Способ обнаружения афлатоксинов в зерне кукурузы по косвенному показателю – желто-зеленой флуоресценции

(19)(13) 4 (11) 25148 01 21/64 (2010.01) 61 39/40 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ и уточнение корреляционной зависимости между содержанием ЖЗФ и афлатоксинов, устранение отмеченных недостатков, снижение трудоемкости и повышения достоверности полученных результатов,которое достигается за счет того, что точно установлена степень ультрафиолетового облучения с длиной волны 365 нм. Сущность визуального обнаружения зерен обладающих желто-зеленой флуоресценцией (ЖЗФ) при ультрафиолетовом облучении заключается в следующем. От партии зерна, подлежащей обследованию, в соответствии с действующим ГОСТ отбирается исходная проба массой не менее 5 кг, из которой выделяются две аналитические пробы по 1 кг. Из аналитических проб в затемненном помещении под источником УФО с длиной волны 365 нм отбираются зерна и обломки флуоресцирующие ярким зеленым или желто-зеленым цветом при этом нормальные зерна флуоресцируют тусклофиолетовым цветом. Способ ЖЗФ вполне может быть рекомендован в качестве косвенного для выявления возможного присутствия афлатоксинов в партиях зерна кукурузы любого целевого назначения.(72) Ремеле Валентина Ванифатьевна Львова Лилия Степановна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт переработки сельскохозяйственной продукции(54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ АФЛАТОКСИНОВ В ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ ПО КОСВЕННОМУ ПОКАЗАТЕЛЮ - ЖЕЛТОЗЕЛЕНОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ(57) Изобретение относится к микробиологии,посвящено проблеме микотоксинов - ядовитых продуктов жизнедеятельности микроскопических грибов, вызывающих различные заболевания человека и животных - микотоксикозы и направлено на разработку способов и средств по контролю пищевой безопасности зерна, пищевых продуктов и кормов Технической задачей изобретения является приближение визуального метода к аналитическому Изобретение относится к микробиологии,посвящено проблеме микотоксинов - ядовитых продуктов жизнедеятельности микроскопических грибов, вызывающих различные заболевания человека и животных - микотоксикозы и направлено на разработку способов и средств по контролю пищевой безопасности зерна, пищевых продуктов и кормов. Особой остротой отличается проблема афлатоксинов, продуцируемых грибамии. Для зерна кукурузы южных и юго-восточных регионов возделывания Казахстана характерно широкое (до 70) распространение и высокие (до 4500 мкг/кг при ПДК 5 мкг/кг) уровни афлатоксина В 1 являющегося ядом для живого организма и получившего название печеночного канцерогена, так как вызывает рак печени. Ввиду высокой опасности микотоксинов для здоровья человека, самыми опасными из которых являются афлатоксины, а среди них афлатоксин В 1 их содержание в зерне, пищевых продуктах и кормах строго регламентировано. Предельно-допустимые концентрации (ПДК) микотоксинов составляют афлатоксина 1- 0,005 мг/кг, дезоксиваленол - 0,7 мг/кг, Т-2 токсин - 0,1 мг/кг, зеараленон - 1,0 мг/кг. Действующими стандартами предусмотрена сертификация зерна и зернопродуктов по содержанию микотоксинов. Анализ рекомендовано проводить по методам,утвержденным органами здравоохранения. Однако,рекомендованные химико-хроматографические способы анализа микотоксинов, сложны, трудоемки,продолжительны, требуют высокой квалификации исполнителей и поэтому не нашли применения на предприятиях АПК. К тому же нет необходимости подвергать такому сложному анализу все партии зерна. Необходимо проверять те из них, которые интенсивно поражены грибами. Известен разработанный американскими учеными фазовоконтактный способ обнаружения афлатоксинов (см. В.М. Молочников, переводР 34160 ЦООНТИ/ВНО, Москва, 28.11.1988 г.),заключающийся в отборе адекватной пробы зерна из кормушек через определенные интервалы в процессе выращивания птицы с перерывом от двух до четырех недель, которые подвергались анализу на содержание в них афлатоксина, вомитоксина,зеараленона и токсина Т-2. Кроме того известен фазовоконтактный метод для обнаружения заражения афлатоксином (см. Ю.В. Крижевская,перевод 34163,ЦООНТИ/ВНО, Москва, 30.11.1988 г.), в котором рассматриваются ограничения и ложные результаты при применении фазовоконтактного метода для обнаружения афлатоксина, сущность которого заключается в отборе для исследования адекватной пробы кукурузы, раздроблении всех зерновок,облучении их длинноволновым ультрафиолетовым светом в темном поле, визуальном наблюдении с целью обнаружения яркой желто-зеленой флуоресценции теоретически указывает с высокой степенью надежности на присутствие афлатоксина,загрязняющего образец кукурузы. Рассмотренный способ по совокупности признаков и достигаемому положительному эффекту является наиболее близким техническим решением (прототипом). Недостатками метода является визуальность,различное количество вспышек ЖЗФ, отсутствие точного параметра воздействия ультрафиолетового облучения, высокий процент ошибок (13) при определении микотоксинов химикохроматографическим методом. Технической задачей изобретения является приближение визуального метода к аналитическому и уточнение корреляционной зависимости между содержанием ЖЗФ и афлатоксинов, устранение отмеченных недостатков, снижение трудоемкости и повышения достоверности полученных результатов,которое достигается за счет того, что точно установлена степень ультрафиолетового облучения с длиной волны 365 нм. Сущность визуального обнаружения зерен обладающих желто-зеленой флуоресценцией (ЖЗФ) при ультрафиолетовом облучении заключается в следующем. От партии зерна, подлежащей обследованию, в соответствии с действующим ГОСТ отбирается исходная проба массой не менее 5 кг, из которой выделяются две аналитические пробы по 1 кг. Из аналитических проб в затемненном помещении под источником УФО с длиной волны 365 нм отбираются зерна и обломки, флуоресцирующие ярким зеленым или желто-зеленым цветом(нормальные зерна флуоресцируют тусклофиолетовым цветом). Выделенная фракция ЖЗФ-зерен взвешивается с точностью до 0,01 г и выражается в процентах. Партии, содержащие свыше 0,01 ЖЗФ-зерен для Казахстана, считаются неблагополучными. Пробы от таких партий следует направлять для исследования в специально выделенные учреждения, а зерно использовать в соответствии с результатами микотоксикологического анализа. Предлагаемый способ обнаружения афлатоксинов, обеспечивает практически 100-ное выявление контаминированных ими партий и может быть рекомендован в качестве косвенного для выявления возможного присутствия афлатоксинов в партиях зерна кукурузы любого целевого назначения. Его применение позволит улучшить контроль за санитарно-гигиеническим состоянием зерна на предприятиях, системы хлебопродуктов,обеспечить своевременное выявление и использование партий зерна загрязненных афлатоксинами, исключить заболевание человека,животных микотоксикозами за счет потребления загрязненных продуктов питания и кормов. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ обнаружения афлатоксинов в зерне кукурузы по косвенному показателю - желто 25148 зеленой флуоресценции, включающий отбор проб зерна, его дробление, отличающийся тем, что из пробы массой не менее 5 кг выделяются две пробы по 1 кг подвергают ультрафиолетовому облучению с длиной волны 365 нм с последующим отбором зерен флуоресцирующим ярким зеленым или желтозеленым цветом