Способ получения поливалентной гипериммунной сыворотки против мастита крупного рогатого скота

(51) 61 39/40 (2006.01) 12 1/20 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения гипериммунной поливалентной сыворотки против основных возбудителей мастита крупного рогатого скота,предусматривает приготовление поливалентного антигена из производственных штаммовМ-66,-112,-14 и 64 Г, осуществления грундиммунизации и гипериммунизации поливалентным антигеном,причем грундиммунизацию осуществляют двукратно с интервалом 5 суток,а гипериммунизацию 8-кратными внутримышечными инъекциями с интервалом 3 суток, при общей дозе антигенов 50109 КОЕ (50 мл). Предложенный способ позволяет получить высокоэффективную лечебную сыворотку,усовершенствовать схему гипериммунизации,уменьшить объемы вводимого антигена, удешевить технологию производства, снизить трудозатраты.(72) Бияшев Кадыр Бияшевич Бияшев Биржан Кадырович Жуманов Кайрат Токсанбаевич Сарыбаева Динара Амангельдиевна Жылкайдар Арман Жетписбаевич(56) Юрков В.М., Демидова Л.Д. Антибиотики для лечения коров, больных маститом. Ветеринария, 10,1997, с. 30-32(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ МАСТИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(57) Изобретение относится к области ветеринарии,а именно к получению лечебно-профилактических препаратов, и может быть использовано для профилактики и лечения мастита крупного рогатого скота. Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению лечебно-профилактических препаратов, и может быть использовано для профилактики и лечения мастита крупного рогатого скота. Одной из важнейших задач животноводства является производство высококачественных безопасных в экологическом и санитарном отношении продуктов питания - молока и мяса. Основным источником роста производства молока является увеличение поголовья коров и повышение их продуктивности. В борьбе за выполнение поставленных задач существенным тормозом является заболевания молочной железы (маститы) у коров. Маститы причиняют молочному скотоводству большой ущерб, они значительно снижают продуктивность больных животных и сокращают срок их эксплуатации. Средняя продолжительность продуктивной жизни коров из-за ранней вынужденной выбраковки составляет 3,54 лактации, что совершенно недостаточно, так как не схватывает период наивысшей молочной продуктивности коров и увеличивает затраты на воспроизводство молочного стада. Маститы причиняют большие убытки и молочной промышленности даже небольшая примесь молока от коров, больных маститом, приводит к снижению качества сыров и других молочных продуктов. Молоко и продукты из молока маститных животных нередко вызывают массовые интоксикации и токсикоинфекции у людей. Причинами возникновения маститов у коров могут быть разнообразные факторы инфекция,интоксикация, травма вымени, особенно при неправильном машинном доении, химическое раздражение,термическое воздействие(охлаждение) и др. Многочисленные литературные данные,опубликованные в зарубежной и отечественной литературе свидетельствуют, что в этиологии возникновения воспаления молочной железы могут играть большое количество различных видов бактерий. Особое этиологическое значение придают стафилококкам, стрептококкам, кишечной палочке,тогда как другие микроорганизмы играют второстепенную роль. В настоящее время в ветеринарной практике для лечения маститов широко применяются антибиотики. Известны средства лечения мастита у коров,включающие интрацистернальное введение лекарственных средств, таких как мастицид,флавуроцид, мастисан А, мастисан Б, мастисан Е(Ивашура А.И. Система мероприятий по борьбе с маститами коров. - М. Росагропромиздат, 1991 Кветков В.П. Экологические иммунные препараты для ветеринарии и медицины. - 1992 Юрков В.М.,Демидова Л.Д. Антибиотики для лечения коров,больных маститом. //Ветеринария, 10, 1997, с. 3032). Недостатком известных средств является то, что у возбудителей мастита вырабатывается высокая 2 резистентность к ряду антибиотиков благодаря их длительному использованию, завышению доз,нарушению кратности введения. В результате большинство препаратов на основе антибиотиков обладает низкой терапевтической эффективностью,воспалительный процесс переходит в подострое и хроническое течение. До настоящего времени как у нас в стране, так и за рубежом нет эффективного способа серопрофилактики мастита крупного рогатого скота. Нами в доступной литературе не нашли аналогов по серопрофилактике мастита животных. Задачей изобретения является разработка способа получения высокоэффективной лечебной сыворотки против мастита крупного рогатого скота. Способ получения гипериммунной поливалентной сыворотки против мастита крупного рогатого скота заключается в том, что готовят поливалентный антиген из производственных штаммовМ-66,-112,-14 и 64 Г, затем осуществляют двукратную грундиммунизацию с интервалом 5 суток и гипериммунизацию животных 8-кратными внутримышечными инъекциями с интервалом 3 суток, при общей дозе антигенов 50109 КОЕ. Культуры-14 депонированы в ГУ НЦМРЛДМВ КГИ в АПК МСХ РК под регистрационными номерами М-66, -112, А-14,штамм Е.64 Г имеет ИП за 28311 от 19.03.2014. Пример 1. Гипериммунную поливалентную сыворотку против мастита крупного рогатого скота изготавливают следующим образом. Гипериммунизацию животных проводят по следующей схеме- 1 цикл (предварительное грундирование животных соответствующими антигенами),2 цикл(производственный период гипериммунизации). 