Способ лечения эктопаразитарных болезней рыб.

(51) 61 33/00 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ рыб разного вида, возраста и клинического состояния в ванне с озерной водой, объемом 80 л, с принудительной аэрацией,осуществляют с разведенным в 100 мл 0,9 раствора хлористого натрия препаратом Ронколейкин, однократно, в дозе 500 000 в расчете на 1 г живой массы, с дальнейшим содержанием в садке на озере до конца опыта. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в применении в качестве эффективного лечебного средства иммуностимулирующего препарата Ронколейкин,который определяет иммунную коррекцию организма больных рыб,действует как антипаразитарный препарат, убивает паразитов и стимулирует ускоренное заживление кожных ран и способствует повышению иммунного статуса и жизнестойкости их организма.(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт рыбного хозяйства(54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭКТОПАРАЗИТАРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ РЫБ(57) Изобретение относится к ихтиопатологии и может быть использовано с целью лечебно профилактических и оздоровительных мероприятий в естественных водоемах и рыбоводных хозяйствах,занимающихся выращиванием рыб для товарного рыбоводства Способ лечения эктопаразитарных болезней рыб,включающий сбор, диагностику и обработку больных различными эктопаразитарными болезнями Изобретение относится к ихтиопатологии и может быть использовано с целью осуществления лечебно - профилактических и оздоровительных мероприятий в естественных водоемах и рыбоводных хозяйствах,занимающихся выращиванием рыб для товарного рыбоводства. Проведение лечебно - профилактических мероприятий в промысловых водоемах (озера, реки,водохранилище) сложнее, чем в водоемах искусственных. Промысловые водоемы,как правило, имеют большую площадь. В них исключены такие мероприятия, как дезинфекция ложа спущенного водоема, внесение по воде различных препаратов,использование медикаментозных средств с кормом, в виде инъекции. Однако поиски методов и средств лечебных мер в промысловых водоемах, особенно учеными дальнего зарубежья,не теряют актуальности. (Хирво Итиро, Уэно Родзо. Препараты для профилактики и лечения заболеваний рыб, ракообразных и моллюсков 23258 - 71, акцептованная заявка, опубликовано 02.07.1971 // Институт прикладных исследований при фирме Уэно Сэйяку, Япония, ЗОСО, 882, 883,16 Е 391, 1971), ( ,,. Способ и средство борьбы с животными паразитами промысловых рыб//патентное описание 1068505. заявлено 05.11.1959, опубликовано 21.04.1960, МКИ А 01), поскольку в них нередко возникают различные заболевания рыб(дерматофибросаркома и другие). Особенно много населяют водоемы различные паразиты рыб,являющиеся дефинитивными, промежуточными или дополнительными их хозяевами. В водоемах часто могут возникать эктопаразитарные болезни, поражающие кожу и жаберный аппарат рыб(дактилегирезы,ихтиофтириозы, триходинозы и многие другие),имеющие энзоотическое течение. Лечебные работы с целью профилактики заболеваемости рыб паразитозами и оздоровление водного бассейна от паразитов и патогенной микрофлорыстановятся актуальными для постоянного сохранения нормальной эпизоотической ситуации в них. (А.В. Синев. Опыт применения растворов анилиновых красителей при ихтиофтириозе карпов. Болезни рыб и меры борьбы с ними. Алма-Ата, 1966, с. 120),(Г.И. Сапожников и другие. Способ лечения прудовых рыб при эктопаразитарных заболеваниях. А.с. 938428 А. 30.07.1979 г.), (О.Н. Давыдов. Способ профилактики и лечения заболеваний рыб. А.с.,1655415 А, 15.06.1991. Бюллетень 22). Известный перечень допущенных к использованию в аквакультуре лечебнопрофилактических средств ограничен (Головин П.П., Головина Н.А., Романова Н.Н. Кадастр лечебных препаратов,используемых и апробированных в аквакультуре России и за рубежом.