Состав для просветления и хранения биологических объектов

(51) 01 1/28 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ используемого в качестве заливочной среды при изготовлении постоянных и временных препаратов,не требующей предварительного обезвоживания и не искажающей структуры объекта при просветлении. Состав для просветления и хранения биологических объектов содержит компоненты в следующих соотношениях (по массе)- уротропин технический (сухое горючее) - 1525,-сахароза-15-25,- вода - остальное. Состав, пригоден для консервации, хранения и просветления широкого круга биологических объектов для научно-исследовательских, учебнометодических целей,ветеринарно-санитарной экспертизы, а также может быть использован в качестве заливочной среды при изготовлении постоянных и временных препаратов, не требующей предварительного обезвоживания и не искажающей структуры объекта при просветлении.(72) Дюсембаев Сергазы Турлыбекович Ермухамбетова Жазира Тарасовская Наталья Евгеньевна(54) СОСТАВ ДЛЯ ПРОСВЕТЛЕНИЯ И ХРАНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ(57) Изобретение относится к области биологии ветеринарии и ветеринарно-санитарной экспертизы,в частности,к способам просветления биологических объектов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в разработке универсального состава,пригодного для консервации, хранения и просветления широкого круга биологических объектов для научноисследовательских, учебно-методических целей,ветеринарно-санитарной экспертизы, а также Изобретение относится к области биологии и методики ее преподавания, ветеринарии и ветсанэкспертизы, в частности, к способам просветления биологических объектов. Известен способ просветления биологических объектов с помощью 40-ной глюкозы на предметном стекле под покровным(предварительный патент РК 12031, кл. 01 1/28, 16.09.2002 г.). В зарубежных руководствах по гистологии предлагается введение сахарозы,глюкозы и фруктозы в состав заключающих сред для создания просветляющего эффекта, а фруктозу в качестве самостоятельной заключающей и просветляющей среды Лилли Р. Гистологическая техника и практическая гистохимия. - М. Мир,1969. - 645 с с. 99-100. Уксусная кислота (ледяная) является самостоятельным просветляющим веществом, и ее использование практикуется в ряде стран ЕвропыВ.. - . -., 1984, 6, 4.242-245. Недостатком известных способов использования Сахаров в качестве просветляющих веществ является необходимость изготовления препарата на предметном стекле, что не всегда целесообразно для крупных и объемных гельминтов. К тому же глюкоза (даже при высоком онкотическом давлении концентрированных растворов) не застрахована от микробной порчи. Ледяная уксусная кислота выполняет функции не только просветителя, но также консерванта и обезвоживающего агента(перед заключением в безводные среды), однако она вызывает удлинение тела нематод на 20, а работа с объектами, извлеченными из концентрированной уксусной кислоты, опасна для исследователя ввиду угрозы химического ожога и аспирационного поступления летучей кислоты в организм. Заключающие среды с содержанием сахарозы и 70-ная сахароза, обладающие высокой вязкостью и хорошим просветляющим эффектом, вскоре после изготовления препарата кристаллизуются, ухудшая видимость объекта Лилли Р. Гистологическая техника и практическая гистохимия. - М. Мир,1969.-645 с с. 99-100. Задачей изобретения является разработка универсального состава,пригодного для консервации, хранения и просветления широкого круга биологических объектов для различных целей,а также используемого в качестве заливочной среды при изготовлении постоянных и временных препаратов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в разработке универсального состава,пригодного для консервации, хранения и просветления широкого круга биологических объектов для научно 2 исследовательских, учебно-методических целей,ветеринарно-санитарной экспертизы, а также используемого в качестве заливочной среды при изготовлении постоянных и временных препаратов,не требующей предварительного обезвоживания и не искажающей структуры объекта при просветлении. Изготовление и использование состава производится следующим образом. Готовят водный раствор, включающий следующее соотношение компонентов (по массе) уротропин технический(сухое горючее) - 15-25 сахароза - 15-25 вода - остальное Пример 1. Уротропин технический - 15 Сахароза - 25 Вода - остальное. Пример 2. Уротропин технический - 20 Сахароза - 20 Вода - остальное. Пример 3. Уротропин технический - 