Способ выращивания стевии (Stevia rebaudiana Bertoni)

(51) 01 4/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ средой и доращивание в условиях 16-часового фотопериода, для чего семена предварительно стерилизуют, промывают мыльным раствором в течение 20 минут, затем в проточной воде в течение 5-10 минут, проводят стерилизацию в слабом растворе перманганата калия в течение 15 минут с последующим 3-4 разовым промыванием в стерильной воде, после чего стерилизуют 2,6-ным раствором натрий гипохлорида с добавлением 1-2 капель Твин-20 в течение 15 минут с последующим 3-4 разовым промыванием в стерильной воде, после чего семена проращивают, для чего в качестве питательной среды используют безгормональную среду 1/10 Мурасиге-Скуга с добавлением витаминов по Уайту, сахарозы, мезоинозита и агарозы присреды 5,8, объемом 10 мл в пробирках диаметром 21 мм, при температуре 252 С в темноте, а на доращивание с 16 часовым фотопериодом переводят через 7 дней в факторостатную камеру, при температуре 252 С,относительной влажности воздуха 55-60 , затем через 3-4 недели в стерильных условиях стебли полученных растений - регенерантов расчленяют на кусочки размером 1,0-1,5 см с апикальными и с пазушными почками, микрочеренки базальной частью вертикально размещают в агаризованную среду на глубину 0,5 см и культивирование осуществляют на агаризованной безгормональной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащий половинный набор солей для пролиферации побегов, далее укоренение микрочеренков ведут также в среде 1/2 Мурасиге-Скуга с добавлением 0,1 мг/л- нафтил уксусной кислоты.(72) Асрандина Салтанат Шынтаевна Кенжебаева Шакизада Витавская Анастасия Васильевна Саякова Бакыт Муратбековна Сарсенбаев Батырбек Атабаева Сауле Джумагалиевна Кенжебаева Сауле Сагындыковна(73) Дочернее государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем экологии Республиканского государственного предприятия на праве хозяйственного ведения Казахский национальный университет им. аль-Фараби Министерства образования и науки Республики Казахстан(57) Изобретение относится к растениеводству, в частности к способам выращивания растения стевия, содержащей стевиозид перспективный заменитель сахара, который слаще сахара в 300- 400 раз. Техническим результатом изобретения является повышение коэффициента размножения стевии источника природного заменителя сахара для реализации в производственной сфере Республики Казахстан. Это достигается тем, что в заявляемом способе выращивания стевии ,полученного в культуре, заключающемся в высаживании черенков в емкость с питательной Изобретение относится к растениеводству, в частности к способам выращивания растения стевия, содержащей стевиозид перспективный заменитель сахара, который слаще сахара в 300-400 раз. Во многих странах мира проводятся исследования по выявлению природных источников заменителей сахара растительного происхождения. Дитерпеновый гликозид - стевиозид, который накапливается в листьях стевии (), относится именно к таким весьма перспективным природным заменителям сахара. Для Казахстана стевия является новой культурой. Половое размножение стевии затруднено из-за плохой завязываемости и низкой жизнеспособности семян в данных экологических условиях. Известен способ выращивания стевии,включающий высадку черенков с корнями в субстрат, пинцеровку растения, выращивание при 20-24 С и повышенной влажности воздуха. В качестве субстрата используют смесь низового торфа и речного песка в объемном соотношении,21,пинцеровку растения проводят для формирования прямостоячего компактного куста систематическим удалением молодого травянистого прироста главных и боковых побегов каждые 10 - 12 дней, подкормку растений проводят через полторадва месяца водным раствором сложно-смешанного удобрения с содержанием 10, Р 10, К 10 и микроэлементов бора, цинка, марганца, молибдена и меди из расчета 500 мл на растение в концентрации 20 г удобрения на 10 л и создают освещенность 12 17 клк при относительной влажности воздуха 7585.(Патент РФ 2077834, МПК 01 1/00, опубл. 27.04.1997 г.) Недостатком данного способа является низкий коэффициент размножения стевии, полученной этим способом, низкий уровень приживаемости такой рассады, невысокое качество рассады. Известен способ получения рассады стевии,включающий подготовку зеленых черенков, при этом зеленый черенок берут свежесрезанный с двумя парами листьев и помещают в индивидуальный вегетационный контейнер с почвенным субстратом с возможностью создания условия влажной камеры путем изоляции отдельно каждого зеленого черенка, причем влажность почвенного субстрата составляет 75-80,среднесуточная температура воздуха - 20-23 С,относительная влажность воздуха 65-70, а срок получения рассады в течение 24-25 дней.