- М ФГНУ Росинформагротех, 2005..56). Известны давние широко распространенные методы, именуемые как антипаразитарные ванны,включающие очищение путем пропуска через ванны с раствором поваренной соли различной концентрации (Бауер О.Н. Ихтиофтириус в прудовых хозяйствах меры борьбы с ними // Известия ВНИОРХ, т. ХХУ 1. М., 1955), раствора медного купороса (Догель В.А., В.П. Столяров В.П. Освобождение карповых рыб от наружных паразитов при помощи медного купороса // За рыбную индустрию Севера, 1934,2), аммиачной ванны (Пасовский А.И. Аммиак как средство борьбы с дактилогирезом карпа//Труды УкрНИИРХ,т.9. К., 1953). Эти способы, применяемые настоящее время, имеют различные, еще должным образом не отработанные и противоречивые модификации. Известен препарат Анавидин в промышленности, сельском хозяйстве и медицине как эффективный антисептик и дезинфектант,изученный впервые с точки зрения перспективы его использования в качестве лечебнопрофилактического средства, направленного на борьбу с эктопаразитарной болезнью рыб оодиниозом. Механизм действия Анавидина основан на физико-химической адсорбции вещества на поверхности клеток, его диффузии,нарушении- К обмена и транспортных процессов через мембраны клеток, разрушении биологических мембран и в итоге - самих клеток. Проведенные опыты, в двух повторностях при концентрациях препарата в водных растворах 1, 1,5 и 2 мг/л показали, что пораженные оодиниозом с интенсивностью до 40 трофонтов на особь,достигают излечения при бассейновом выдерживании рыбы в течение 30 суток при еженедельным внесением в воду Анавидина в концентрации 1,5 мг/л, либо 20 суток при 2 мг/л.(Шаляпин Г.П. Изучение возможности применения препарата Анавидин для лечения и профилактики оодиноза//Современные проблемы науки и образования, 2009,6 с. 25-28). При информационно-патентных поисках сведения об использовании Анавидина в рыбоводстве, несмотря на его выявленные положительные свойства,недостаточные. Применение препарата показывает, что основной оздоровительный эффект достигается при воздействии препарата на динофлагеллят в свободной стадии гимноспоры, а действие препарата на свободных томонтов и томитов определено как менее значительное, экспозиция при 1 мг/л оказалась менее продуктивным, время обработки препаратом больных рыб длительное и занимает не менее 30 суток. Наиболее близкий по технической сущности к предлагаемому является способ борьбы с инвазионными заболеваниями рыб, включающий обеспечение уничтожения личинок и взрослых особей паразита Дактилогирус вастатор). В качестве антипаразитарного препарата используют водный раствор аммиаката меди. Способ заключается в следующем. Готовят рабочий раствор тетраминкупри сульфата меди и концентрированного раствора аммиака, взятых в соотношении 13. В таком сочетании при растворении 333 г сульфата меди в одном литре 25-27-ного раствора аммиака образуется около 300 г тетрамин-купри сульфата. Затем определяют качество прудовой воды. Для этого в 0,5 л испытуемой воды растворяют 0,5 г сульфата меди. При этом образуется хлопья, вода мутнеет. При прибавлении каплями концентрированного раствора аммиака хлопья исчезают, раствор становится прозрачным. Если на просветление раствора и исчезновение хлопьев расходуется 40-60 капель раствора аммиака, то следует пользоваться тетрамин-купри сульфатом с концентрацией 0,1 мг/л, а если 100 - 140 капель - 0,2 мг/л. Дезинвазию выростного пруда от дактилогирусов вастатора проводят перед зарыблением и в случае появления эпизоотии дактилогиреза. В первом случае при внесении тетрамин-купри сульфата в залитый выростной пруд происходит уничтожение личинок дактилогируса вастатора до внесение в него карпов-мальков,причем вносят это химическое вещество квадратной обработкой на пятый день после заливания пруда при температуре воды 20 С. Спустя 48 час после обработки пруда приступают к его зарыблению. Во втором случае (дезинвазия при проявлении эпизоотии) дактилогирус вастатор уничтожают как на стадии свободного плавания, так и в период его паразитирования. Вносят препарат с концентрацией 0,1 - 0,2 мг/л двукратно с интервалом в 48 час до кормления мальков искусственными кормами. На вторые и третьи сутки после второго внесения численность дактилогирусов на карпах сокращается на 80 - 90. .