Способ получения поливалентной гипериммунной сыворотки против пастереллеза и рожи свиней

(51) 61 39/102 (2010.01) 61 39/116 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ рожи свиней включает приготовление поливалентного антигена из производственных штаммов 26,90,34 и антигена из штамма 2, затем осуществляют грундиммунизацию и гипериммунизацию поливалентным и рожистым антигенами раздельно в разные участки тела,причем грундиммунизацию осуществляют двукратно с интервалом 5 суток,а гипериммунизацию 8 - кратными внутримышечными инъекциями с интервалом 3 суток, при сокращении общего объема вводимого антигена в 90 раз меньше в сравнении с существующими схемами гипериммунизации. Предложенный способ позволяет получить высокоэффективную лечебную сыворотку,усовершенствовать схему гипериммунизации,уменьшить объем вводимого антигена, удешевить технологию производства, снизить трудозатраты.(73) Республиканское государственное казенное предприятие Костанайский государственный университет им. А.Байтурсынова Министерства образования и науки Республики Казахстан(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ ГИПЕРИММУННОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА И РОЖИ СВИНЕЙ(57) Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности, к получению лечебнопрофилактических препаратов, и можеть быть использовано для профилактики и лечения пастереллеза и рожи свиней. Способ получения гипериммунной поливалентной сыворотки против пастереллеза и 25461 Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности, к получению лечебнопрофилактических препаратов, и может быть использовано для профилактики и лечения пастереллеза и рожи свиней. Пастереллезы - остро и хронически протекающие инфекционные болезни сельскохозяйственных животных и птиц, которые широко распространены во многих регионах нашей страны и за рубежом. Наиболее широко распространено носительство среди крупного рогатого скота (10), буйволов(6), домашних птиц (5,1) овец (3) и коз (2,9). Для пастереллезов характерна стационарность. Среди лошадей, крупного рогатого скота, овец и свиней к заболеванию восприимчивы животные всех возрастов, среди птиц - молодняк кур, уток,гусей - до 2-месячного возраста. Вспышки болезни могут возникать в любое время года. Пастереллезы сопровождаются высокой летальностью (50-100). Экономический ущерб от пастереллезов особенно велик при остром течении болезни, складывающийся от падежа животных,вынужденного убоя, затрат на лечение и профилактику. Рожа свиней - инфекционная болезнь,поражающая свилей преимущественно в возрасте от 3 до 12 месяцев, протекающая остро, с явлениями септицемии и хронически - с симптомами веррукозного эндокардита,серофибринозного полиартрита или некрозов кожи. Особенностью рожи является ее стационарность, проявляющаяся повторными вспышками через неопределенные промежутки времени. До настоящего времени нет эффективного способа серопрофилактики пастереллеза животных. Известна сыворотка против геморрагической септицемии пастереллеза сельскохозяйственных животных (Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты. М. Издательство сельхозлитературы, 1963, с.255-262), в состав которой входят следующие штаммы(крупный рогатый скот),(овцы),(свиньи). Известна также сыворотка против рожи свиней(Биологические и химиотерапевтические ветеринарные препараты. М. Издательство сельхозлитературы, 1963, с.255-262), в состав которой входят культуры рожи свиней, относящихся к серологическим типам А и В. Грундиммунизация при получении вышеуказанных сывороток включает введение животным смеси 12 культур пастерелл (по 4 штамма . , .,. ) и 10 культур рожи свиней (по 5 штаммов серотипов А и В) в дозе 10 мл, четырежды,с интервалом 5 суток. Гипериммунизация включает введение животным - продуцентам полиантигена в возрастающих дозах - от 80 до 150 мл с интервалом 5 суток, до 20-25 инъекций. В общей сложности за весь период гипериммунизация животных продуцентов вводят до 4-5 литров полиантигена. Взятие крови от животных-продуцентов осуществляют в количестве 0,8 л на 100 кг массы 2 животного. После каждого крововзятия проводят двукратную инъекцию