противовоспалительное,антиоксидантное и ранозаживляющее действия, в связи с его способностью к стимуляции обменных и регенерационных процессов.(Машковский М.Д. Лекарственные средства. -М. Медицина.-1993.-Ч. 2.-С. 175). Однако Биосед обладает побочным эффектом,так как при его применении могут отмечаться гиперемия и уртикальная сыпь, а также он имеет противопоказания (ахилия и злокачественные новообразования), что ограничивает сферу его применения. Известен фитопрепарат оказывающий противовоспалительное,иммуномодулирующее,анаболическое действие для перорального применения, содержащий в качестве растительного 2 экстракта конденсированный экстракт люцерны и наполнители при следующем соотношении компонентов мас. Конденсированный экстракт люцерны - 50,0-90,0 Наполнители - 9,6-53,0 в качестве которых содержит глюконат кальция,сахарозу, стеарат кальция и тальк при следующем соотношении компонентов мас. Конденсированный экстракт люцерны - 50,0-90,0 Глюконат кальция - 4,0-25,0 Сахароза - 5,0-25,0 Стеарат кальция - 0,2-1,0 Тальк - 0,4-2,0(Патент Российской Федерации 2116079 МПК А 61 35/78, А 61 9/20, Дата публикации 27.07.1998) Однако способ получения препарата достаточно сложен и длителен. Наиболее близким к заявляемому является лекарственное средство жидкий спиртовый экстракт хвоща полевого ,изготовленный методом перколяции на 60 спирте,обладающий противовоспалительным,антиоксидантным,ранозаживляющим,диуретическим, дезинтоксикационным действиями.(Пастушенков В.Н. Растительные ресурсы.1990.-С.25). Недостатками данного препарата является наличие большого количества противопоказаний,так, препарат не применяется при гипертиреозе,туберкулезе легких, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, нефрозе, нефрите,беременности, повышенной чувствительности к йоду. Кроме того, принимать препараты из хвоща полевого необходимо под наблюдением врача,строго соблюдая назначенный режим лечения. То есть применение жидкого спиртового раствора ограничено. Нами проведено детальное изучение растения Цистанхе солончаковая ( ). Это многолетнее паразитическое,более менее волосистое растение, из семейства заразиховых, высотой 10-40 см. Стебель неветвистый, толстый, желтоватый, в средней части толщиной 5-20 мм, к основанию значительно утолщенный, усаженный продолговато-ланцетными,очередными чешуями такого же цвета. Цветки у цистанхе сидячие или почти сидячие, собраны в верхушечное коротко-цилиндрическое,густое соцветие 5-25 см длины. Венчик длиной 25-35 мм,туповато-колокольчатый, слабо вперед согнутый, со светло-желтой трубкой и фиолетовым отгибом. Отгиб с 5 почти одинаковыми округлыми лопастями. Плоды - яйцевидные коробочки,раскрывающиеся двумя створками. Цветет цистанхе солончаковая в апреле - мае. Распространение и места обитания. В пределах Казахстана встречается цистанхе солончаковая на солонцах, солончаках, глинистых, реже меловых,известняковых почвах, в степях и полупустынях. Паразитирует на растениях семейства маревых Для оценки влияния исследуемого вещества на острое экссудативное воспаление применялся метод формалинового отека лапки у крыс (модификация методаС.). Исследования проводились согласно руководства по проведению доклинических исследований (Миронов А.Н. и соавт., 2012). Острая воспалительная реакция была воспроизведена субплантарным введением 0,1 мл 2 раствора формалина. Выраженность воспалительной реакции оценивалась через 3 часа после индукции воспаления по измерению объема лапки онкометрически. Исследуемое вещество вводилось в желудок с помощью зонда за 1 час до введения формалина в объеме 2 мл в разных разведениях. В контрольных группах животным вводили по 2 мл дистиллированной воды и препарата сравнения ибуфена в дозе,соответствующей массе тела животных (из расчета 5 мг ибуфена при весе крыс 200 гр). Препарат сравнения - Ибуфен, суспензия для приема внутрь, 100 мг/5 мл (производитель Медана Фарма, Польша). В эксперименте использовались крысы весом 200-220 г. Животные были разделены на 5 групп по 6 особей в каждой 1 группа отрицательный контроль(дистиллированная вода) 2 группа - положительный контроль (ибуфен) 3 группа - опытная группа (экстракт цистанхе в разведении 15) 4 группа - опытная группа (экстракт цистанхе в разведении 110) 5 группа - опытная группа (экстракт цистанхе в разведении 115). Проведение экспериментальных исследований одобрено Локальной этической комиссией КазНМУ им. С.Д. Асфендиярова (заявка 107 от 30.10.2014 г). Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программы 20074.8.1. В связи с небольшим размером выборки был использован непараметрический -критерий Манна-Уитни для сравнения двух независимых выборок. Результаты исследования. Противовоспалительное действие экстракта цистанхе оценивалось по изменению объема лапки животных, полученные данные представлены в таблице 1. Таблица 1 Изменение объема лапки в экспериментальных и контрольных группах Сырье. С лечебной целью применяют сырье цистанхе солончаковой ( ) в фрагментируемом виде,являющееся физиологически активным сырьем (Инновационный патент 29370 от 24.02.2014). Химический состав. Цистанхе солончаковая содержит углеводы и родственные соединения,органические кислоты (янтарную), иридоиды(лириодендрин,сирингин), флавоноиды (0,55). В результате проведенных научных исследований установлено, что спиртовый экстракт цистанхе обладает противовоспалительным,антиоксидантным и анальгезирующим действием. При проведении поиска сведений о таком действии цистанхе мы не обнаружили. Анализ имеющихся литературных источников показал,что систематические исследования растенияв Казахстане не проводились, хотя имеются сведения о широком использовании этого растения в народной медицине Китая при ряде заболеваний половой сферы у мужчин. Задача полезной модели- разработка лекарственного средства,обладающего противовоспалительным,антиоксидантным и анальгезирующим действием на основе лекарственного растения Цистанхе солончаковая( ). Технический результат - расширение арсенала лекарственных средств, применяемых в медицине в качестве фитотерапевтических. Указанный технический результат достигается путем применения Цистанхе солончаковой в виде жидкого спиртового экстракта в качестве противовоспалительного,антиоксидантного и анальгезирующего средства. Противовоспалительное, антиоксидантное и анальгезирующее свойства лекарственного препарата цистанхе солончаковой ( ),изготовленного в виде жидкого спиртового экстракта доказаны экспериментально. Эксперимент проводился следующим образом Изучение противовоспалительной активности экстракта цистанхе эффекта экстракта цистанхе, превышающего по активности препарат сравнения - ибуфен. При этом,следует отметить прямую зависимость концентрации экстракта цистанхе и противовоспалительной активности. С помощью статистических методов было проанализировано изменение объема лапки у животных в экспериментальных и контрольных группах. Т.е. первой группой сравнения были животные, получавшие дистиллированную воду или ибуфен, а второй группой сравнения были соответственно опытные группы животных,получавшие экстракт цистанхе в различных разведениях (3 группы). Результаты сравнения представлены в таблице 2. Таблица 2 Сравнение результатов в экспериментальных и контрольных группах В 1-ой группе животных объем лапки увеличился в среднем на 5,6, во 2-ой группе - на 3,7, 3-ей группе - на 2,3, в 4-ой группе - 3,5, в 5-ой - на 3,7. Таким образом, объем лапки больше увеличивался в группе отрицательного контроля(дистиллированная вода). В экспериментальной группе, получавшей цистанхе в разведении 115,прирост объема лапки животных соответствовал показателям контрольной группы, получавшей ибупрофен. В группе животных, получавших экстракт цистанхе в разведении 110 и 15,показатели прироста объема лапки превышали таковые показатели в контрольной группе(ибупрофен). Эти данные свидетельствуют о наличии выраженного противовоспалительного Группа сравнения 1 вода Группа цистанхе сравнения 2 1/15 Уровень значимости Р 0,078 Таким образом, статистический анализ показал,что при уровне значимости Р 0,05, различия между группой животных, получавших воду и группами животных, получавших цистанхе в разведениях 1/10 и 1/5, являются достоверными (Р 0,05), тогда как в остальных группах различия являются статистически не достоверными. Это говорит о том,что цистанхе в разведениях 1/10 и 1/5 действительно достоверно снижает проявления воспаления, т.е. обладает выраженными противовоспалительными свойствами. Выводы. Экстракт цистанхе в условиях эксперимента показал наличие противовоспалительного действия, не уступающего по активности нестероидным противовоспалительным средствам, что дает основание считать его перспективным для дальнейшего углубленного изучения с целью создания новых лекарственных форм и внедрения в клиническую практику. Изучение антиоксидантной активности цистанхе Антиоксидантную активность спиртового экстракта цистанхе солончаковой, полученного путем измельчения до размеров 1-3 мм сухих фрагментированных столонов,проведения 3-кратного экстрагирования с периодическим перемешиванием спиртом этиловым в концентрациях 20 или 60 в течение 14 дней,перемешивания в течение 4-5 ч, отстаивания однородного экстракта при температуре 8-10 С в течение 3-х дней с последующим отделением надосадочной жидкости, е фильтрации и сгущения оценивали с помощью теста(2,2-дифенил-1 пикрилгидразил). Данный тест основан на измерении способности к улавливанию стабильного свободного радикала , осуществляется быстро и легок в