Для полного освобождения рыб от паразитов и дезинвазии пруда обрабатывают пруд в третий раз. Во время обработки пруда проточность в нем приостанавливают. Сразу после обработки пруда эпизоотия затухает, клиника болезни исчезает, мальки карпа становятся активными,начинают поедать искусственный корм, темп роста ускоряется. К концу вегетативного периода вес и упитанность рыб выше, чем у переболевших. (Б.С. Авдосьев и Н.А. Возный. Способ борьбы с инвазионными заболеваниями рыб. А.с. СССР 244792, 28.05.1969). Недостатком известного способа борьбы с инвазионными заболеваниями рыб является трудоемкость приготовления и применения препарата. Для внесения препарата необходимо значительное время и особые способы подготовки пруда, Для полного освобождения рыб от паразитов и дезинвазии пруда требуется трех кратная обработка пруда. Дактилогирус поражает жаберный аппарат рыб и при применении медного купороса во время обработки рыбы сильно выделяют слизь и на них легко оседают хлопья углекислой меди,затрудняющие процесс дыхания и гибель рыб. Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа лечения рыб с различными эктопаразитарными болезнями с применением иммуностимулирующего и иммунокоррегирующего препарата Ронколейкин. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в применении в качестве эффективного лечебного средства иммуностимулирующего препарата Ронколейкин, который определяет иммунную коррекцию организма больных рыб, действует как антипаразитарный препарат,убивает паразитов,стимулирует ускоренное заживление кожных ран, способствует повышению иммунного статуса и жизнестойкости их организма. В настоящее время в медицине и ветеринарии терапия рекомбинантными цитокинами является одним из наиболее перспективных и постоянно расширяющихся направлений иммунофармакологии. Ронколейкин - новый препарат группы цитокинов, обладающий широким спектром биологической активности и целенаправленным воздействием на ослабленные звенья иммунной цепи организма. В экспериментальных работах также доказана эффективность лечения ронколейкином диких,домашних,сельскохозяйственных, экзотических животных и птиц,страдающих онкологическими,бактериальными и вирусными заболеваниями. В последние годы ронколейкин. как иммуномоделирующий и иммуностимулирующий препарат, а также и антистрессант, стал успешно применяться и в аквакультуре для лечения и профилактики различной патологии и болезней карповых, лососевых и осетровых рыб. Ронколейкин представляет собой прозрачную бесцветную или светло-желтого цвета жидкость. Для промышленного рыбоводства используется препарат расфасованный во флаконы объемом 10 мл, упакованные по одному. Во флаконе объемом 10 мг содержится ронколейкина 2 мг - 2 000 000 , 5 мг - 5 000 000 и 10 мг - 10 000 000 . Препарат применяют и в виде расфасованный в ампулы. В ампуле содержится рекомбинантного интерлейкина -2 0,05 мг (50 000 ), 0,1 мг (100 000 ), 0,25 мг (250 000 ) и 0,5 мг (500 000). В одной упаковке по три ампулы. Ампулы имеют маркерную полосу синего цвета и кольцо излома. Ронколейкин рекомендуется хранить при температуре от 2 до 10 С. При соблюдении условий хранения препарат годен в течение двух лет с момента изготовления,допускается транспортировка при комнатной температуре в течение двух недель. Ронколейкин (во флаконах) можно использовать в течении 10-14 дней, набирая его в необходимом объеме стерильным шприцом через прокол в резиновой пробке. Приготовленный раствор (разведенный препарат) не теряет своей активности при температуре от 4 до 10 С в течение 72 часов Карповым ронколейкин рекомендуется вводить внутрь опрыскиванием корма в дозе 2 500 МЕ/кг массы рыбы трехкратно с интервалом 48 часов. Технический результат достигается тем, что