Способ определения резистентности организма к изониазиду

(51) 01 33/48 (2009.01) 61 31/06 (2009.01) 61 31/4409 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ формуле определяют коэффициент резистентности(КР) организма к изониазиду КР ДК/СОД ДК Д 1/Д 2 СОДСОД 1/СОД 2 где 1 - показатель после инициации изониазидом 2 - фоновый показатель и при значении КР 1,1 усл. единиц определяют резистентность организма к изониазиду, при значении КР 1,2-1,5 усл. Единиц - чувствительность к изониазиду, и при значении КР 1,5 усл. единиц определяют сверхчувствительность к изониазиду и прогнозируют риск развития токсического гепатита. Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить резистентность организма к изониазиду,дает возможность прогнозировать возникновение побочного действия противотуберкулезной терапии изониазидом, а при наличии жизненных показаний для данной терапии, принять профилактические меры.(76) Бисимбаева Сауле Бабатовна Адильбекова Дарига Айдановна Орманова Лаззат Намазбаевна Жолымбекова Ляйля Даулетбековна(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА К ИЗОНИАЗИДУ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, клинической фармакологии и может быть использовано определения резистентности организма к изониазиду. Способ определения резистентности организма к изониазиду включает исследование эритроцитов крови больного до начала терапии, в эритроцитах определяют концентрацию диеновыех конъюгатов(ДК) и активность супероксиддисмутазы (СОД) до и после 30 минутной инкубации при 37 С с добавлением изониазида в дозе 510-2 мг, по 23890 Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, клинической фармакологии и может быть использовано определения резистентности организма к изониазиду. В связи с резким увеличением заболеваемости туберкулезом, и возрастанием доли тяжлых форм заболевания весьма актуальной является проблема токсичности известных туберкулостатистических препаратов, в частности изониазида. Существенным негативным моментом химиотерапии туберкулеза,является токсическое поражение печени с развитием лекарственного гепатита, требующее отмены специфической химиотерапии. Побочное действие данного противотуберкулезного препарата в основном зависит от типов его ацетилирования. По экспериментальным данным встречается три типа ацетилирования изониазида сильный, средний и слабый. Изучение изменения окислительного метаболизма липидов в условиях полихимиотерапии позволило прогнозировать возникновение побочного действия лекарственной терапии - развития токсического гепатита у больных туберкулезом. При изучении литературных данных аналогов заявляемому способу авторами не обнаружено. Задачей изобретения является разработка способа определения резистентности организма к изониазиду. Технический результат - предлагаемый способ позволяет определить индивидуальную резистентность (восприимчивость) организма к изониазиду и, таким образом, дает возможность прогнозировать возникновение побочного действия противотуберкулезной терапии изониазидом, а при наличии жизненных показаний для данной терапии,принять профилактические меры. Технический результат достигается тем, что при определении резистентности организма к изониазиду, согласно изобретению, до начала терапии осуществляют исследование эритроцитов крови больного,в которых определяют концентрацию диеновых конъюгатов (ДК) и активность супероксиддисмутазы (СОД) до и после 30 минутной инкубации при 37 С с добавлением изониазида в дозе 510-2 мг, по формуле определяют коэффициент резистентности (КР) организма к изониазиду КР ДК/СОД ДК Д 1/Д 2 СОДСОД 1/СОД 2 где 1- показатель после инициации изониазидом 2 - фоновый показатель. При значении КР 1,1 усл. единиц определяют резистентность организма к изониазиду, при значении КР 1,2-1,5 усл. единиц - чувствительность к изониазиду, и при значении КР 1,5 усл. единиц определяют сверхчувствительность к изониазиду и прогнозируют риск развития токсического гепатита. Способ осуществляют следующим образом Предварительно готовят 1 водную суспензию свежего раствора изониазида. Для этого 1,0 г изониазида растворяют в 99 мл дистиллированной воды. Кровь у обследуемого