Питательная среда для выращивания туляремийного микроба из крови больных людей

(51) 12 5/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ полученного из крови больных людей на жидкой питательной среде. Питательная среда для предварительного выращивания туляремийного микроба из крови больных людей, включающая пептон, натрий хлористый,фосфорнокислый калий двузамещенный,-цистеин солянокислый,дополнительно содержит панкреатический гидролизат из кровяных сгустков, магний сернокислый, натрий метабисульфит, тиамина хлорид, никотиновую кислоту, цитрат натрия,глюкозу, глицерин, при следующем соотношении компонентов, мас.пептон 0,5-2,0 панкреатический гидролизат из кровяных сгустков 3,0-6,0 натрий хлористый 0,5-1,0 калий фосфорнокислый двузамещенный 0,1-0,5 натрий метабисульфит 0,07-0,7 магний сернокислый 0,05-0,5(72) Куница Татьяна Николаевна Силина Елена Николаевна Избанова Уйнкуль Айтеновна(73) Республиканское государственное казнное предприятие Казахский научный центр карантинных и зоонозных инфекций им. Масгута Айкимбаева Агентства Республики Казахстан по защите прав потребителей(56) Чимиров О.Б., Турсунов А.Н., Куанбаев Д.Н. Среда для определения цитруллинуреидазной активности у возбудителя туляремии // Х межреспубликанская научно-практическая конференция противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана по профилактике чумы (тезисы докладов)., Алма-Ата, 1985, с.299(54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА ИЗ КРОВИ БОЛЬНЫХ ЛЮДЕЙ(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к клинической, может быть использовано для предварительного выращивания и транспортировки возбудителя туляремии из крови больных и подозреваемых на заболевание туляремией людей. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в надежном предварительном росте туляремийного микроба, 30663 Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к клинической, может быть использовано для предварительного выращивания и транспортировки возбудителя туляремии из крови больных и подозреваемых на заболевание туляремией людей. Известна питательная среда, состоящая из пептона,натрия хлористого,калия фосфорнокислого двузамещенного, -цистеина солянокислого Чимиров О.Б., Турсунов А.Н.,Куанбаев Д.Н. Среда для определения цитруллинуреидазной активности у возбудителя туляремии. Х - межреспубликанская научнопрактическая конференция противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана по профилактике чумы (тезисы докладов). 1985, АлмаАта, с.299. Недостатком данной среды является то, что она не предназначена для предварительного выращивания и транспортировки возбудителя туляремии из крови больных и подозреваемых на заболевание туляремией людей и обеспечивает рост при очень большой посевной дозе. Задачей данного изобретения было создание высокочувствительной,качественной,простой среды способной длительно сохранять и выращивать единичные клетки туляремийного микроба. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в надежном предварительном росте туляремийного микроба,полученного из крови больных людей на жидкой питательной среде. Питательная среда для предварительного выращивания туляремийного микроба из крови больных людей, включающая пептон, натрий хлористый,калий фосфорнокислый двузамещенный,-цистеин солянокислый,дополнительно содержит панкреатический гидролизат из кровяных сгустков, магний сернокислый, натрий метабисульфит, тиамина хлорид, никотиновую кислоту, цитрат натрия,глюкозу, глицерин, при следующем соотношении компонентов, мас. пептон 0,5-2,0 панкреатический гидролизат из кровяных сгустков 3,0-6,0 натрий хлористый 0,5-1,0 калий фосфорнокислый двузамещенный 0,1-0,5 натрий метабисульфит 0,07-0,7 магний сернокислый 0,05-0,5-цистеин солянокислый 0,1-1,0 тиамина хлорид 0,001-0,05 никотиновая кислота 0,0015-0,05 глюкоза 0,5-2,0 глицерин 0,5-3,0 цитрат натрия 1,0-6,0 дистиллированная вода остальное. Состав и возможность применения заявляемой питательной среды для выращивания возбудителя туляремии подтверждены нами экспериментальным путем и не известны из доступных источников 2 информации. Выделение туляремийного микроба из крови, имеет большие трудности, так как его выделение проводят биологическим методом,заражая 10 белых мышей и 2 морских свинок. Все это приводит к тому, что на практике, как правило,данный анализ не проводится. Хотя это наиболее доступный материал для диагностики туляремии, и выделение туляремийного микроба от заболевших людей имеет большое значение (определение чувствительности к антибиотикам,эпидемиологической расшифровки вспышки). Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами. Подбор состава жидкой питательной среды для выращивания туляремийного микроба. Пример 1. Жидкую питательную среду для предварительного выращивания (транспортировки) туляремийного микроба из крови больных людей используют при следующем соотношении компонентов пептон 0,5 панкреатический гидролизат из кровяных сгустков 3 калия фосфорнокислого двузамещенного 0,1 натрий хлористый 0,5 натрий метабисульфит 0,07 магний сернокислый 0,05-цистеин солянокислый 0,1 тиамина хлорид 0,001 никотиновая кислота 0,0015 глюкоза 0,5 глицерин 0,5 цитрат натрия 1 дистиллированная вода остальное. Жидкую питательную среду для предварительного выращивания (транспортировки) туляремийного микроба из крови больных людей готовят следующим образом. Приготавливают смесь из панкреатического гидролизата из кровяных сгустков 30,0 мл/л и 970 мл дистиллированной воды. В приготовленную смесь добавляют натрия хлорид 5,0 г/л, пептона 5,0 г/л. Все компоненты перемешивают и растворяют при нагревании. Затем автоклавируют при 1 атм в течение 30 мин. После автоклавирования фильтруют через бумажный фильтр и вносят оставшиеся компоненты среды натрий метабисульфит 0,7 г/л, глюкозу 5,0 г/л,глицерин 10,0 мл/л, -цистеин солянокислый 100 мг/л, цитрат натрия 30,0 г/л, тиамина хлорид 0,01 г/л, никотиновую кислоту 0,015 г/л. Все компоненты тщательно перемешивают и устанавливают 7,0-7,2. Готовую питательную среду разливают в 20 мл флаконы (по 5 мл среды на один флакон), закрывают резиновыми пробками и запечатывают алюминиевыми колпачками. Далее среду стерилизуют при 0,5 атм 30 мин. Затем питательную среду для проверки стерильности помещают на 48 ч в термостат. Пример 2. Жидкую питательную среду для предварительного выращивания (транспортировки) туляремийного микроба из крови больных людей 42-25-59-86 П и разводят в 10 раз (к 0,5 см 3 взвеси добавляют 4,5 см 3 0,9-ного раствора хлористого натрия). Полученное разведение культуры эквивалентно 1.109 м.ксм-3. Из исходных стандартных взвесей готовят десятикратные разведения путем последовательного переноса 0,5 см 3 культуры в 4,5 см 3 0,9-ного раствора хлорида натрия. По 0,1 см 3 микробной взвеси из разведения 10-4, 10-5,10-6 и 10-7 (1 105, 1 104,1103 и 1102 м.ксм 3).КА 29 вносят во флаконы со средой. Культуру выращивают в термостате при температуре (371)С в течение (353) ч., делают высев на плотную питательную среду (коммерческий). В качестве контроля используют прототип питательной среды без индикатора фенолового красного (фенолрот). Чувствительность сред оценивают по минимальной посевной дозе, при которой наблюдается рост туляремийного микроба на средах. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 1. Из представленных в таблице 1 данных видно,что заявляемая среда при соотношении компонентов,соответствующих примеру 2,обеспечивает рост туляремийного микроба в достаточном количестве. Пример 4. Влияние температуры на сохранение и размножение туляремийного микроба в испытуемых средах. В питательную среду при соотношении компонентов, соответствующих примеру 2, вносят микробную взвесь из разведения 10-6 (1103 м.ксм 3) выше описанным способом. Далее флаконы со средой помещают в термостат при 37 С, при комнатной температуре ( 22 С) и холодильник( 4 С), через каждые 2 суток в течение 20 дней делают высев по 0,1 на плотную питательную среду(- коммерческий). Эффективность оценивают по длительности высева туляремийного микроба,выращенного на питательных средах. Результаты представлены в таблице 2. Из таблицы 2 следует, что на заявляемой питательной среде по сравнению с прототипом возбудитель туляремии сохраняется более длительное время,что дает возможность использовать ее как транспортную среду. используют так же, как и в примере 1, при следующем соотношении компонентов пептон 1 панкреатический гидролизат из кровяных сгустков 4 калия фосфорнокислого двузамещенного 0,3 натрий хлористый 0,85 натрий метабисульфит 0,1 магний сернокислый 0,1-цистеин солянокислый 0,5 тиамина хлорид 0,01 никотиновая кислота 0,015 глюкоза 1 глицерин 2 цитрат натрия 4 дистиллированная вода остальное. Пример 3. Жидкую питательную среду для предварительного выращивания (транспортировки) туляремийного микроба из крови больных людей используют также, как и в примере 1, при следующем соотношении компонентов пептон 2 панкреатический гидролизат из кровяных сгустков 6 натрий хлористый 1 калия фосфорнокислого двузамещенного 0,5 натрий метабисульфит 0,7 магний сернокислый 0,5-цистеин солянокислый 1 тиамина хлорид 0,05 никотиновая кислота 0,05 глюкоза 2 глицерин 3 цитрат натрия 6 дистиллированная вода остальное. Для определения ростовых свойств питательной среды используют штамм .КА - 29,полученный из МЖК КНЦКЗИ. Для проверки качества питательных сред используют 48-часовые культуры туляремийного микроба, выращенные на желточной среде Мак-Коя при температуре 37 С. Готовят взвесь микробов в 0,9-ном растворе хлористого натрия. Доводят концентрацию микробной взвеси до 10 единиц по стандартному образцу мутности ГИСК им. Л.А.Тарасевича ОСО Таблица 1 Рост .КА 29 при различном соотношении компонентов среды Предложенная питательная среда 5 Таблица 2 Влияние различной температуры на сохранение и размножение туляремийного микроба в испытуемой среде ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Питательная среда для выращивания туляремийного микроба из крови больных людей,включающая пептон,натрий хлористый,фосфорнокислый калий двузамещенный, -цистеин солянокислый, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит панкреатический гидролизат из кровяных сгустков, магний сернокислый, натрий метабисульфит, тиамина хлорид, никотиновую кислоту, цитрат натрия,глюкозу, глицерин, при следующем соотношении компонентов, мас. пептон 0,5-2,0 панкреатический гидролизат из кровяных сгустков натрий хлористый калий фосфорнокислый двузамещенный натрий метабисульфит магний сернокислый-цистеин солянокислый тиамина хлорид никотиновая кислота глюкоза глицерин цитрат натрия дистиллированная вода