Способ получения бруцеллезного аллергена для выявления бруцеллеза у сельскохозяйственных животных

(51) 61 39/10 (2011.01) 12 1/20 (2011.01) 61 37/02 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышение специфичности аллергена. Способ получения бруцеллезного аллергена для выявления бруцеллеза у сельскохозяйственных животных, включающий дезинтеграцию суспензии бруцелл ультразвуком,автоклавирование,центрифугирование и последующую очистку надосадочной жидкости через стерилизующий фильтр, 100 млрд. взвесь вакцинного штамма бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 инактивируют 0,5 раствором формалина, затем добавляют 0,01 раствора тритона Х-100, после чего выдерживают при комнатной температуре в течение 7-10 сут, затем очищают через стерилизующий фильтр и полученной гомогенат разводят 110 соответственно с физиологическим раствором, после чего консервируют 37 формалином, разливают во флаконы и получают целевой продукт.(72) Тен Виктор Борисович Мустафин Муафик Кометаевич Султанов Ахметжан Акиевич бутлп спен Базарбаев Марат Даугалиева Сауле Тлековна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Тен В.Б. Методологические основы изготовления и совершенствования профилактических противобруцеллезных препаратов и диагностических средств. Автореф.док.вет.наук 16.00.03. Алматы, 1996, с.34-45(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗНОГО АЛЛЕРГЕНА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛЕЗА У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для диагностики бруцеллеза животных. 25459 Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для диагностики бруцеллеза животных. Известен способ получения бруцеллезного аллергена для выявления бруцеллеза у сельскохозяйственных животных, включающий дезинтеграцию суспензии бруцелл ультразвуком,автоклавирование,центрифугирование и последующую очистку надосадочной жидкости через стерилизующий фильтр(Тен В.Б. Методологические основы изготовления и совершенствования профилактических противобруцеллезных препаратов и диагностических средств. Автореф док.вет.наук 16.00.03 / Алматы,1996. -с. 34-45). Недостатком способа является значительный расход бактериальной массы и трудоемкость технологического процесса. Задачей является разработка способа получения аллергена для выявления бруцеллеза у сельскохозяйственных животных, уменьшающей значительной расход бактериальной массы и упрощения технологию изготовления препарата. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышение специфичности аллергена. Способ получения бруцеллезного аллергена для выявления бруцеллеза у сельскохозяйственных животных, включающий дезинтеграцию суспензии бруцелл ультразвуком,автоклавирование,центрифугирование и последующую очистку надосадочной жидкости через стерилизующий фильтр, 100 млрд. взвесь вакцинного штамма бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 инактивируют 0,5 раствором формалина, затем добавляют 0,01 раствора тритона Х-100, после чего выдерживают при комнатной температуре в течение 7-10 сут, затем очищают через стерилизующий фильтр и полученной гомогенат разводят 110 соответственно с физиологическим раствором, после чего консервируют 37 формалином, разливают во флаконы и получают целевой продукт. При получение бруцеллезного аллергена для диагностики бруцеллеза животных используют штамм бактерий-0109 КазНИВИ 19. Указанный штамм бруцелл депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Идентификацию штамма бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам, согласно справочного издания (Определитель/ Морфологические признаки. Бактерии штамма грамотрицательные, овоиды, красные от 0,4-2,50,40,6 мкм, неподвижные, специализированные клетки не образуют. Культуральные свойства. На питательном агаре вырастают янтарные, прозрачные, выпуклые колонии, круглые с гладкими краями. Накопление бакмассы наблюдается через 24-48 часов выращивания. В питательном бульоне образуют равномерную муть с пристеночным кольцом. Аэроб. Оптимальная температура