лица берут из пальца, в количестве 0,2 мл, доводят объм до 2,0 мл добавляя физиологический раствор, порцию делят на две части, в одну часть добавляют 0,01 мл 10 - 4 М водной суспензии изониазида, в другую - 0,01 мл физ. раствора, затем обе пробы помещают в термостат на 30 мин при 37 С. Для определения резистентности организма к изониазиду вычисляют коэффициент резистентности по следующей формуле ДК Д 1/Д 2 СОДСОД 1 /СОД 2 где 1- показатель после инициации изониазидом 2 - фоновый показатель. При значении КР 1,1 усл. единиц определяют резистентность организма к изониазиду, при значении КР 1,2-1,5 усл. единиц - чувствительность к изониазиду, и при значении КР 1,5 усл. единиц определяют сверхчувствительность к изониазиду и прогнозируют риск развития токсического гепатита. Эффективность способа подтверждена экспериментальными и клиническими исследованиями. Эксперимент ставился на белых беспородных крысах. Кровь у животных брали из хвостовой вены,исследовали по вышеописанному способу. По величине КР все обследованные экспериментальные животные условно разделены на 3 группы 1 группа - КР 1,000,05 отн. ед. крайние отклонение в пределах 0,83 до 1,1 единиц, названа резистентная 2 группа КР 1,700,06 отн. ед. чувствительная 3 группа КР 2,60,15 отн. ед. сверхчувствительная Результаты определения резистентности организма к изониазиду 100 белых крыс- самцов массой 1802,0 г представлены в таблице 1. Таблица 1 Изменение содержания диеновых конъюгатов и активности супероксиддисмутазы в эритроцитах крови от типов ацетилирования у интактных животных Группы 1 17,60,8 6,70,03 2 24,61,1 550,03 Слабый 1 30,10,36 490,03 ингибитор 2 54,22,4 340,03 Примечание -р 0,05 по сравнению с фоновым показателем Как видно из таблицы, 69 животных относились к резистентной группе, то есть коэффициент резистетнтности у них в среднем составлял 1,100,05 усл, ед., 22 животных относились к чувствительной группе и КР у них в среднем составил - 1,70,06 усл. ед., 9 животных относились к сверхчувствительной группе и КР у них составил в среднем - 2,60,15 усл.ед. При однократном введении водной суспензии изониазида в дозе 100 мг/кг массы в течение 5-7 дней вгруппе погибли все животные, то есть летальность составила 100, вогруппе умерло 8 крыс, то есть летальность составила 36,4, а в первой группе гибель животных не была зафиксирована. Полученные результаты указывают на тот факт,что летальность животных при введении токсической дозы изониазида зависит от индивидуальной резистентности организма к изониазиду. В результате введения изониазида в желудок в двойной средней гепатотоксической дозе(200 мг/кг/массы) биохимические признаки поражения печени были выражены в разной степени, также в зависимости от индивидуальной резистентности организма к изониазиду. Активность АЛТ,и ЛАП в сыворотке крови в резистентной группе при введении изониазида, по сравнению с соответствующей контрольной группой, возрастала на 36,6, 48,4 и 39,8, а в чувствительной группе активность этих энзимов увеличивалась на 112, 92,8 и 81,8. Наибольшое увеличение этих энзимов отмечалось в сверхчувствительной группе, рост составлял 171,86,2 и 109,6. Наибольшее снижение резистентности мембран гепатоцитов установлено в сверхчувствительной группе (таблица 2). Таблица 2 Состояние цитолитических энзимов в крови и резистентность мембраны гепатоцитов в зависимости от чувствительности к изониазиду Группы Примечание - р 0,05 достоверность по сравнению с контрольной группой- р 0,05 достоверность по сравнению с резистентной группой- р 0,05 достоверность по сравнению с чувствительной группой В зависимости от резистентности или гепатотоксической дозы изониазида были по чувствительности к изониазиду изменялись уровень интенсивности различными, менее выраженные ретенции бромсульфалеина, поглотитальная и (скудные) изменения были в резистентной группе,выделительная функция гепатоцитов и при этом на более выраженные изменения поглотительной и фоне изониазида сдвиги происходили в выделительной функции имели место в группе сверхчувствительной группе. животных сверхчувствительных к изониазиду. Таким образом, биохимические показатели поражения гепатоцитов при воздействии двойной 3 23890 Таблица 3 Изменение функции гепатоцитов при воздействии изониазида в зависимости от чувствительности Группы Резистентная(усл.