способ лечения, включающий сбор, диагностику и обработку больных с различными эктопаразитарными болезнями рыб разного вида,возраста и клинического состояния осуществляют в ванне с озерной водой, объемом 80 л, с принудительной аэрацией, разведенным в 100 мл 0,9 раствора хлористого натрия препаратом Ронколейкин, однократно, в дозе 500 000 в расчете на 1 г живой массы, с дальнейшим содержанием в садке на озере до конца опыта. Изобретение осуществляется следующим образом. Собранное, неоднократно в озере Балхаш, с помощью невода (рыболовного судна) Мотоботы(Фиг. 1), большое количество различных видов больных и ослабленных рыб лещ, судак, вобла,берш, сазан и жерех подвергли клиническому осмотру и диагностическим паразитологическим исследованиям в специально организованной в полевых условиях лаборатории, с нужными материалами,инструментами,химическими средствами и микроскопами МБС 10 и МС 20. При клиническом осмотре рыбы были вялые,малоподвижные,несколько угнетенные,с учащенным дыханием. Глаза их несколько запавшие, жабры многих рыб темно-серые, с большим количеством слизи. У отдельных рыб жабры анемичные, серые. Кожа, с большим количеством слизи,в отдельных местах покрасневшая от незначительной до интенсивной степени. У отдельных рыб, особенно часто у лещей и судаков, наряду с сильными покраснениями на коже,просматривались небольшие ранения,экзематозные и язвенные участки. У некоторых рыб на коже отмечаются темноватые, пигментированные участки. На различных местах кожного покрова также имеет место отдельные пятна различной интенсивности в виде голубовато- серого налета. У рыб скальпелем собраны соскобы слизи кожи,жаберных лепестков,дермальных бугорков,чешуйных кармашков и плавников. Собранные соскобы слизи нанесены на предметные стекла, куда были добавлены несколько капель прокипяченной и остуженной воды, покрыты покровным стеклом и были исследованы под микроскопом. Изучением под микроскопом соскобов с различных участков кожи и жабр исследуемых рыб были выявлены 6 видов паразитов, ,,и. На основании клинических признаков и результатов микроскопических исследовании у исследованных рыб установлены эктопаразитарные болезни ихтиофтириоз,дактилогирез,эргазилез,гиродактилез,анцироцефалез и триходиноз различной степени. Лечебное действие ронколейкина испытали, в сравнительном аспекте с другими традиционными способами лечения вышеуказанных больных рыб, на берегу озера с использованием ванн емкостью 80 л ,60 л и 10 л. Для содержания рыб в период лечебных мер использован специально изготовленный нами садок из металлической сетки с размерами ячеек 1,0 х 1,0 см, из четырех частей для размещения рыб по видам рыб и характеру болезней. Садок был установлен в озере на расстоянии 10 м от берега(Фиг. 2). Всех подопытных рыб, после лечебных мероприятий, содержали в озере в устроенном садке до конца опытов. Результаты лечебных мероприятий отражены в таблице 1. Пример 1. Двух групп больных рыб с признаками ихтиофтириоза, дактилогиреза и триходиноза, по 5 экз. в каждой группе от каждого вида, поочередно обрабатывали в течение 5 минут 5 раствором хлористого натрия в ванне с водой объемом 60 л. По результатам опытов в обеих группах выздоровели с полным освобождением от паразитов и восстановлением пораженных участков кожи 27 рыб из 60, что составляет 45, погибли 23 рыбы - 38(Фиг. 3) и у 10 рыб сохранялись симптомы болезни,которые затем погибли в садке в течение 5-7 дней. Пример 2. Две группы рыб по 4 экземпляра в каждой группе от каждого вида больных с признаками дактилогиреза,гиродактилеза и эргазилеза поместили в ванну с водой объемом 40 л, куда добавили формалин в разведении 15000 с продолжительностью обработки минут. При этом из 48 рыб обоих опытных рыб полностью выздоровели 28 рыб - 58, 11 рыб погибли - 23 и 4 рыбы погибли - 8 в последующие дни, и 5 рыб - 11 постепенно выздоровели,и сохранили жизнедеятельность. Пример 3. Две группы из 3 экз. от каждого вида в каждой