Биотехнологический способ ускоренного размножения семенного картофеля

(51) 01 9/00 (2006.01) 05 9/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ картофеля,повышение эффективности их оздоровления биотехнологическим методом. Указанный технический результат достигается тем, что способ предусматривает выделение в стерильных условиях верхушечной растущей зоны(апикальной меристемы) из зоны роста почки,представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживание ее на питательной среде, выращивание оздоровленного растения,генетически идентичного материнскому,микрочеренкование растений в стерильных условиях ламинар-боксов, высаживание черенков в отдельную пробирку с питательной средой Мурасиге Скуга (МС) с содержанием аденина(индолилуксусной кислоты) и кинетина (0,1),выращивание из черенка нового растения в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования.(72) Лесова Жаниха Туреевна Надирова Санам Абдуллаевна Турпанова Рауза Масгутовна Егизбаева Тогжан Кадылбековна Ошакбаева Айжан Данебековна Усукеева Айбану Джекшембековна Мустафаева Молдир Жарылкасыновна(73) Акционерное общество Алматинский технологический университет(54) БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ СПОСОБ УСКОРЕННОГО РАЗМНОЖЕНИЯ СЕМЕННОГО КАРТОФЕЛЯ(57) Использование сельское хозяйство,картофелеводство, биотехнология, семеноводство. Техническим результатом изобретения является сохранение биологического потенциала сортов Использование сельское хозяйство,картофелеводство, биотехнология, семеноводство. Известен способ микроклонального размножения безвирусного картофеля,предусматривающий размножение безвирусного картофеля путем выращивания на стерилизованной прокаливанием почвенной смеси при 10-15 клк и обеспечении водного режима поливом или подтоплением субстрата дистиллированной водой растений,полученных из меристем, затем проведение их черенкования и укоренения (см. Патент РФ 1738170, кл. А 01 Н 4/00, опубл. 07.06.1992). К недостаткам известного способа размножения картофеля для регионов с высокой инфекционной нагрузкой относится повторное заражение материала вирусными болезнями при его репродуцировании и в весенней культуре, что приводит к снижению продуктивности и ухудшению семенных качеств картофеля. Наиболее близким по технической сущности является способ оздоровления растений от вирусов метод апикальной меристемы. В стерильных условиях из зоны роста почки выделяют верхушечную меристему, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживают ее на питательную среду. Вырастает оздоровленное растение, генетически идентичное материнскому. Практически происходит вегетативное размножение, но не целыми клубнями, а небольшим количеством здоровых клеток материнского растения. Для этого используется метод микроклонального размножения растений, при котором пробирочные растения в стерильных условиях ламинар-боксов разрезают на черенки с пазушной почкой размером порядка 1 см и затем каждый черенок высаживают в отдельную пробирку с питательной средой. Через 4 недели из черенка вырастает новое растение, готовое для дальнейшего черенкования (см. Ф.Х. Измайлов, А.Н. Пикулев,журнал Защита и карантин растений 3, 2009 г.,с.19-24). К недостаткам известного способа размножения картофеля для регионов с высокой инфекционной нагрузкой относится повторное заражение материала вирусными болезнями при его репродуцировании и в весенней культуре, что приводит к снижению продуктивности и ухудшению семенных качеств картофеля. Техническим результатом изобретения является сохранение биологического потенциала сортов картофеля,повышение эффективности их оздоровления биотехнологическим методом. Указанный технический результат достигается тем, что способ предусматривает выделение в стерильных условиях верхушечной растущей зоны(апикальной меристемы) из зоны роста почки,представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживание ее на питательной среде, выращивание оздоровленного растения,генетически идентичного материнскому,микрочеренкование растений в стерильных условиях ламинар-боксов, высаживание черенков в отдельную пробирку с питательной средой 2(индолилуксусной кислоты) и кинетина (0,1),выращивание из черенка нового растения в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования. Способ осуществляется следующим образом. Выделяют в стерильных условиях верхушечную растущую зону (апикальной меристемы) из зоны роста почки, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживают ее на питательной среде, выращивают оздоровленное растение, генетически идентичное материнскому,подвергают растение микрочеренкованию, при котором пробирочные растения в стерильных условиях ламинар-боксов разрезают на черенки с пазушной почкой размером порядка 1 см и затем высаживают черенки в отдельную пробирку с питательной средой Мурасиге Скуга (МС) с содержанием аденина (0,5 мг/л) и фитогормонов ИУК (0,05 мг/л) (индолилуксусная кислоты) и кинетина (0,1), выращивают из черенка новое растение в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования. Для массового размножения оздоровленного картофеля в культуренами были апробированы несколько вариантов компонентного состава питательной среды Мурасиге Скуга (МС) на растениях генотипа картофеля Тохтар. Пример 1 Выделяли в стерильных условиях верхушечную растущую зону (апикальной меристемы) из зоны роста почки, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживали ее на питательной среде, выращивали оздоровленное растение, генетически идентичное материнскому,подвергали растение микрочеренкованию, при котором пробирочные растения в стерильных условиях ламинар-боксов разрезали на черенки с пазушной почкой размером порядка 1 см, затем высаживали черенки в отдельную пробирку с питательной средой Мурасиге Скуга (МС) с содержанием аденина (0,5 мг/л) и фитогормонов ИУК (0,05 мг/л) (индолилуксусная кислоты) и кинетина (0,1), выращивали из черенка новое растение в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования. Пример 2 Выделяли в стерильных