ед) 1 70335 59724 2 44131 30118 Примечание- р 0,05 достоверность по сравнению с контрольной группой- р 0,05 достоверность по сравнению с резистентной группой- р 0,05 достоверность по сравнению с чувствительной группой Способ был апробирован в клинической практике. Пример 1 (группа контрольная - здоровые лица). Рабочий строитель А.Н., 35 лет. Жалоб не предъявляет. При объективном обследовании со стороны внутренних органов патологии не обнаружено. Клинические и биохимические показатели крови и мочи в пределах нормы. Тип ацетилирования - сильный. Диагноз здоров При определении содержания в эритроцитах крови диенового конъюгата и активности СОД получены следующие данные фоновые показатели ДК-0,23 Еоп/мг липидов, активность СОД - 72,8 усл.ед, после инициации изониазидом ДК - 0,24 Еоп/мг. липидов и активность СОД - 74,8 усл.ед ДД 1/Д 2 0,24/0,231,04 СОД СОД 1/ СОД 274,8/72,81,03 КР Д 1/СОД 21,04/1,031,01 Заключение Данный рабочий-строитель А.Н. обладает индивидуальной устойчивостью к изониазиду, так как индекс КР организма составляет 1,01 усл. ед. Вывод Организм данного рабочего резистентен к изониазиду. Пример 2 (группа контрольная - здоровые лица). Рабочий строитель А.Б., 38 лет. Жалоб не предъявляет. При объективном обследовании со стороны внутренних органов патологии не обнаружено.Клинические и биохимические показатели крови и мочи в пределах нормы. Тип ацетилирования - средний. Диагноз здоров При определении содержания в эритроцитах крови диенового конъюгата и активности СОД получены следующие данные фоновые показатели ДК -0,26 Еоп/мг липидов, активность СОД - 66,3 усл.ед, после инициации изониазидом ДК- 0,36 Еоп/мг. липидов и активность СОД - 59,5 усл.ед ДД 1/Д 2 0,36/0,261,38 СОД СОД 1/ СОД 259,5/66,30,897 КР Д 1/СОД 21,38/0,8971,53 Заключение У данного рабочего строителя А.Б. имеется чувствительность к изониазиду, так как индекс КР организма составляет 1,53 усл. ед. Пример 3 (группа контрольная - здоровые лица). Рабочий строитель М.К., 42 лет. Жалоб не предъявляет. При объективном обследовании со стороны внутренних органов патологии не обнаружено. Клинические и биохимические 4 23890 показатели крови и мочи в пределах нормы. Тип ацетилирования - слабый. Диагноз здоров При определении содержания в эритроцитах крови диенового конъюгата и активности СОД составили следующие данные фоновые показатели ДК-0,29 Еоп/мг липидов, активность СОД - 61,3 усл.ед, после инициации изониазидом ДК - 0,61 Еоп/мг. липидов и активность СОД - 44,9 усл.ед ДД 1/Д 2 0,61/0,292,10 СОД СОД 1/ СОД 244,9/61,30,73 КР Д 1/СОД 22,10/0,732,87 Заключение у данного рабочего-строителя М.К. отмечается сверхчувствительность к изониазиду, так как КР составляет 2,87 усл. ед. Группа больных туберкулезом. Пример 4. Больной И.В., 32 лет. Диагноз Инфильтративный туберкулез верхней доли легкого справа в фазе распада и обсеменения, МТ. Впервые выявленный случай. Жалобы на общую слабость, быструю утомляемость, потливость, кашель, недомогание,потерю в весе 5 кг. При объективном обследовании со стороны других внутренних органов патологии не обнаружено. До начала лечения при обследовании по предлагаемому способу содержание в эритроцитах крови диеновых конъюгатов и активности СОД получены следующие данные - фоновые показатели ДК- 0,39 Еоп/ мг липидов, активность СОД -61,8 усл.ед, после инициации изониазидом ДК -0,38 Еоп/мг. липидов и активность СОД - 69,8 усл.ед ДД 1/Д 2 0,38/0,390,974 СОД СОД 1/ СОД 269,8/61,81,12 КР Д 1/СОД 20,974/1,1290,86 Заключение больной И.В.,обладает устойчивостью к изониазиду, так как индекс КР организма составляет 0,86 усл. ед. Вывод Организм больного к изониазиду резистентен. При лечении противтуберкулезными препаратами, в том числе изониазидом, побочные явления не прогнозируются. Получал лечение покатегории- 3/4 в течение 6 месяцев. Конверсия мазка мокроты наступила через два месяца от начала лечения. Клинико-рентгенологическая динамика через 2 месяца -рассасывание и уплотнение очагов,после 3 месячной интенсивной и 2 месячной поддерживающей фазы - закрытие полостей распада. Побочных явлений при лечении не отмечено. Пример 5. Больная Б.