(Патент РФ 2454065, МПК 01 1/00, опубл. 27.06.2012 г.) Недостатком данного способа является низкий коэффициент размножения стевии, полученной этим способом, низкий уровень приживаемости такой рассады, невысокое качество рассады. Наиболее близким является способ доращивания растений стевии ,полученных в культуре, заключающийся в том, что растения сажают в питательную среду 2 субстрат, обильно поливают, накрывают прозрачной пленкой и адаптируют к условиям окружающей среды. Растения высаживают размером 5-6 см, в качестве субстрата используют почву и песок в равном соотношении, который помещают в емкость со слоем гравия на дне толщиной 2-3 см, через 10-12 дней после посадки растения декапитируют и доращивают до стандарта в условиях 16-часового фотопериода при температуре 21 - 23 С, влажности 70 и освещенности 15-17 клк.(Патент РФ 2076481, МПК А 01 Н 4/00, опубл. 27.03.1997 г.) Недостатком данного способа является низкий коэффициент размножения стевии, полученной этим способом, низкий уровень приживаемости такой рассады, невысокое качество рассады. Задачей изобретения является создание эффективного способа выращивания стевии,позволяющего получать в больших объемах полноценную, хорошо развитую рассаду стевии высокой приживаемости и адаптированную к экологическим условиям Южного Казахстана. Техническим результатом изобретения является повышение коэффициента размножения стевии источника природного заменителя сахара для реализации в производственной сфере Республики Казахстан. Это достигается тем, что в заявляемом способе выращивания стевии, полученного в культуре, заключающемся в высаживании черенков в емкость с питательной средой и доращивание в условиях 16-часового фотопериода, для чего семена предварительно стерилизуют, промывают мыльным раствором в течение 20 минут, затем в проточной воде в течение 5-10 минут, проводят стерилизацию в слабом растворе перманганата калия в течение 15 минут с последующим 3-4 разовым промыванием в стерильной воде, после чего стерилизуют 2,6 -ным раствором натрий гипохлорида с добавлением 1-2 капель Твин-20 в течение 15 минут с последующим 3-4 разовым промыванием в стерильной воде, после чего семена проращивают, для чего в качестве питательной среды используют безгормональную среду 1/10 Мурасиге-Скуга с добавлением витаминов по Уайту, сахарозы, мезоинозита и агарозы присреды 5,8, объемом 10 мл в пробирках диаметром 21 мм, при температуре 252 С в темноте, а на доращивание с 16 часовым фотопериодом переводят через 7 дней в факторостатную камеру, при температуре 252 С,относительной влажности воздуха 55-60, затем через 3 - 4 недели в стерильных условиях стебли полученных растений - регенерантов расчленяют на кусочки размером 1,0-1,5 см с апикальными и с пазушными почками, микрочеренки базальной частью вертикально размещают в агаризованную среду на глубину 0,5 см и культивирование осуществляют на агаризованной безгормональной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащий половинный набор солей для пролиферации побегов, далее укоренение микрочеренков ведут также в среде 1/2 Мурасиге-Скуга с добавлением 0,1 мг/л- нафтил уксусной кислоты. Способ осуществляется следующим образом. Стерилизуют семена Семена предварительно промывают мыльным раствором - 20 минут, с последующим промыванием в проточной воде 5-10 минут, затем стерилизуют в слабом растворе калия перманганата 15 минут с последующим 3-4-разовым промыванием в стерильной воде, затем снова стерилизуют семяна применяя 2,6-ный раствор натрий гипохлорида с добавлением 1-2 капли Твин 20 в течение 15 минут с последующим 3-4- разовым промыванием в стерильной воде. Последний этап стерилизации проводят в стерильных условиях (в ламинарном боксе). Проращивание семян в культурепроводят на безгормональной среде 1/10 МурасигеСкуга, дополненной витаминами по Уайту,сахарозой (3), мезоинозитом (100 мг/л), агарозой(0,8 ). Уровеньсреды составляет - 5,8. Проращивание проводят в пробирках диаметром 21 мм с объемом питательной среды 10 мл при температуре 252 С в темноте через неделю пробирки с проростками переводят в факторостатную камеру с 16 часовым фотопериодом,при температуре 252 С,относительной влажности воздуха 55- 60. Через 34 недели получают растения - регенеранты(1015 см) с хорошо развитой корневой системой. Для повышения коэффициента размножения стевии в стерильных условиях стебли регенерантов расчленяют на кусочки размером 1,0-1,5 см с апикальными и с пазушными почками. Микрочеренки базальной частью вертикально размещают в агаризованную среду на глубину 0,5 см. Культивирование осуществляют на агаризованной безгормональной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащий половинный набор солей для пролиферации побегов. Для