условиях верхушечную растущую зону (апикальной меристемы) из зоны роста почки, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживали ее на питательной среде, выращивали оздоровленное растение, генетически идентичное материнскому,подвергали растение микрочеренкованию, при котором пробирочные растения в стерильных условиях ламинар-боксов разрезали на черенки с пазушной почкой размером порядка 1 см, затем высаживали черенки в отдельную пробирку с питательной средой Мурасиге Скуга (МС) с содержанием пиридоксина (0,5 мг/л), аскорбиновой кислоты (0,1 мг/л), фолиевой кислоты (0,05 мг/л),никотиновой кислоты (0,5 мг/л), гиббереловой кислоты (2,0 мг/л), ИМК (индонилмасляной(100 мг/л), выращивали из черенка новое растение в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования. Пример 3 Выделяли в стерильных условиях верхушечную растущую зону (апикальной меристемы) из зоны роста почки, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживали ее на питательной среде, выращивали оздоровленное растение, генетически идентичное материнскому,подвергали растение микрочеренкованию, при котором пробирочные растений в стерильных условиях ламинар-боксов разрезали на черенки с пазушной почкой размером порядка 1 см, затем высаживали черенки в отдельную пробирку с питательной средой Мурасиге Скуга (МС) с содержанием пиридоксина (0,5 мг/л), аскорбиновой кислоты (0,1 мг/л), фолиевой кислоты (0,05 мг/л),никотиновой кислоты (0,5 мг/л), гиббереловой кислоты (2,0 мг/л), ИМК (индонилмасляной кислоты) (0,5 мг/л), кинетина (1,0 мг/л), ИУК(индолилуксусной кислоты) (0,5 мг/л), выращивали из черенка новое растение в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования. Пример 4 Выделяли в стерильных условиях верхушечную растущую зону (апикальной меристемы) из зоны роста почки, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживали ее на питательной среде, выращивали оздоровленное растение, генетически идентичное материнскому,подвергали растение микрочеренкованию, при котором пробирочные растения в стерильных условиях ламинар-боксов разрезали на черенки с пазушной почкой размером порядка 1 см, затем высаживали черенки в отдельную пробирку с питательной средой Мурасиге Скуга (МС) с содержанием пиридоксина (0,5 мг/л), аскорбиновой кислоты (0,1 мг/л), гиббереловой кислоты (2,0 мг/л),кинетина (1,0 мг/л), мезоинозита (100 мг/л),феруловой кислоты (0,02 мг/л), аденин (1 мг/л),выращивали из черенка новое растение в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования. Пример 5 Показатели Среднее кол-во междоузлий,шт. Средняя величина междоузлий, мм Средний размер листа, мм Корневая система 1-мощная 2-средняя 3-отсуствует Общий выход растений,Выделяли в стерильных условиях верхушечную растущую зону (апикальной меристемы) из зоны роста почки, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживали ее на питательной среде, выращивали оздоровленное растение, генетически идентичное материнскому,подвергали растение микрочеренкованию, при котором пробирочные растения в стерильных условиях ламинар-боксов разрезали на черенки с пазушной почкой размером порядка 1 см, затем высаживали черенки в отдельную пробирку с питательной средой Мурасиге Скуга (МС) с содержанием пиридоксина (0,5 мг/л), аскорбиновой кислоты (0,1 мг/л), гиббереловой кислоты (2,0 мг/л),феруловой кислоты (0,02 мг/л), 2,4-Д (2,4 дихлорфенолуксусная кислота)(0,01 мг/л),выращивали из черенка новое растение в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования. Пример 6 Выделяли в стерильных условиях верхушечную растущую зону (апикальной меристемы) из зоны роста почки, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживали ее на питательной среде, выращивали оздоровленное растение, генетически идентичное материнскому,подвергали растение микрочеренкованию, при котором пробирочные растения в стерильных условиях ламинар-боксов разрезали на черенки с пазушной почкой размером порядка 1 см, затем высаживали черенки в отдельную пробирку с питательной средой Мурасиге Скуга (МС) с содержанием пиридоксина (0,5 мг/л), аскорбиновой кислоты (0,1 мг/л), гиббереловой кислоты (2,0 мг/л),феруловой кислоты (0,02 мг/л), аденин (1 мг/л),зеатин (0,3 мг/л), 2,4-Д (2,4-дихлорфенолуксусная кислота) (0,01 мг/л), ИУК (индолилуксусная кислота) (0,3 мг/л), 6-БАП (6- бензиламинопурин)(1,0 мг/л), выращивали из черенка новое растение в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования. Сравнительная характеристика способов ускоренного размножения семенного картофеля с различными вариантами компонентного состава питательной среды Мурасиге-Скуга на формирование пробирочных растений приведена в табл. 1. Таблица 1 Способы ускоренного размножения семенного картофеля 2 3 4 6 3 3 5 5 Из табл. 1 видно, что для культивирования апикальной меристемы отобранных растений оптимальной является питательная среда МС с добавлением аденина 0,5 мг/л и фитогормонов кинетина в концентрации 0,1 и ИУК в концентрации 0,05 для инициации роста безвирусных побегов, где отмечен выход побегов 95-100. Использование изобретения позволит предотвратить заражение картофеля вирусными болезнями при его репродуцировании, повысить продуктивности и улучшить семенные качества картофеля. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Биотехнологический способ размножения семенного предусматривающий выделение в стерильных условиях верхушечной растущей зоны (апикальной меристемы) из зоны роста почки, представляющую собой культуру активно делящихся клеток и высаживание ее на питательной среде, выращивание оздоровленного растения, генетически идентичного материнскому, микрочеренкование растений в стерильных условиях ламинар-боксов, высаживание черенков в отдельную пробирку с питательной средой, выращивание из черенка нового растения в течение 4 недель готового для дальнейшего черенкования, отличающийся тем, что в качестве питательной среды используют среду Мурасиге Скуга (МС) с содержанием аденина - 0,5 мг/л и фитогормонов индолилуксусной кислоты (ИУК) 0,05 мг/л и кинетина - 0,1.