Штамм Morbillivirus Canie Disteper “Phoca/Caspian/2007″ для приготовления диогностических и профилактических препаратов против чумы и тюленей

(51) 12 7/00 (2010.01) 61 39/155 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ ЧУМЫ У ТЮЛЕНЕЙ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой новый эпизоотический штамм//2007, выделенный от Каспийских тюленей и пригодный для изготовления препаратов для диагностики и специфической профилактики чумы у тюленей. Штамм вируса чумы плотоядных//2007 выделен из органов павших тюленей весной 2007 года, во время эпизоотии на Казахстанском побережье Каспийского моря. Характеризуется высокой репродуктивной способностью в культуре клеток , с проявлением специфического цитопатогенного эффекта, биологической активностью 5,0 ТЦД 50/см 3, отсутствием контаминации бактериями,грибами, микоплазмами и посторонними вирусами. Генетически отличается от других штаммов вируса чумы плотоядных.(72) Орынбаев Мухит Бармакулы Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Мамбеталиев Муратбай Кошеметов Жумагали Каукарбаевич Нурабаев Сергазы Шуратбаевич Белоусов Вячеслав Юрьевич Керимбаев Аслан Амангельдиевич Булатов Ербол Акенович Копоченя Алексей Анатольевич(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научно исследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) ШТАММА/А/2007 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И 23495 Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для приготовления диагностических и профилактических препаратов. В последние годы участились случаи эпизоотических вспышек морбилливирусной инфекции в популяции различных водных млекопитающих во всех регионах их обитания. Ранее считалось, что морбилливирусы инфицируют строго ограниченный круг млекопитающих(видоспецифичны), в который представители ластоногих не входили. Ретроспективный анализ данных заболеваемости водных млекопитающих показал,что с 1987 года эпизоотии морбилливирусной инфекции отмечены в популяциях тюленей на Байкале, Северном и Балтийском морях, в популяции дельфинов в Средиземном, Адриатическом, Ионическом и Тиренейском морях, на Атлантическом побережье США. Особую озабоченность вызывает массовая гибель каспийской нерпы, которая является обособленной популяцией среди тюленей и относится к исчезающим видам. Впервые массовую гибель каспийской нерпы отмечали в 1997 г. на Азербайжанском и Туркменском побережье. В это время только на Апшероне было отмечено более 6000 трупов животных. Комплексных исследований по выяснению причин гибели животных не проводили, а только выдвигались предположения о возможной причине - чума плотоядных. В результате в 2000 г. на побережье Каспийского моря была отмечена новая волна массовой гибели нерпы. По данным разных источников пало более 20000 особей. Первой гипотезой о причинах гибели было отравление. Однако в дальнейшем учеными России и Казахстана было доказано, что гибель вызвана морбилливирусом сходным с вирусом чумы плотоядных. Весной 2007 г. на Казахстанском побережье Каспийского моря была отмечена новая волна эпизоотии, вызванная морбилливирусом. В результате эпизоотии пало более 1000 особей популяции каспийской нерпы. В связи с необходимостью более детального изучения биологии вируса и выяснения причин возникновения заболевания необходимо было выделить возбудитель,циркулирующий в популяции каспийских тюленей. Для этого в апреле 2007 г. в НИИПББ были доставлены пробы органов павших тюленей. Известны вакцинные штаммы ВНИИВВиМ - 88 Деп, Рокборн и 668-КФ, а также модифицированные авирулентные варианты штаммов и другие, адаптированные к выращиванию в первичных и перевиваемых культурах клеток животного и птичьего происхождения и которое используются при получении диагностических и профилактических препаратов против чумы плотоядных (патенты РФ 2108385 кл. 12 7/00, А 61 К 39/175, 1998 ФРГ 1138888, кл. 306, 1962 патент США, кл. 424-89,2965544, 1960 3155589, 1964 3836626, 1974 4351827, 1982 5000951, 1990 а.