25 Сахароза- 15 Вода - остальное. В приготовленный раствор помещают любые объекты,предназначенные для хранения(гельминтов, беспозвоночных, ткани и органы позвоночных животных, органы и ткани растений). Объекты хранятся неограниченное время без потери исходного цвета и консистенции, становясь частично или полностью прозрачными (в зависимости от размера). Срезы мышечной ткани рыб, мяса домашних и диких животных,предназначенные для исследования на ларвальные стадии паразитов,помещаются в данный состав с соответствующими этикетками срок хранения не ограничен. При хранении они становятся прозрачными, сохраняют исходную консистенцию и пригодны для просмотра на наличие личинок с помощью компрессорного стекла 1,ли визуально. Объект, предназначенный для изготовления постоянного или временного препарата, помещается в каплю состава на предметное стекло и накрывается сверху покровным. Через несколько минут достигается качественное просветление, и препарат готов для просмотра. Через 2-3 дня состав застывает, и такой препарат может храниться без изменения несколько лет. Результаты испытания составов, описанных в примерах 1-3, для различных целей показаны в таблице 1. Таблица 1 Результаты биологических объектов испытания состава для просветления и хранения Пример Цели использования состава и результаты В качестве жидкой В качестве среды для хранения просветляющего агента при исследовании мышечных тканей на наличие паразитов Уротропин технический Печень наваги с- 15 Сахароза - 25 личинками анизакид Вода - остальное. хранилась 8 мес.,личинки просветлились. Консистенция чуть тверже естественной. В слое мышц рыбы толщиной 5 мм хорошо видны метацеркарии описторхов образец компрессуется легче нативного. Печень наваги хорошо сохранилась в течение 8 месяцев,капсулы с личинками анизаки хорошо просветлились. Консистенция объекта обычная. Печень наваги с личинками анизакид хранится 8 месяцев,сохранность хорошая,личинки просветлились. Консистенция несколько мягче обычной. В слое мышц рыбы толщиной 5 мм хорошо видны метацеркарии описторхов образец компрессуется между обычными предметными стеклами без значительных физических усилий. В слое мышц рыбы толщиной 5 мм хорошо видны метацеркарии онисторхов образец ткани легко компрессуется между 2 обычными предметными стеклами. Как видно из таблицы 1, все три варианта состава обеспечивают надежную сохранность помещенного в него объекта. Составы с более высоким содержанием уротропина в большей степени размягчают мышечные ткани рыб и облегчают компрессирование они также не дают кристаллизации при использовании в качестве В качестве заливочной среды при изготовлении постоянных и временных препаратов на предметных стеклах У нематод хорошо просветлились внутренние органы. Покровное стекло неподвижно застыло на предметном через 1 день. Кристаллизации под покровным стеклом нет, в каплях раствора, застывших вне покровного стекла,единичные кристаллы. У нематод хорошо просветлились внутренние органы. Покровное стекло неподвижно застыло на предметном через 2 дня. Кристаллизации среды в препарате нет. У нематод хорошо просветлились внутренние органы. Покровное стекло неподвижно застыло на предметном через 5 дней. Кристаллизации в препарате нет. заливочной среды. Составы с высоким содержанием сахарозы быстрее просветляют объекты, кроме того,с их помощью достигается быстрое прочное фиксирование покровного стекла на предметном. Механизмы действия компонентов состава указаны в таблице 2. Таблица 2 Механизмы действия компонентов просветляющего и консервирующего состава Действие компонентов состава Консервирующее Просветляющее Затвердевающее Участвующие вещества Уротропин, сахароза Уротропин, сахароза Сахароза 1) Высокое онкотическое Оптическая активность давление обоих веществ обоих веществ наличие асимметричного 2) Антисептические атома углерода,свойства уротропина способность вращать плоскость поляризации 3) Выделение из света. уротропина небольших количеств формальдегида при действии органических кислот фиксируемого материала. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Состав для просветления и хранения биологических объектов, включающий вещества с оптической активностью и воду, отличающийся тем, что в качестве веществ с оптической активностью содержит уротропин технический и Уротропин препятствует кристаллизации сахарозы под покровным стеклом. сахарозу при следующем соотношении компонентов,уротропин технический Сахароза затвердевает за счет образования сложных сетчатых полимеров с участием воды.