полиантигена в дозе 150 мл с интервалом 5 суток. Очередное взятие крови проводят на 8 сутки после последнего введения антигена с последующим выделением целевого продукта. Известные сыворотки имеют следующие недостатки- не обладают достаточной эффективностью, так как не учитывается вирулентность и токсичность штаммов пастерелл и рожи, что является важным критерием- для изготовления сыворотки используется большое количество штаммов (12 культур пастерелл, 10 культур рожи)- метод получения гипериммунных сывороток весьма трудоемкий, необходимо произвести 20 - 25 иньекций поливалентных антигенов в течение 120 145 суток. При этом каждому животному продуценту вводится 4000 -5000 мл полиантигена.- введение сыворотки в предложенных дозах вызывает у животных-продуцентов явление анафилаксии Задачей изобретения является разработка способа получения высокоэффективной лечебной сыворотки одновременно против пастереллеза и рожи свиней, позволяющей усовершенствовать схемы гипериммунизации, уменьшить обьем вводимого антигена, удешевление технологии производства сыворотки, снижения трудозатрат и не вызывающей побочных явлений при введении животным. Способ получения гипериммунной сыворотки против пастереллеза и рожи свиней включает приготовление смеси поливалентного антигена из инактивированных концентрированных культур 26,90,34 и антигена из штамма-2,затем осуществляют грундиммунизацию и гипериммунизацию поливалентным и рожистым антигенами раздельно в разные участки тела, причем грундиммунизацию осуществляют двукратно с интервалом 5 суток, а гипериммунизацию 8 кратными внутримышечными инъекциями с интервалом 3 суток, последующим взятием крови. Штаммы 90,26,34 и 46 депонированы в НИСХИ штамм-2 в ВГНКИ. Пример 1. Гипериммунную поливалентную сыворотку против пастереллеза и рожи свиней изготавливают следующим образом. Гипериммунизация животных проводится по следующей схеме 1 цикл создание грундиммунитета(предварительное грундирование животных соответствующими антигенами) 2 цикл подготовительный период гипериммунизации 3 цикл производственный период гипериммунизации. 1 цикл - создание грундиммунитета. 25461 Для иммунизации используют клинически здоровых волов в возрасте 3-4 лет, весом 350-400 кг. Лошади менее пригодны вследствие повышенной чувствительности к пастереллезному антигену. Отобранных животных исследуют на инфекционные заболевания в соответствии с действующей инструкцией о порядке заготовки и санитарной обработки животных,используемых для производства биопрепаратов. Пастереллезные культуры выращивают на бульоне Хоттингера. Каждый штамм засевают отдельно и выращивают в термостате при температуре 37 в течение 24 часов. После проверки на чистоту роста культуры смешивают в равных объемах, инактивируют 0,5 формалином и на 7 сутки добавляют 0,1 гидрат окиси алюминия и используют для гипериммунизации животных, как поливалентный антиген. Второй антиген - живая культура вакцинного штамма ВР-2. С целью перестройки организма (создание грундиммунитета), направленной на повышение его специфической реактивности, животныепродуценты подвергаются иммунизации приготовленным поливалентным антигеном (смесь 4-х культур пастерелл) и вакцинным штаммом ВР-2 дважды в дозах 2 и 5 мл (в 1 мл взвеси - 109 м.к.) внутримышечно в разные участки тела. Интервал между инъекциями 5 суток. 2 цикл подготовительный период гипериммунизации. Через 14 суток после повторного грундирования проводят гипериммунизацию животных поливалентным антигеном и рожистым антигеном путем 8-кратных внутримышечных инъекций в возрастающих дозах по схеме 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 мл (в 1 мл взвеси - 109 м.к.), интервал между инъекциями 3 суток. При данной схеме подготовительный срок гипериммунизации животных-продуцентов сокращается в сравнении с существующими схемами гипериммунизации с 90 суток до 24 дней (в 3,3 раза) и объем вводимого антигена в 90 раз меньше. На 30 сутки с момента введения антигенов проводят пробные крововзятия из яремной вены. Полученную кровь от каждого продуцента посредством серологических реакций исследуют на динамику накопления пастереллезных и рожистых антител. Производственные крововзятия осуществляют при наличии в сыворотке крови антител к пастереллезным и рожистым антигенам не ниже 1800 - 11200 в реакции агглютинации. 