укоренения микрочеренков используют среду 1/2 МурасигеСкуга с добавлением 0,1 мг/л- нафтил уксусной кислоты. Пример 1. Объектами исследования являлись семена стевии , которые были собраны из растения, выращенные в условиях Южного Казахстана (в агробиологической станции КазНУ), а так же семена стевии привезенные из России с плазменной обработкой (ООО Агроника) и без обработки (ООО Семена НК). Стерилизовали семена. Семена предварительно промывали мыльным раствором - 20 минут, с последующим промыванием в проточной воде 10 минут, затем стерилизовали в слабом растворе калия перманганата 15 минут с последующим 3-разовым промыванием в стерильной воде, затем снова стерилизовали семяна применяя 2,6 -ный раствор натрий гипохлорида с добавлением 2 капли Твин-20 в течение 15 минут с последующим 4-разовым промыванием в стерильной воде. Последний этап стерилизации проводили в стерильных условиях (в ламинарном боксе). Проращивание семян в культурепроводили на безгормональной среде 1/10 Мурасиге-Скуга, дополненной витаминами по Уайту, сахарозой (3), мезоинозитом (100 мг/л),агарозой (0,8). Уровеньсреды составлял - 5,8. Проращивание проводят в пробирках диаметром 21 мм с объемом питательной среды 10 мл при температуре 252 С в темноте, через неделю пробирки с проростками переводили в факторостатную камеру с 16 часовым фотопериодом,при температуре 252 С,относительной влажности воздуха 55- 60. Через 34 недели получили растения - регенераты (10-15 см) с хорошо развитой корневой системой. Для повышения коэффициента размножения стевии в стерильных условиях стебли регенерантов расчленяли на кусочки размером 1,0-1,5 см с апикальными и с пазушными почками. Микрочеренки базальной частью вертикально размещали в агаризованную среду на глубину 0,5 см. Культивирование осуществляли на агаризованной безгормональной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащий половинный набор солей для пролиферации побегов. Для укоренения микрочеренков использовали среду 1/2 Мурасиге Скуга с добавлением 0,1 мг/л- нафтил уксусной кислоты. Сравнительная характеристика способов размножения стевии приведена в таб.1. Таблица 1 Наименование показателей Прорастание семян на 5-е сутки,Использование изобретения позволит в культуре растенияиз 150 семян (с последующим клонированием) можно получить более 1000 растения с хорошо развитыми корневыми системами. В дальнейшем эти растения регенеранты будут использоваться для адаптации и акклиматизации в открытый грунт. Таким образом, для размножения стевии вможно использовать семена собраные из растений адаптированных к экологическим условиям Южного Казахстана. Это решит ряд проблем которые затрудняют процесс размножения Способ выращивания стевии известный предлагаемый 150,3 68 0,9 стевии семенами в открытом грунте. Так как половое размножение стевии затруднено из-за плохой завязываемости и низкой жизнеспособности семян в наших экологических условиях. С экономической точки зрения использования семян местного происхождения будет более эффективным и надежными, тем более не все семена дают 100 всхожесть. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ выращивания стевии (), полученной в культуре,заключающийся в высаживании черенков в емкость с питательной средой и доращивание в условиях 16 часового фотопериода, отличающийся тем, что семена предварительно стерилизуют, промывают мыльным раствором в течение 20 минут, затем в проточной воде в течение 5-10 минут, проводят стерилизацию в слабом растворе перманганата калия в течение 15 минут с последующим 3-4 разовым промыванием в стерильной воде, после чего стерилизуют 2,6-ным раствором натрий гипохлорида с добавлением 1-2 капель Твин-20 в течение 15 минут с последующим 3-4 разовым промыванием в стерильной воде, после чего семена проращивают, для чего в качестве питательной среды используют безгормональную среду 1/10 Мурасиге-Скуга с добавлением витаминов по Уайту, сахарозы, мезоинозита и агарозы при рН среды 5,8, объемом 10 мл в пробирках диаметром 21 мм, при температуре 252 С в темноте, а на доращивание с 16-часовым фотопериодом переводят через 7 дней в факторостатную камеру, при температуре 252 С, относительной влажности воздуха 55-60, затем через 3-4 недели в стерильных условиях стебли полученных растений регенерантов расчленяют на кусочки размером 1,01,5 см с апикальными и с пазушными почками,микрочеренки базальной частью вертикально размещают в агаризованную среду на глубину 0,5 см и культивирование осуществляют на агаризованной безгормональной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащий половинный набор солей для пролиферации побегов, далее укоренение микрочеренков ведут также в среде 1/2 МурасигеСкуга с добавлением 0,1 мг/л- нафтил уксусной кислоты.