выращивания 37-38 при 6,8-7,2. Биохимические свойства. Обладает оксидазной и каталазной активностью. Антигенная структура. Содержит типичный набор антигенных детеримант, характерных дляв -форме. Патогенные свойства. При определении вирулентности по методу Коротича-Галота установлено, что штамма бактерий-0109 КазНИВИ 19 имеет слабую вирулентность. Способ получения бруцеллезного аллергена состоит в следующем. Пример 1. Трехсуточную 100 млрд. взвесь вакцинного штамма бактерий 0109 КазНИВИ 19 инактивируют 0,5 раствором формалина, затем добавляют 0,01 раствора тритона Х-100, после чего выдерживают при комнатной температуре в течение 7-10 сут, затем очищают через стерилизующий фильтр и полученной гомогенат разводят 110 соответственно с физиологическим раствором, после чего консервируют 37 формалином и разливают во флаконы и получают целевой продукт. Пример 2. Проверка стерильности препарата осуществляет на питательных средах. Берут из испытуемого препарата 0,5 см 3, пересевают их на питательные (твердые, жидкие) среды, затем выдерживают материал в термостате при 37 в течение 72 ч. Пример 3. Безвредность бруцеллезного аллергена проводят на белых мышах. 10 белых мышей в первой группе, которым вводят по 0,5 см 3 аллергена внутрибрюшину, а 5 белым мышам вводят по 0,5 см 3 физиологического раствора. Через 10 дней получают результаты. После введения физиологического раствора белым мышам в течение срока наблюдения самочувствие и аппетит были нормальными. У животных, которым введен бруцеллезный аллерген, самочувствие, аппетит на второй день после введения нормализовался и далее был в пределах нормы. Пример 4. Проверка бруцеллезного аллергена против бруцеллеза животных на абортогенные свойства. Для этого подобрано 5 морских свинок,которым вводят по 0,5 см 3 подкожно в области брюшка бруцеллезного аллергена. Наблюдения проводят в течение 5 дней, у всех 5 морских свинок не было аборты. Пример 5. Сенсибилизирующих свойств бруцеллезного аллергена определяют на животных. Для этого подобрано по 20 коров, телок случного возраста,овцематок,ярочек негативно 25459 реагирующих на бруцеллез, которым вводят по 1 см 3 бруцеллезного аллергена 3-х кратно с интервалом 30 дней, через каждые 5 дней после введения его проводят исследование по ПРА, РА,РСК. Результаты проведенных работ показывает,что испытуемый препарат не обладает сенсибилизирующими свойствами. Пример 6. Активности бруцеллезного аллергена проводят на коровах. Для этого было подобрано 2 группы телок случного возраста по 5 животных в группе. При этом первой группе вводят подкожно в области средней трети шеи живую вакцину из штамма 82, второй группе вакцину не вводят. Исследование аллергеном проводят через 1, 2 месяца. В результате проведенных исследований 3 телки случного возраста реагировали положительно,что составляет 60 от поголовья животных. При повторном исследовании 5 телок случного возраста реагировали положительно, что составляет 100 от поголовья животных. Таким образом, бруцеллезный аллерген из штамма бактерий В-0109 КазНИВИ 19 технологичен, обладает высокой диагностической активностью. Использование способа получения бруцеллезного аллергена позволит надежно выявляет бруцеллез у сельскохозяйственных животных в хозяйствах с различной формой собственности. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения бруцеллезного аллергена для выявления бруцеллеза у сельскохозяйственных животных, включающий дезинтеграцию суспензии бруцелл ультразвуком,автоклавирование,центрифугирование и последующую очистку надосадочной жидкости через стерилизующий фильтр, отличающийся тем, что 100 млрд. взвесь вакцинного штамма бактерий 0109 КазНИВИ 19 инактивируют 0,5 раствором формалина, затем добавляют 0,01 раствора тритона Х-100, после чего выдерживают при комнатной температуре в течение 7-10 сут, затем очищают через стерилизующий фильтр и полученный гомогенат разводят 110 соответственно с физиологическим раствором, после чего консервируют 37 формалином, разливают во флаконы и получают целевой продукт.