Среда для хранения любых биологических материалов и субстратов для паразитологических исследований

(51) 01 1/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Использование консервирующей среды осуществляется следующим образом. Фиксируемый биологический субстрат (кусочки тканей и органов,фекалии, рвотные массы, мокрота, матрикс желудочно-кишечного тракта) помещается в тосол в объемном соотношении сохраняемого материала и консерванта 11. Законсервированный таким образом материал хранится до исследования в течение длительного времени. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в расширении арсенала консервирующих средств и самого спектра сохраняемых биологических материалов и субстратов для паразитологического исследования. В числе преимуществ вновь предлагаемого консерванта можно назвать доступность и безупречную консервирующую способность тосола при минимальном объеме его использования,длительный срок хранения объектов с их просветлением, устранением неприятных запахов,предупреждением высыхания и микробной порчи материала и среды, отсутствие летучих компонентов в консерванте, просветляющий эффект, отсутствие деформации биологических объектов и их пригодность для всех видов паразитологических исследований.(72) Тарасовская Наталия Евгеньевна Булекбаева Ляззат Токкановна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Павлодарский государственный педагогический институт Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СРЕДА ДЛЯ ХРАНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ И СУБСТРАТОВ ДЛЯ ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ(57) Изобретение относится к области биологии,ветеринарии и ветеринарно-санитарной экспертизы,в частности, к способам хранения нативных биосубстратов для паразитологических исследований. В качестве среды для хранения биологических материалов и субстратов для паразитологических исследований предлагается использовать тосол, в составе которого присутствует этиленгликоль,алифатические спирты и другие технологические добавки,которые также обладают консервирующими свойствами. Изобретение относится к области биологии,ветеринарии и ветеринарно-санитарной экспертизы,в частности, к способам хранения нативных биосубстратов для паразитологических исследований. Из готовых веществ для технического и хозяйственно-бытового применения известно использование для хранения фекалий 1-ного раствора детергента - любого стирального порошка,которым фекалии заливаются в массовом соотношении не менее 15 (Генис Д.Е. Медицинская паразитология. - М. Медицина, 1975. с.47-48)(Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды Справочник. - М. Колос, 1983. - 208 с., ил. с.30). Детергенты образуют поверхностную пленку,препятствующую аэрации яиц гельминтов и их развитию, а также предохраняют инвазионные элементы от микробного разрушения. Недостатками использования детергентов в качестве консервантов для копрологического материала являются 1) ограниченный срок хранения фекалий (до двух недель), обусловленный невысокой массовой долей консервирующего вещества, а также угрозой автолиза яиц 2) щелочная среда консервирующей жидкости,которая может привести к частичной деструкции некоторых пропагативных стадий паразитов и,следовательно, уменьшению их количества в исследуемой порции фекалий 3) данная концентрация детергента не обеспечивает полной дезинфекции и дезинвазии копрологического материала, а также не исключает развитие некоторых инвазионных элементов, что может затруднить диагностику. 4) приходится хранить и транспортировать большой объем жидкости(материала с консервантом), так как для надежной сохранности фекалии нужно заливать не менее чем пятикратным объемом раствора детергента. 5) среда пригодна только для хранения фекалий,но не используется для консервации других биологических материалов и субстратов для паразитологических исследований (матрикса полых органов, образцов тканей, биоптатов и т.