Способ получения биопрепарата против вредителей сельскохозяйственных культур

МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Задачей заявляемого изобретения является получение высокоэффективного биопрепарата против личинок колорадского жука и сохраняющего свою активность при длительном хранении. Это достигается тем, что в посевной материал,состоящий из жидкой модифицированной среды Сабуро, состоящий пептона 10 г, глюкозы 10 г,мальтозы 10 г, дрожжевого экстракта 5 г, вода - 1 л с 5,6 - 5,8, а для подавления роста бактерий и грибовв среду вносят 0,04 молочной кислоты,затем в предварительно простерилизованные колбы объемом 500 мл при режиме автоклавирования 2 атм. 60 мин заливают по 100 мл жидкой среды и вносят мицелий энтомопатогенного гриба рода , с последующим встряхиванием при 160 об/мин,температуре 24-26 С в течение 5-7 суток. Технический результат достигается тем, что в качестве средства для получения биологического препарата используют штамм гриба родаВС 9-06.(72) Сагитов Абай ОразулыДуйсембеков Бахытжан АлишеровичУспанов Алибек МаратовичЛеднев Георгий РэмовичМакаров Евгений МихайловичБаймагамбетов Едилбай ЖакеновичСмагулова Шолпан Берекболовна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА ПРОТИВ ВРЕДИТЕЛЕЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР(57) Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности,к получению биопрепарата на основе штамма энтомопатогенного гриба рода , против личинок колорадского жука. Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности, к получению биопрепарата на основе штамма энтомопатогенного гриба родапротив личинок колорадского жука. Известен способ получения препарата пиретроида (С.Л. Быховец. Весц. АН БССР, 4, 7477 (1987). Этот препарат оказывает эффективное действие на широкий круг вредителей, у него низкая токсичность на теплокровных, а относительно быстрый распад с образованием малотоксичных веществ обеспечивают широкое применение в народном хозяйстве. Однако многолетнее применение привело к появлению устойчивых популяций колорадского жука и других вредных насекомых к пиретроидам. Известен способ получения биопрепарата из растительных экстрактов. Среди них дерево Ним, произрастающее в Южной Азии, считается наиболее перспективным. Выделенный из экстракта семян азадирахтин, относящийся к классу тетранортритерпеноидов, действует на 27 видов вредителей сельскохозяйственных культур.., .22, 3, 433-449 (1993). Однако это соединение является труднодоступным в наших условиях. Известен способ получения биопрепарата из грибана основе живых спор (А СССР 1396121, кл. А 01 63/00,1983.). Основной недостаток указанного способа низкая активность токсичной фракции и низкий выход. Кроме того, препарат быстро теряет активность при хранении. Известен способ получения биопрепарата на основе штамма бактерийдля защиты сельскохозяйственных культур (Защита картофеля от вредителей и сорняков Справочник/ А.С. Воловик, В.М. Глез, А.М. Замотаев и др. М. Агропромиздат,1989). Данный препарат представляет собой суспензию бактерий с титром 3-5109 в культуральной жидкости без дополнительных компонентов. Недостатком является то, что очень короткий(2 недели) срок хранения. Задачей заявляемого изобретения является получение высокоэффективного биопрепарата против личинок колорадского жука и сохраняющего свою активность при длительном хранении. Технический результат достигается тем, что в качестве средства для получения биологического препарата используют штамм гриба родаВС 9-06. Штамм 9-06 был выделен из трупа имаго жука долгоносика (, ) и депонирован в 16.03.2009 году ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов НЦБ РК КН МОН РК. Паспорт на штамм и свидетельство о депонировании прилагаются. Штамм малотоксичен для теплокровных животных. Штамм растет на питательной среде Чапека 2 хранится на косяках в пробирках при 4-5 С с периодическими пересевами один раз в 12 месяцев. Штамм ВС 9-06 перспективен в качестве средства для производства биопрепарата для защиты картофеля от колорадского жука. На основе этого штамма разработана технология производства нового биопрепарата. Способ осуществляется следующим образом. Для наработки посевного материала используют жидкую модифицированную среду Сабуро следующего состава (г/л) пептон (10 г), глюкоза(10 г), мальтоза (10 г), дрожжевой экстракт (5 г),вода - 1 л ( 5,6 - 5,8), режим автоклавирования 0,8 атм. 30 мин. Для подавления роста бактерий и грибов порядкав среду добавляют 0,04 молочной кислоты. В качестве альтернативного субстрата можно использовать синтетическую питательную среду Чапека, которая имеет следующий состав (г/л) О 3 - 2,0 Н 2 РО 4 - 1,0 О 472 О - 0,5 С - 0,5 472 - 0,01 сахароза - 30,0 агар - 20,0 вода дистиллированная 1,0 л ( 5,6-5,8). Первичный маточный материал нарабатывают в чашках Петри на средах вышеприведенного состава с добавлением агар-агара (16-18 г/л). Срок культивирования, в зависимости от биологических особенностей штамма, 7-14 суток, при температуре 25-27 С. В предварительно простерилизованные колбы объемом 500 мл (режим автоклавирования 2 атм. 60 мин) заливают по 100 мл жидкой среды. Затем в стерильных условиях (ламинар-бокс) из чашек Петри с культурой гриба вырезают микробиологическим буром кусочки среды с мицелием и помещают их в колбы со средой. Колбы ставятся