Х., 37 лет. Диагноз инфильтративный туберкулез верхних долей обеих легких в фазе распада, МТ, лечение получала покатегории, рецидив через 1 год. Жалобы на общую слабость, быструю утомляемость, потливость, кашель, мокроту,головокружение, боли в грудной клетке и одышку при умеренной физической нагрузке. При определении содержания в эритроцитах крови диеновых конъюгатов и активности СОД по предлагаемому способу до начала лечения получены следующие данные фоновые показатели ДК - 0,39 Еоп/мг липидов, активность СОД - 49,6 усл.ед,после инициации изониазидом ДК-0,54 Еоп/мг. липидов и активность СОД - 63,6 усл.ед ДД 1/Д 2 0,54/0,391,384 СОД СОД 1/ СОД 243,6/49,60,879 КРД 1 /СОД 2 1,384/0,8791,57 Вывод Больная к изониазиду чувствительна,при назначении противотуберкулезных препаратов возможно возникновение побочных явлений со стороны гепатобиллиарной системы. Лечение Назначено лечение по 2 категерии 32/5 в течение 9 месяцев. Конверсия мазка мокроты произошла через 2 мес. от начала лечения, и через месяц набрала 5 кг веса. На рентгенограмме через месяц - свежих очагов нет, полости распада уменьшились в размерах. Через 3 месяца от начала лечения в биохимическом анализе крови отмечено незначительное повышение АЛТ и, тимоловой пробы и билирубина, что потребовало назначения гепатопротектоной терапии. Через 8 месяцев - наблюдалось закрытие полостей распада. Выписана через 9 месяцев в удовлетворительном состоянии. Пример 6. Больной С.Г, 44 лет. Диагноз инфильтративный туберкулез верхних долей обеих легких в фазе распада, МТ, лечение получал покатегории, рецидив через 1 год. Жалобы на общую слабость, быструю утомляемость, кашель, мокроту, головокружение,боли в грудной клетке, одышку при умеренной физической нагрузке. При определении содержания в эритроцитах крови диеновых конъюгатов и активности СОД до лечения получены следующие данные фоновые показатели ДК- 0,59 Еоп/мг липидов, активность СОД - 40,9 усл.ед, после инициации изониазидом ДК - 1,25 Еоп/мг. лшшдов и активность СОД - 30,9 усл.ед ДД 1/Д 2 1,25/0,592,12 СОД СОД 1/ СОД 230,9/40,90,755 КР Д 1/СОД 22,12/0,755280 Заключение Данный больной С.Г. обладает сверхчувствительностью к изониазиду, так как индекс КР организма составляет 2,80 усл. ед., что позволяет прогнозировать развитие среднетяжелой или тяжелой формы токсического гепатита. Назначено лечение по 2 категерии 32/5. При фармакотерапии противотуберкулезными препаратами на 2 месяце возникла головная боль,головокружение, ухудшение сна, тошнота и рвота. На 3-м месяце активность АЛТ,и ЛАП превышала показатели здоровых лиц на 80, 46 и 67, что потребовало временной отмены препарата и проведения интенсивной гепатопротекторной терапии. Конверсия мазка мокроты произошла через 6 мес. от начала лечения. На рентгенограмме полости распада уменьшились в размерах. 23890 Через 9 месяцев - наблюдалось закрытие полостей распада. Выписан в удовлетворительном состоянии. Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить резистентность организма к изониазиду,дает возможность прогнозировать возникновение побочного действия противотуберкулезной терапии изониазидом, а при наличии жизненных показаний для данной терапии, принять профилактические меры. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения резистентности организма к изониазиду, отличающийся тем, что до начала терапии осуществляют исследование эритроцитов крови больного,в которых определяют концентрацию диеновыех конъюгатов - ДК и активность супероксиддисмутазы - СОД до и после 30 минутной инкубации при 37 С с добавлением изониазида в дозе 510-2 мг, по формуле определяют коэффициент резистентности - КР организма к изониазиду КР ДК/СОД ДК Д 1/Д 2 СОДСОД 1/СОД 2 где 1- показатель после инициации изониазидом 2 - фоновый показатель и при значении КР 1,1 усл. единиц определяют резистентность организма к изониазиду, при значении КР 1,2-1,5 усл. единиц -чувствительность к изониазиду, и при значении КР 1,5 усл. единиц определяют сверхчувствительность к изониазиду и прогнозируют риск развития токсического гепатита.