д.). Известна среда для хранения фекалий для гельминтологических исследований с использованием 20-30-ного раствора силиката натрия(разведенного водой конторского силикатного клея или жидкого натриевого стекла)(Предварительный патент РК 18489 от 15.06.2007 г., кл. А 01 1/00). Она надежно сохраняет яйца и другие инвазионные элементы 1/00). Она надежно сохраняет яйца и другие инвазионные элементы паразитов, предотвращает развитие яиц гельминтов, не приводит к автолизу и микробной порче, несмотря на щелочную среду. Недостатком данного консерванта является то,что обогащение хранившихся в ней фекалий для флотации яиц гельминтов невозможно проводить растворами других солей, особенно натриевых,вызывающих выпадение осадка кремниевой 2 кислоты вследствие совместного гидролиза. Хотя высокая плотность среды уже обеспечивает всплывание яиц большинства гельминтов на поверхность. Нежелательно также смешивание консервирующей среды и хранящегося в ней копрологического материала с жидкостями,содержащими этиловый и другие одноатомные спирты, которые также приводят к выпадению стойкого студенистого осадка. Как и при консервации в растворах детергентов,при использовании растворов силиката получается большой объем фиксированного материала. Для надежности хранения рекомендуется трехкратное превышение массы раствора над массой копрологического материала,что создает неудобства при транспортировании экспедиционных сборов. Кроме того, силикат, как и растворы детергентов,предназначен только для хранения фекалий, но не для других биологических материалов, которые могут содержать инвазионные элементы паразитов так как щелочная среда от гидролиза этого соединения может подвергнуть омылению многие животные ткани. Задачей изобретения является расширение арсенала консервирующих средств для хранения паразитологического материала, расширение круга сохраняемых биосубстратов (матрикса кишечного содержимого, мокроты, кусочков тканей полых,мышечных и паренхиматозных органов) и инвазионных элементов паразитов, увеличение длительности и надежности хранения в любых условиях, при доступности консервирующего средства достижение просветляющего эффекта,позволяющего в лабораторных и полевых условиях проводить нативное исследование материала. Для решения поставленной задачи предлагается использование в качестве консервирующей среды для хранения фекалий и других биосубстратов тосола, представляющего собой водный раствор этиленгликоля с алифатическими спиртами с другими технологическими добавками (ТУ 2422006-12190158-2013). Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в следующем 1) Пригодность для хранения любых биологических материалов, могущих содержать инвазионные элементы паразитов (фекалии, рвотные массы, матрикс полых органов, образцы тканей). 2) Доступность предлагаемой консервирующей жидкости, облигатно использующейся для работы автотранспорта и имеющейся в распоряжении в любых условиях, в том числе экспедиционнополевых. 3) Безупречная консервирующая способность среды, позволяющая в течение длительного времени и при небольшом объеме фиксатора сохранять любые биологические субстраты - фекалии,мокроту,желудочно-кишечное содержимое,образцы паренхиматозных органов и мышечных тканей любых животных - с полной сохранностью всех инвазионных элементов и даже микрофлоры. 4) Предупреждение полного высыхания консерванта и материала даже в неплотно закрытой посуде(так как основной компонент этиленгликоль, а также мало испаряющиеся высшие алифатические спирты). 5) Отсутствие запахов и минимум летучих компонентов в самой консервирующей жидкости,благодаря чему аспирационное попадание компонентов фиксатора в организм отсутствует или минимально. 6) Устранение всех неприятных запахов от любых биологических субстратов, в том числе фекалий и матрикса желудочно-кишечного тракта. 7) Предотвращение развития всех инвазионных элементов паразитов и размножение микроорганизмов, что обеспечивает дезинфекцию и дезинвазию материала и эпидемиологическую безопасность для работающих. 8) Фиксатор в любой концентрации и любом соотношении с консервируемым материалом не приводит к деформации инвазионных элементов и фрагментов паразитов, обеспечивая правильную дифференциальную диагностику гельминтозов и протозоозов и возможность изучения морфологии любых ларвальных стадий. 9) Тосол обладает просветляющими свойствами благодаря содержанию значительной концентрации этиленгликоля - двухатомного спирта с оптической активностью. Это дает возможность исследования консервированных материалов в нативных мазках и на компрессорных стеклах без использования дополнительных просветляющих средств. Имеющееся в тосоле сочетание двухатомных и одноатомных спиртов не приводят к осмотической деформации и искажению просветляемых объектов. 10) Высохшие фекалии и другие биологические материалы быстро размягчаются в консервирующей жидкости, обеспечивая удобную для исследования консистенцию. 11) Для надежной консервации любого биологического субстрата, даже с высоким микробным обсеменением, требуется минимальный объем фиксатора (при соотношении 11), что обеспечивает не только экономию достаточно дорогостоящего консерванта, но и удобство хранения и транспорта материала в выездных условиях. 