группе с признаками дактилогиреза, гиродактилеза,эргазилеза и анцероцефалеза,поочередно,обрабатывали 0,2 раствором аммиака, используя ванну с водой объемом 10 л. Срок лечебной экспозиции раствором аммиака в каждой группе был по 1 минуте. В данной группе сохранили жизнедеятельность 22 рыбы из 36 - 61, погибли в первый день опыта 8 рыб - 23, пали постепенно на 2-4 сутки и 6 рыб -16, выздоравливали к 7 - 10 дню и оставались здоровыми. Пример 4. В двух группах рыб, в каждой группе по 5 экз. от каждого вида, с признаками дактилогиреза,гиродактилеза,эргазилеза,анцироцефалеза. ихтирофтириоза и триходиноза было испытано лечебное действие препарата Ронколейкин. Препарат предварительно разводили в 100 мл 0,9 растворе хлористого натрия. Дозу ронколейкина 500 000 в расчете на 1 г живой массы рыб залили и перемешали в ванне с водой объемом 80 л с принудительной аэрацией. Продолжительность обработки рыб в данном растворе была 1 час. В данных группах, в ходе опытов, из 60 рыб полностью выздоровели 47 рыб - 78, постепенно выздоровели на 2 - 3 сутки еще 8 рыб - 13 (Фиг. 4) и только 5 рыб - менее 9 пали постепенно в течение 5 дней. В результате опытов установлено, что соли хлористого натрия и раствор формалина, не оказали сильного терапевтического эффекта,плохо переносятся организмом рыб, которые не выдерживают такие лечебные концентрации этих растворов и продолжительности опытов. Несколько более высокий эффект давала обработка рыб раствором аммиака, однако и такая низкая концентрация - 0,2 аммиака в течение 1 минуты,видимо, тяжело переносится организмом рыбы. аммиака - 77, формалина - 69. и соли хлористого натрия - 45. Таким образом, ронколейкин обладает более широким спектром действий, чем аммиак и является также совершенно безвредным для организма, Это особенно важно в условиях тяжелой или хронической патологии,когда применение традиционных препаратов бесполезно из-за истощения компенсаторных возможностей иммунной системы. Ронколейкин в организме усиливает пролиферацию Т-лимфоцитов,обеспечивающих адекватную и целенаправленную медикаментозную коррекцию иммунных дисфункций,повышает эффективность иммунотерапии и лечения в целом. Вводимый в организм препарат восполняет дефицит эндогенных регуляторных молекул и полностью воспроизводят их эффекты. Таблица Результаты лечения антипаразитарными средствами больных с эктопаразитарными болезнями рыб различных видов. Хорошие результаты дали лечение ронколейкином. Обработка больных рыб ронколейкином дала возможность за короткий срок спаданию красноты кожи и мелких кровоизлияний,бесследному исчезновению голубовато-серого налета - воспалительный процесс с обильным слизеобразованием с содержанием паразитов,способствовала затягиванию кожных дефектов и их эпителизации и сохранению жизнедеятельности больных рыб. Обладая хорошим иммуностимулирующим эффектом, препарат Ронколейкин показал себя при этих опытах как антипаразитарное и регенераторное средство. Эффективность применения ронколейкина составила 91, что далеко превышает показатели других средств,эффективность которых составила соответственно Подопытные Хлористый натрий рыбы Кол- Выздоро Пали во вели 1 Сазан 10 3 7 2 Жерех 10 5 5 3 Судак 10 3 7 4 Лещ 10 3 7 5 Вобла 10 5 5 6 Берш 10 8 2 Всего Формалин Аммиак Ронколейкин Кол- Выздор Пали Кол Выздор Пали Кол Выздор Пал во овели во овели во овели и 8 5 3 6 5 1 10 7 3 8 5 3 6 4 2 10 9 1 8 3 5 6 1 5 10 6 4 8 3 5 6 2 4 10 6 4 8 6 2 6 4 2 10 9 1 8 6 2 6 6 10 10 48 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ лечения эктопаразитарных болезней рыб,включающий сбор, диагностику и обработку больных различными эктопаразитарными болезнями рыб разного вида, возраста и клинического состояния, отличающийся тем, что лечение осуществляют в ванне с озерной водой, объемом 80 л, с принудительной аэрацией, разведенной в 100 мл 0,9 раствора хлористого натрия препаратом Ронколейкин, однократно, в дозе 500 000 МЕ в расчете на 1 г живой массы.