применении. Свободный радикал ,который поглощает при 517 нм, восстанавливается до соответствующего гидразина, когда он взаимодействует с донорами протона- -2 С 50 соответствует концентрации экстракта,вызывающей 50 снижение поглощения метанольного раствора(25 мкг/мл). В этих условиях витамин Е имеет 50 610 мкг/мл, а спиртовый экстракт цистанхе солончаковой показал 50 62 мкг/мл. Таким образом, данный экстракт обладает антиоксидантной активностью, и, следовательно,его можно применять в качестве антиоксидантного средства. Изучение анальгетической активности цистанхе Анальгетическую активность изучали на модели уксусных корчей. Экстракт цистанхе вводили в разведении 110 интраперитонеально в виде раствора. В качестве растворителя для тестируемого препарата использовали изотонический раствор натрия хлорида. В группе сравнения применяли аспирин в дозе 100 мг/кг, в контроле - 0,9-ный раствор натрия хлорида в эквиобъемных количествах. В исследовании использовали белых лабораторных мышей весом 20-22 г. Через 30 мин после введения тестируемого препарата животным интраперитонеально вводили 0,9 раствор уксусной кислоты по 0,25 мл и помещали их в пластиковый бокс. Количество корчей регистрировали с помощью каунтера. На модели уксусных корчей экстракт цистанхе проявил выраженную анальгетическую активность. Эффективность экстракта цистанхе составила 66,и превосходила действие аспирина в 1,2 раза. Результаты приведены в таблице 3. Таблица 3 Анальгетическая активность экстракта цистанхе Вариант опыта Контроль Аспирин Экстракт цистанхе Приведены результаты измерений 10 наблюдений. Все результаты опытных групп достоверно отличаются от показателей контрольной группы.- достоверность различий с группой сравнения Р 0,05. Таким образом, в результате проведенных исследований, можно сделать вывод, что экстракт цистанхе обладает выраженной антиэкссудативной активностью и ей свойственны значительные анальгетические свойства. Изучение острой и подострой токсичности Материалы и методы Изучение острой токсичности исследуемого экстракта проводилось согласно методическим рекомендациям,утвержденным Фармакологическим Комитетом РК. В экспериментах использовались линейные белые мыши весом 18,0-22,0, одного пола, возраста,разделенные на серии по 6 животных в каждой,находившиеся на стандартной диете в условиях вивария (предварительный карантин 14 дней). Острая токсичность определялась путем однократного энтерального введения исследуемого вещества, приготовленного на дистиллированной воде непосредственно перед введением в трех соотношениях 15 110 115. Для изучения острой токсичности вещество водили однократно внутрижелудочно с помощью металлического зонда. Для изучения подострой токсичности вещество вводили ежедневно в течение 4-х недель. В ходе эксперимента регулярно фиксировались общее состояние животных поведение,интенсивность и характер двигательной активности,наличие и характер судорог, координация движений, тонус скелетных мышц. Изучалась реакция на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, а также частота и глубина дыхательных движений,ритм сердечных сокращений, состояние волосяного и кожного покрова, окраска слизистых оболочек, размер зрачка, положение хвоста, потребление корма и воды. Патоморфологические проявления токсичности оценивали макро- и микроскопически в конце эксперимента после эвтаназии (декапитацией под легким эфирным наркозом) выживших животных. Результаты экспериментов показали отсутствие патологического характера изменений общих показателей на протяжении всего периода исследований. Животные во всех группах оставались активными, признаков интоксикации и изменений со стороны дыхательной, сердечнососудистой, центральной нервной систем не зафиксировано. Состояние волосяного покрова,слизистых оболочек без изменений. Потребление корма и воды в прежнем режиме. Масса тела животных оставалась на уровне исходных цифр. При проведении гистологических исследовании внутренних органов (печень, почки и легкие) без изменений. Падежа среди животных не наблюдалось, в связи с этим определение 50 не представлялось возможным. Макроскопическое исследование. При вскрытии животных экспериментальных групп внутренние органы в торакальной и абдоминальной полостях были обычными по цвету, консистенции, анатомотопографическим параметрам. Внутренние органы животных анатомически правильной формы, их положение анатомически правильно. Величина и форма сердца изменений не представляли. Мышца сердца была коричневатой, плотной. Поверхность легких имела бледно-розовую окраску легкие спадались при вскрытии грудной клетки. Ткань на разрезе также имела однородную бледно-розовую окраску. Слизистая оболочка внелегочных бронхов была гладкой,блестящей,бледнорозовой,кровоизлияния не