12) Копрологический материал может быть исследован на наличие яиц гельминтов и других инвазионных элементов паразитов методом обогащения с использованием любых солевых растворов. Для мышечных тканей и кусочков паренхиматозных органов облегчается компрессорное исследование - благодаря мягкой консистенции и прозрачности материала. В качестве среды для хранения биологических материалов и субстратов для паразитологических исследований предлагается использовать тосол, в составе которого присутствует этиленгликоль,алифатические спирты и другие технологические добавки,которые также обладают консервирующими свойствами (ТУ 2422-00612190158-2013). Использование консервирующей среды осуществляется следующим образом. Фиксируемый биологический субстрат (кусочки тканей и органов,фекалии, рвотные массы, мокрота, матрикс желудочно-кишечного тракта) помещается в тосол в объемном соотношении сохраняемого материала и консерванта 11. Законсервированный таким образом материал хранится до исследования в течение длительного времени. Испытания предлагаемой среды для хранения паразитологического материала показали следующие результаты. Пример 1. Фекалии крупной беспородной собаки,инвазированной токсокарозом,зафиксированы 18.12.13 г. в антифризе в объемном соотношении консерванта и материала 11 через день после сбора. Во многих яйцах уже началось деление эмбриональной клетки на бластомеры. Из остатков пищи отмечены крахмальные зерна. В микрофлоре преобладали дрожжеподобные грибы. Контрольный просмотр нативных мазков был сделан через 1, 2, 3 недели, 1 месяц, 1,5 месяца. Количество яиц в субстрате не уменьшилось,изменения в их состоянии не произошло. Непереваренные кормовые остатки, в том числе целые зерна картофельного крахмала, хорошо сохранились. Хорошо сохранились также клетки дрожжевых грибов. Запаха от фекалий и признаков микробной порчи материала не было. Фекалии,непереваренные остатки и яйца гельминтов хорошо сохранился в течение всего срока наблюдений(3 месяца). Пример 2. Рвотные массы кота с фрагментами цестодызафиксированы в продажном антифризе в соотношении 11. Через 1,2, 4 недели состояние пищевых остатков (это были в основном полупереваренные мясопродукты) не изменилось, членики гидатигеры сохранились хорошо, приобрели полную прозрачность, слегка окрасившись в голубой цвет. Запахов и микробной порчи не отмечено. Пример 3. Фрагменты мышечных тканей свиньи(сердца,диафрагмы,скелетных мышц с сухожилиями) зафиксированы в тосоле при объемном соотношении материала и консерванта 11. Через 1, 2, 3 недели, 1 месяц признаков порчи материала не отмечено. В тонком слое мышечные ткани приобрели прозрачность. Сухожилия окрасились в голубой цвет. Проведено компрессорное исследование на наличие личинок трихинеллы, результат оказался отрицательным. Все элементы мышечной ткани хорошо просматривались под микроскопом. Признаков лизиса ткани не отмечено. Пример 4. Кусочки мышечной ткани барана,пораженные саркоцистозом, были зафиксированы в тосоле в объемном соотношении 11 после начальных стадий термической обработки мяса(домохозяйка отказалась от дальнейшей варки,заметив подозрительные образования). Через месяц сохранность мышечной ткани и саркоцист оказалась безупречной,саркоспоридии полностью просветлились, мясо имело мягкую консистенцию,3 близкую к естественной, и оказалось удобным для компрессорного исследования. Пример 5. Кусочки мышечной ткани окуня,приобретенного на рынке г. Павлодара, толщиной 1-1,5 см, сохранялись в тосоле в течение 5 недель,при соотношении рыбы и консервирующей жидкости 11 по объему. Мышцы рыбы приобрели прозрачность и слегка окрасились в голубой цвет,под микроскопом хорошо просматривались на срезах отдельные волокна. Признаков лизиса ткани не было. Консистенция мышц рыбы мягкая, близкая к естественной. Кусочки ткани легко раздавливались между компрессорными стеклами (и даже между обычными предметными стеклами). Результат исследования на наличие ларвальных гельминтов оказался отрицательным. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Среда для хранения биологических материалов и субстратов для паразитологических исследований,включающая использование готовых технических и хозяйственно-бытовых веществ, отличающаяся тем, что в качестве вещества для консервации биологического материала используется тосол при объемном соотношении консервирующей жидкости и сохраняемого материала 11.