Способ диагностики бактериальных болезней растений

(51) 01 63/00 (2010.01) 01 1/00 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ выявления карантинных бактериальных болезней, а также диагностики декоративных и лесных культур. Задачей изобретения является разработать способ быстрой и упрощенной диагностики бактериальных болезней растений, приемлемой в производственных условиях для своевременного применения целенаправленных защитных мероприятий. Предлагаемое изобретение позволит быстро,простым способом провести диагностику бактериальных болезней растений в производственных условиях. Это позволит своевременно и целенаправленно провести защитные мероприятия и предотвратить потери от бактериозов. Способ может быть использован и в карантине растений для быстрого выявления карантинных бактериальных болезней, а также диагностики декоративных и лесных культур на пораженность бактериозами.(72) Джаймурзина Алия Абдрахимовна Сагитов Абай Оразович Амирханова Нургуль Темиржановна Есжанов Тынышбек Карлыбаевич Копжасаров Бакыт Кенжекожаевич(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский институт защиты и карантина растений(56) Чумаевская М.А., Матвеева Е.В. Методические указания по изоляции и идентификации фитопатогенных бактерий. М. ВАСХНИЛ, 1980,с.5-10(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ РАСТЕНИЙ(57) Изобретение относится к области сельскохозяйственного производства, а именно к защите растений от бактериальных болезней и может быть использовано в карантине растений для Изобретение относится к области сельскохозяйственного производства, а именно к защите растений от бактериальных болезней и может быть использовано в карантине растений для выявления карантинных бактериальных болезней, а также диагностики декоративных и лесных культур. Известен способ визуальной диагностики бактериальных болезней по симптомам их проявления на различных органах растений в виде пятнистостей, увядания, деформации органов,опухолей, гнилей (Матвеева Е.В и др. Диагностика бактериальных болезней овощных культур и меры борьбы с ними. М. ВАСХНИЛ, 1980, с.25). Недостатком известного способа является то, что аналогичные симптомы могут вызывать и другие микроорганизмы грибы, вирусы, микоплазмы, а также абиотические факторы - недостаток влаги или переувлажнение, резкие перепады температур,токсические вещества, нарушение режима питания(избыток или недостаток микро и макроудобрений). Выявить и установить бактериальные болезни на основании симптом не всегда возможно. Для проведения целенаправленных защитных мероприятий необходима точная диагностика. Известен способ диагностики бактериальных болезней путем микроскопирования (Методы диагностики бактериозов справочная книга Бактериозы культурных растений перевод с немецкого К.В. Попкова, М. Колос. 1980, с 62-63). Для этого готовят микроскопические препараты из пораженных органов растений на пограничных участках между больной и здоровой тканью. Препараты просматривают под микроскопом. Если на срезах тканей видны скопления бактериальных клеток, то можно распознать бактериальную природу заболевания. Недостатком известного способа является то, что в местах повреждения органов растений могут быть заселены сапрофитной и эпифитной микрофлорой,которые не являются фитопатогенными бактериями. Известен способ диагностики бактериальных болезней, который основан на специфической реакции антиген-антитело. Антиген это исследуемая фитопатогенная бактерия, антитело это сыворотка, которую готовят соответствующие учреждения или лаборатории(Методы определения болезней и вредителей сельскохозяйственных культур М. Агропромиздат.,1987. с 70-71). Недостатком данного способа диагностики является необходимость изолировать из пораженных органов путем бактериологических анализов чистую культуру фитопатогенной бактерии и всегда иметь соответствующую дорогостоящую сыворотку. Однако не ко всем фитопатогенным бактериям в настоящее время имеются сыворотки. Известен способ диагностики бактериальных болезней с помощью электронной микроскопии. Для этого используют электронный микроскоп марки ЭВМ-100 М. При этом можно диагностировать бактерии, их форму, размеры и характер жгутикования. На основании морфологических 2 признаков определяют их родовую принадлежность(А.М. Лазерев Диагностика бактериозов сахарной свеклы и меры борьбы с ними, Санкт-Петербург,2008 г, с. 54-55). Недостатком данного способа является необходимость изолировать из пораженных органов чистую культуру фитопатогенной бактерии путем бактериологических анализов. Кроме того нужен дорогостоящий электронный микроскоп и обслуживающий его персонал. Известен способ диагностики бактериальных болезней путем изолирования из пораженных органов растений чистой культуры фитопатогенной бактерии путем бактериологических анализов и проверки ее патогенности на индикаторном растении пеларгонии (комнатной герани). (Чумаевская М.А, Матвеева Е.