отмечены. Слизистая тела желудка была бледно-розовой,блестящей,складчатой,кровоизлияний,изъязвлений не выявлено. Слизистая тонкой и толстой кишки была блестящей,бархатистой,кровоизлияний,изъязвлений не отмечено. Печень обычной величины и формы. Капсула печени была тонкой,прозрачной. Ткань печени имела коричневатый цвет умеренно плотную консистенцию. Величина и форма почек не отличались от контроля, капсула легко снималась. Поверхность органа была гладкой,однородной, коричневато-сероватой окраски. На разрезе почек отчетливо различались корковое и мозговое вещество. Селезенка имела темновишневый цвет, гладкую поверхность, плотноватую консистенцию. Гистологическое исследование. При исследовании легких мышей опытной группы, получавших изучаемый экстракт во всех разведениях, альвеолярные полости свободные,эпителий бронхиального дерева красится интенсивно. Отмечаются единичные участки свежих кровоизлияний от декапитации. Признаков нарушения кровообращения не обнаружено. При исследовании почек мышей, получавших изучаемый экстракт цистанхе во всех разведениях,эпителий канальцев равномерно окрашен, ядра хорошо воспринимают красители. Сохранена нормальная гистологическая структура. Кровоизлияний нет,признаков отека не обнаружено. При исследовании печени мышей опытной группы гепатоциты интенсивно воспринимают красители, кровоизлияний нет, гистологическая структура не нарушена, расположение балок 5 обычное. Нарушений кровообращения не наблюдается. Таким образом,макроскопическое и микроскопическое исследование внутренних органов показало, что пероральное введение исследуемого экстракта во всех разведениях, при однократном и повторном введении в течение 4-х недель, не вызывало общепатологических и специфических деструктивных изменений во внутренних органах животных. Эти данные свидетельствуют об отсутствии токсического эффекта. Изучение местно-раздражающего и аллергизирующего действия. Материал и методы исследования Для изучения местнораздражающего действия были использованы белые кролики разного пола, в количестве 6 особей для изучения аллергизирующего действия в экспериментах использовались морские свинки разного пола,разделенных на 2 группы по 6 животных в каждой,находившихся на стандартной диете в условиях вивария (предварительный карантин 14 дней). Для работы был использован водный раствор экстракта цистанхе в соотношении 15. Исследования проводились согласно руководству по проведению доклинических исследований(Миронов А.Н., и соавт., 2012). Для изучения местнораздражающего действия исследуемое вещество вводили в конъюнктивальный мешок кроликов в объеме 0,1 мл. Степень местнораздражающего действия оценивали по четырехбалльной шкале через 3 ч и 24 ч после их введения в конъюнктивальный мешок глаза кролика. Для изучения аллергизирующей активности изучалась методами эпикутанной и пероральной сенсибилизации исследуемым веществом экстрактом цистанхе в разведении 15. Результаты исследований и их обсуждение Изучение местнораздражающего действия экстракта посредством его нанесения в конъюнктивальный мешок кролика привело к покраснению и отеку конъюнктивы. Гиперемия слизистой сохранялась в течении 4-х суток после нанесения исследуемого вещества. При изучении аллергизирующего действия экстракта методом накожной сенсибилизации, на второй день после нанесения экстракта наблюдалось выраженное раздражение кожи в виде покраснения кожи и появления множественных папул размером до 3-4 мм, в связи с чем, последующие аппликации экстракта не проводились. Данные изменения прошли на 5-й день проведения эксперимента. При изучении аллергизирующей активности при пероральной сенсибилизации морских свинок, на 10,15 и 30 день от начала введения испытуемого препарата, после введения разрешающей дозы экстракта цистанхе никаких патологических местных реакций, изменений общего состояния животных отмечено не было. Таким образом,согласно полученным данным, исследуемый экстракт не обладает аллергизирующими свойствами. Полученные данные свидетельствуют о наличии местнораздражающего действия экстракта цистанхе. Необходимо более углубленно изучить возможность перорального приема экстракта, либо разработать другую лекарственную форму для наружного применения на основе исследуемой субстанции. Выводы Полученные данные позволяют сделать выводы об отсутствии аллергизирующего действия исследуемого экстракта, а также о наличии местнораздражающего действия экстракта. В связи с этим,требуется проведение дальнейших исследований для разработки эффективных противовоспалительных лекарственных средств на основе экстракта цистанхе. ФОРМУЛА ПОЛЕЗНОЙ МОДЕЛИ Применение цистанхе солончаковой в виде жидкого спиртового экстракта в качестве противовоспалительного,антиоксидантного и анальгезирующего средства.