с. СССР, кл. С 12 7/08, 527072, 1977 кл. А 61 К 39/12,1287592, 1984 патент СРР, кл. А 61 К 39/175 82518, 1983). Данные штаммы являются вакцинными и применяются для изготовления диагностических и профилактических препаратов для защиты пушных зверей и собак, против чумы плотоядных. Штамм//2007 является эпизоотическим, выделен от Каспийских тюленей, имеет характерные генетические свойства,отличающие его от других штаммов вируса чумы плотоядных,пригоден для изготовления диагностических и профилактических препаратов против чумы плотоядных у морских млекопитающих. Проведенный нами филогенетический анализ фрагмента Р-гена штамма //2007 морбилливируса тюленей показал, что выделенный штамм значительно отличается от вирусов чумы КРС, чумы мелких жвачных животных, вируса кори и морбилливируса дельфинов и близок вирусу чумы плотоядных (таблица 1, фиг. 1). Сравнение фрагмента Р-гена штамма //2007 морбилливирса тюленей с морбилливирусом тюленей, выделенным на Байкале, и различными штаммами вируса чумы плотоядных показало 95 ную его идентичность Байкальскому штамму, а также 98, 99 и 100-ную идентичность штаммам , ,вируса чумы плотоядных (таблица 2, фиг.2). Таблица 1 Филогенетический анализ фрагмента Р-гена штаммы и изоляты морбилливирусов 100 73 62100 66100 Примечание//2007 - морбилливирус тюленей- вирус чумы плотоядных- морбилливирус дельфинов- вирус кори- вирус чумы КРС- вирус чумы мелких жвачных животных. 2 23495 Таблица 2 Филогенетический анализ фрагмента Р-гена морбилливирусов 100 Примечание- морбилливирус, выделенный от павших тюленей на Байкале//2007 - морбилливирус тюленей, выделенный на Каспии , ,штаммы вируса чумы плотоядных Изобретение направлено на решение задачи выделения эпизоотического штамма морбилливируса тюленей,обладающего патогенностью для тюленей. Штамм //2007 морбилливируса тюленей выделен из органов павших тюленей во время эпизоотии морбилливирусной инфекции в апреле-мае 2007 года на Казахстанском побережье Каспийского моря путем последовательного пассажа в культуре клеток . Штамм//2007 депонирован в коллекции микроорганизмов ДГП Научно-исследовательский институт проблем биологической безопасности НЦБ МОН РК, регистрационный номер М-1-08/Д. Штамм //2007 морбилливируса тюленей характеризуется следующими признаками. Кулътуральные признаки Штамм //2007 морбилливируса тюленей культивируется стационарным способом при температуре (370,5)С в монослое культуры клетокпри заражающей дозе 0,01-0,1 ТЦД 50 на клетку. Цитопатогенное действие характеризуется образованием многоядерных синтициев с последующим отторжением от стекла. Сбор вирусного материала проводится на 5-7 сутки культивирования вируса при поражении 85-90 площади монослоя клеток. При соблюдении данных условий культивирования активность вируса составляет 5,0 ТЦД 50/см 3. Антигенные свойства При исследовании антигенов, приготовленных на основе штамма//2007 морбилливируса тюленей, их титр составил в РДП 116 и ИФА- 11028. Выделенный штамм морбилливируса тюленей предлагается использовать для изучения биологии//2007 выделен из органов павших тюленей, во время эпизоотии инфекции среди тюленей на Казахстанском побережье Каспийского моря весной 2007 г, путем последовательного пассирования вируса в перевиваемой культуре клеток . Штамм//2007 культивируется в монослое культуры клетокпри заражающей дозе 0,01-0,1 ТЦД 50 на клетку. Цитопатогенное действие характеризуется образованием многоядерных синтициев с последующим отторжением от стекла. Вирус культивируется стационарным способом при температуре (370,5)С. Сбор вирусного материала проводится на 5-7 сутки культивирования вируса при поражении 85-90 площади монослоя клеток. При соблюдении данных условий культивирования активность вируса составляет 5,0 ТЦД 50/см 3. При исследовании антигенов, приготовленных на основе штамма//2007, их титр составляет в РДП 116 и ИФА - 11028. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм М с//2007, депонированный в Коллекции микроорганизмов ДГП НИИПББ НЦБ РК КН МОН РК, регистрационный номер М-1-08/Д, для приготовления диагностических и профилактических препаратов против чумы у тюленей.