В Методические указания по изоляции и идентификации фитопатогенных бактерий М. ВАСХНИЛ, 1980, с 5-10). В результате иньекцирования листьев герани фитопатогенной бактерий через 1-2 суток проявляется реакция сверх чувствительности в виде образования некротических пятен в местах введения инокулюма. Непатогенные (сапрофитные) бактерии подобных симптом не вызывают Недостатком данного способа является необходимость изолирования из пораженных органов фитопатогенных бактерий в чистые культуры. Для таких бактериологических анализов требуется специальная подготовка (специалист бактериолог). Бактериологический анализ очень трудоемкий и длительный процесс, требует строгих асептических условий. Длительность процесса заключается в подготовке и стерилизации посуды, инструментов для анализов, подготовка питательных сред и воды,их стерилизация в автоклаве проведение самих анализов в специальном помещении- боксе,длительное культивирование тест объектов (5 суток) на питательных средах в термостате затем изоляция типичных для фитопатогенов бактерий на косой агар, подготовка 1-2 суточной культуры инокулюма для проверки патогенности на индикаторном растении пеларгонии(комнатной герани). Длительность анализов может составить 12-15 дней. При этом при проверке патогенности на индикаторном растении может оказаться, что изолированная бактерия не является фитопатогенной. Задачей изобретения является разработать способ быстрой и упрощенной диагностики бактериальных болезней растений, приемлемой в производственных условиях для своевременного применения целенаправленных защитных мероприятий. Технический результат - в разработанном способе диагностики бактериальных болезней растений путем инъекцирования листьев индикаторного растения - комнатной герани, в качестве инокулюма используются вытяжки из пораженных органов растений. Способ осуществляется следующим образом. Кусочек листа капусты (3 см 2) на границе здоровой и пораженной слизистым бактериозом ткани кусочек стебля капусты (5 см), пораженного сосудистым бактериозом листья томата (2 листа),пораженных бактериальной пятнистостью,растирали (каждый в отдельности) в фарфоровой ступке с небольшим количеством воды (11). Полученные вытяжки из пораженных бактериозом органов растений вводили медицинским шприцом в межклеточные пространство (под эпидермис) с нижней стороны листа индикаторного растения пеларгония (комнатная герань). Через 1-2 суток на листьях, в местах введения инокулюма образовались некротические пятна (в виде пергамента). Это реакция сверхчувствительности индикаторного растения на патогенные виды бактерий. Непатогенные бактерии не вызывают такую реакцию (некроз), даже при введении высоких концентраций. Таким образом, для диагностики бактериальных болезней достаточно 1-2 суток. В эталоне (прототип) образцы тщательно промывали в течение 5 минут под струей водопроводной воды, затем трижды в стерильной воде в стерильных бюксах и растирали в стерильных фарфоровых ступках с небольшим количеством стерильной воды, делали серию разведений в пробирках со стерильной водой 110 1100 11000. Затем стерильными пипетками помещали 1 -2 капли из каждого разведения в чашки Петри с предварительно разлитой питательной средой картофельно-глюкозный агар (КГА) и тщательно растирали стерильными шпателями Дригальского. Для получения редкого посева тем же шпателем проводим по поверхности второй и третьей чашки. Для каждого образца использовали по 9 чашек Петри с питательной средой. Затем их помещали в термостат и культивировали в течение 5 суток, при этом следили за ростом колоний бактерий и после этого по форме, цвету, размеру и структуре характерных для фитопатогенов бактерии отсевали на косой агар с питательной средой. Для проверки патогенности из изолированных бактерий готовили 2-х суточную культуру путем пересева на другие косячки, из которых готовили концентрацию инокулюма 108. Приготовленный инокулюм вводили медицинским шприцом в листья герани аналогично опытному варианту. Через сутки в местах инъекции суспензии бактерий образовались аналогичные опытному варианту некротические пятна. Это реакция сверхчувствительности индикаторного растения к фитопатогенным бактериям. При этом при проверке патогенности на индикаторном растении, может оказаться, что изолированные бактерии не являются фитопатогенными. Таким образом, в обоих случаях диагностики, в варианте с вытяжкой из больных образцов растении и в прототипе с чистыми культурами фитопатогенных бактерии из родов , и , на листьях индикаторного растения комнатной герани через сутки образовывались некротические пятна, в виде пергамента (реакция сверхчувствительности), что свидетельствует о поражении бактериальными болезнями (рисунок). Использование предлагаемого изобретения позволит провести быструю диагностику бактериальных болезней в производственных условиях,своевременно провести целенаправленные защитные мероприятия и предотвратить потери урожая от бактериозов. Предлагаемый способ имеет ряд преимуществ перед известными способами 1. Простота диагностики 2. Быстрота и точность диагностики бактериальных болезней растений. 3. Снимает необходимость проведения трудоемких и длительных бактериологических анализов. 4. Культивирование индикаторного растения в комнатных условиях круглый год. 5. Своевременное проведение целенаправленных защитных мероприятий против бактериальных болезней. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики бактериальных болезней растений, включающий определение патогенности путем реакции сверхчувствительности на индикаторном растении пеларгония (комнатная герань), отличающийся тем, что в качестве инокулята используют вытяжку из пораженных органов растений.