1-цикл - предварительное грундирование животных. Для иммунизации используют клинически здоровых волов в возрасте от 3 до 5 лет, весом 350400 кг. Отобранных животных исследуют на инфекционные заболевания в соответствии с действующей инструкцией о порядке заготовки и санитарной обработки животных, используемых для производства биопрепаратов. Для создания грундиммунитета (направленная на повышение специфической реактивности организма) животным - продуцентам двукратно(интервал 5 суток) внутримышечно в разные участки тела вводят поливалентный антиген (смесь инактивированных культур стафилококков,стрептококков и эшерихий) в дозах 2.109 КОЕ и 5. 109 КОЕ (2 и 5 мл). 2-цикл подготовительный период гипериммунизации. Подготовительный период гипериммунизации начинается на 16 сутки после второго грундирования путем внутримышечных инъекций поливалентного антигена в возрастающих дозах 3,4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 мл (в 1 мл - 109 м.к.) с интервалом между инъекциями 3 суток. При данной схеме подготовительный срок гипериммунизации животных-продуцентов сокращается в сравнении с существующими схемами гипериммунизации с 90 суток до 30 суток(в 3 раза) и объем вводимого антигена в 7 раз меньше. На 30 сутки с момента введения антигенов проводят пробные крововзятия из яремной вены в стерильные флаконы. Полученную кровь от каждого продуцента посредством серологических реакций исследуют на динамику накопления стафилококкозных,стрептококкозных и эшерихиозных антител. Производственное крововзятие осуществляют при наличии в сыворотке крови антител к стафилококкам, стрептококкам и эшерихиям не ниже 1800-11200 в реакции агглютинации. 3-цикл производственный период гипериммунизации. Первое крововзятие от продуцентов по объему не превышает 0,6 л на 100 кг массы животного, в последующем 1,0-1,2 л на 100 кг массы. Кровь от продуцентов берут при нормальной температуре. Перед взятием крови выдерживают голодную диету в течение 12 часов, при неограниченном водопое. Через двое суток после каждого крововзятия проводят иммунизацию антигенами в дозах по 5 мл(5 х 109 КОЕ.),внутримышечно. Очередное крововзятие проводят через 7-8 суток после введения аните-гов. Для предохранения крови от свертывания в стерильные бутыли для взятия крови в качестве антикоагулянта наливают 10-ный раствор лимоннокислого натрия из расчета 34 мл на 1 л крови, которую смешивают с кровью плавными круговыми движениями. Форменные элементы крови отделяют сепарированием в течение 1015 минут с последующим девибринированием плазмы с добавлением 30-ного раствора хлористого кальция из расчета 1 мл на 1 л крови в течение 25-30 минут. Сыворотку консервируют 5 раствором химически чистого фенола до конечной концентрации 0,5 и перекачивают в стерильный отстойник, где ее выдерживают в течение 2 месяцев,при 4-10 С. Пример 2. Контроль сыворотки. Полученную производственную гипериммунную сыворотку проверяют на стерильность и безвредность. Для проверки стерильности делают высевы сыворотки на МПБ, МПА и МППБ под вазелиновым маслом. Высевы выдерживают 10 суток в термостатах при 37. Высевы должны быть стерильными. Безвредность сыворотки проверяют на белых мышах и морских свинках. Сыворотку вводят подкожно в дозе 0,5 мл пяти белым мышам и 10 мл пяти морским свинкам. Сыворотка считается безвредной, если животные после инъекции остаются живыми в течение 10 суток. Пример 3 Проверку сыворотки на противостафилококкозные,противострептококкозные и противоэшерихиозные свойства проводят на 20 морских свинках. Сыворотку вводят под кожу брюшка в дозе 1 мл. Через 24 часа им одновременно с 12 контрольными морскими свинками вводят стерильные дозы вирулентных культур(5 опытным и 3 контрольным),(5 - опытным и 3 контрольным),(5 - опытным и 3 контрольным) и(5 - опытным и 3 контрольным). Сыворотка считается активной, если она защищает от гибели более 90 опытных животных. Контрольные морские свинки должны погибнуть в течение 10 суток. За опытными животными наблюдают в течение 7 суток после падежа контрольных. Пример 4 Для определения лечебной эффективности поливалентной гипериммунной сыворотки определяют три группы морских свинок по 8 голов. Первую группу животных заражают смертельной дозой вирулентной культуры, вторую , третью -и четвертью -. Через 24 часа животным первой группы (5 голов), второй (5 голов), третьей группы (5 голов) и четвертой (5 голов) вводят испытуемую сыворотку в дозе 10 мл подкожно. По три головы морских свинок от каждой группы оставлены в контроле. Процент выживаемости опытных морских свинок составил 95, при падеже контрольных на 6-7 сутки. Экспериментальные исследования показывают,что поливалентная сыворотка,полученная предложенным способом, является безвредным,стерильным и ареактогенным препаратом,обладающим выраженным лечебным и профилактическим действием против основных возбудителей мастита крупного рогатого скота. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения гипериммунной поливалентной сыворотки против мастита крупного рогатого скота, отличающийся тем, что готовят поливалентный антиген из производственных штаммовМ-66,К-112,-14 и 64 Г, затем осуществляют грундиммунизацию и гипериммунизацию поливалентным антигеном,причем грундиммунизацию осуществляют двукратно с интервалом 5 суток, а гипериммунизацию 8 кратными внутримышечными инъекциями с 3 интервалом 3 суток, при общей дозе антигенов