3 цикл производственный период гипериммунизации. Первое взятие крововзятие от животныхпродуцентов по объему не превышает 0,7 л на 100 кг массы животного, последующее 1,2-1,5 л на 100 кг массы. Кровь от продуцентов берут при нормальной температуре. Перед взятием кров животных выдерживают на голодной диете в течение 12 часов при неограниченном водопое. Через 2 суток после каждого крововзятия проводят иммунизации антигенами в дозе 5 мл (5 х 109 м.к.) внутримышечно. Очередное крововзятие проводят на 7-8 сутки после введения антигена. Для предохранения крови от свертывания в стерильные бутыли при взятии крови в качестве антикоагулянта вводят 10 раствор лимоннокислого натрия из расчета 34 мл на 1 л крови,который смешивают с кровью плавными круговыми движениями. Форменные элементы крови отделяют сепарированием в течение 10-15 минут с последующим дефибринированием плазмы с добавлением 30 раствора хлористого кальция из расчета 1 мл на 1 л, сыворотку консервируют 5 раствором химически чистого фенола до конечной концентрации 0,5 и перекачивают в стерильный отстойник, где ее выдерживают в течение 2 месяцев при 4 - 10. Пример 2. Контроль сыворотки. Каждую серию сыворотки проверяют на стерильность, безвредность. Для проверки сыворотки на стерильность производят высевы на питательные среды (МПБ,МПА и МППБ). Посевы сыворотки, выдерживают в термостате при 37 С в течение 10 суток. Высевы должны быть стерильными. Безвредность сыворотки проверяют путем подкожного введения сыворотки в дозе 0,5 мл 5(пяти) белым мышам массой 14-16 г и в дозе 5 мл - 5(пяти) морским свинкам. Сыворотка считается безвредной, если она не вызывает общей и местной реакции у привитых мышей и морских свинок. Животные должны оставаться живыми в течение 10 суток. Пример 3. Проверка сыворотки на активность. Определение профилактической эффективности гипериммунной сыворотки проводят на кроликах весом не менее 1,5 кг. Всего 25 кроликов на одну серию сыворотки. Сыворотку вводят всем кроликам подкожно в дозе 2 мл (2109 м.к). Через 24 часа всем кроликам, привитым сывороткой, и контрольным(по 3 головы на штамм) инъецируют подкожно заранее подтитрованные вирулентные культуры пастерелл и рожи. Сыворотка считается активной,если остаются живыми не менее 4 (четырех) из 5(пяти) привитых каждым из указанных штаммов,при падеже всех контрольных. Наблюдение за привитыми животными ведется в течение 10 суток после гибели контрольных. При бактериологическом исследовании патологического материала от павших контрольных кроликов после инфицирования выделяют и идентифицируют исходные возбудители. Пример 4. Для определения лечебной эффективности гипериммунной сыворотки 25 кроликов заражают вирулентными культурами пастерелл и рожи (по 5 голов на каждый штамм) в дозе 2 мл (109 м.к.), подкожно. Через 24 часа опытным животным вводят испытуемую сыворотку двукратно по 10 мл (интервал 24 часа). 95 кроликов выздоравливают после повторного введения сыворотки на 3-5 сутки со дня начала 25461 лечения. У кроликов контрольной грунты болезнь прогрессирует и наступает гибель на 2-3 сутки. Экспериментальные исследования показывают,что гипериммунная сыворотка,полученная предложенным способом, является безвредным,стерильным и ареактивным препаратом,обладающим выраженным лечебным и профилактическим действием при пастереллезе и рожи свиней. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения поливалентной гипериммунной сыворотки против пастереллеза и рожи свиней,включающий приготовление антигена, грундимунизацию, гипериммунизацию,отличающийся тем, что готовят поливалентный антиген из производственных штаммов 26,90,34 и антигена из штамма ВР-2,затем осуществляют грундиммунизацию и гипериммунизацию поливалентным и рожистым антигенами раздельно в разные участки тела,причем грундиммунизацию осуществляют двукратно с интервалом 5 суток,а гипериммунизацию 8-кратными внутримышечными инъекциями с интервалом 3 суток, при общей дозе антигенов 104 млрд. КОЕ (104 мл).