на лабораторную качалку при 160 об/мин,при температуре 24-26 С, в течение 5-7 суток. Для получения большого количества конидиальной массы гриба с последующим доведением ее до полупрепартивной формы (ППФ)выращивают на сыпучих зерновых субстратах, преимущественно на пшенной крупе. Также можно использовать очищенную пшеницу,рис или перловую крупу. Крупу очищают, моют и стерилизуют (2 атм. 1 час) пластиковые контейнеры объемом 6 л с герметично закрывающимися крышками. Состав зернового субстрата из расчета на один контейнер 300 г пшена. При использовании контейнеров другого объема количество субстрата пересчитывается согласно вышеприведенным данным. Пшено предварительно несколько раз промывают в холодной воде, отжимают в марле и стерилизуют в автоклаве в режиме 0,8 атм. 30 мин. По окончании стерилизации пшено слегка подсушивают тщательно перемешивают. Затем смесь раскладывают по контейнерам и снова автоклавируют при том же режиме. Остывший после второго автоклавирования субстрат сильно встряхивают, не допуская его комкования, после чего в ламинар-боксе в каждую емкость вносят по 100 мл наработанной на первом этапе глубинной культуры боверии и помещают в термостат с температурой 25 С. Раз в сутки контейнеры встряхивают, чтобы поддерживать субстрат в рассыпчатом состоянии. В таких условиях через 5-7 дней после посева начинается обильное спороношение гриба. Через 30 дней полученную биомассу гриба сушат в течение четырех недель при комнатной температуре или в сушильном шкафу трое суток при 25-30 С и затем перемалывают с помощью мельницы или оставляют в целом виде для последующего смыва. Затем полученный продукт расфасовывают в стерильные бумажные пакеты,пластиковые или стеклянные контейнеры. Конидии,полученные таким образом,сохраняют жизнеспособность не менее года. Суммарный выход конидий составляет до 1 - 5109 спор/г. Таким образом, была получена препаративная форма (ПФ) на основе штамма ВС 9-06,представляющий собой порошок,легко разбавляемый водой до необходимой рабочей концентрации, удобной для применения серийной опрыскивающей аппаратуры. Были проведены лабораторные и полевые испытания биологической активности наработанной препаративной формы на основе штамма ВС 9-06 против личинок колорадского жука. Также нами были проведены производственные испытаний полупрепартивной формы энтомопатогенного гриба рода штамм ВС 9-06, против личинок колорадского жука. Для этой цели была использована масляная суспензия конидии гриба В. (9-06) при титре рабочей суспензии 1,51012 конидий /га. В качестве эталона использовали бактериальный препарат битоксибациллин (БТБ). Обработку насекомых осуществляли непосредственно на отдельных кустах картофеля. Сорт картофеля Санта, схема посадки картофеля ширина междурядий 70 см, в ряду -30 см проведены междурядные культивации, окучивание,поливы. Механический состав и тип почвы темнокаштановая карбонатная, содержание гумуса -3,5, 7,5-8,1. Погода в период проведения испытаний была сухая и жаркая. Температура воздуха в день закладки опыта составляла 23 С, относительная влажность 65,6. Таблица 1 Биологическая эффективность полупрепаративной формы энтомопатогенного грибаштамм ВС 9 -06 против личинок колорадского жука Вариант ВС 9 -06 БТБ Контроль НСР.05 Результаты учета биологической эффективности против личинок колорадского жука на плантациях картофеля представлены в таблице и на фигуре. Наблюдения показали, что в течение двух недель после обработки эффективность микоинсектицида была достаточно высока Итоговый уровень снижения численности (14-е сутки) составил 95,1,и существенно не отличался от эталона (94)(фиг.1). Однако в динамике данного показателя между вариантами опыта были выявлены существенные различия. Так, если в варианте с БТБ уже на третьи сутки после обработки биологическая эффективность составляла 92, то в случае с В. значения этого показателя не превышали 32,5. При этом следует особо подчеркнуть, что основным действующим началом эталонного препарата является -экзотоксин, обладающий широким спектром действия и способный в определенной степени оказывать негативное влияние на агроэкосистемы. Напротив грибной препарат является малотоксичным и следовательно более экологически безопасным. Визуальный анализ обработанных обоими препаратами растений не выявил сколь либо значимого негативного эффекта и прежде оксичности. В целом результаты проведенных испытаний дают нам основание рекомендовать штамм ВС 9-06 в форме масляной конидиальной суспензии при норме расхода 1,51012 конидии/га в качестве перспективного микоинсектицида для снижения численности личинок колорадского жука. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения биопрепарата против вредителей сельскохозяйственных культур,включающий использование штамма,отличающийся тем, что в посевной материал,3 состоящий из жидкой модифицированной среды Сабуро, состоящий из пептона 10 г, глюкозы 10 г,мальтозы 10 г, дрожжевого экстракта 5 г, воды - 1 л с рН 5,6 - 5,8, а для подавления роста бактерий и грибовв среду вносят 0,04 молочной кислоты,затем в предварительно простерилизованные колбы объемом 500 мл при режиме автоклавирования 2 атм. 60 мин заливают по 100 мл жидкой среды и вносят мицелий энтомопатогенного гриба рода , с последующим встряхиванием при 160 об/мин,температуре 24-26 С в течение 5-7 суток.