Способ получения инактивированной вакцины против бруцеллеза животных

(51) 61 39/10 (2011.01) 12 1/20 (2011.01) 61 37/02 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ получения инактивированной вакцины против бруцеллеза животных,включающий инактивацию штамма бруцелл, их сорбирование на минеральном адъюванте,с последующим добавлением иммуностимулятора и стабилизатора,3-4 суточную культуру штамма бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 смывают 0,5 формализированным физиологическим раствором,затем фильтруют при помощи стерильной марли,отстаивают в течение 1 сут, после чего надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят 30 млрд. взвесь бруцелл, затем полученную взвесь инактивируют нагреванием при температуре 70 в течение 30 мин, охлаждают при температуре 10 в течение 18-20 ч, затем взвесь сливают в колбу и выдерживают до полного осаждения осадка,надосадок отбрасывают, после чего из осадка берут 2,5 см 3 протективного антигена, который добавляют к смеси 6,0 см 3 масляного адъюванта и 1,5 см 3 раствора нуклеоната натрия и получают целевой продукт.(72) Тен Виктор Борисович Мустафин Муафик Кометаевич бутлп спен Султанов Ахметжан Акиевич Воробьев Александр Львович(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для профилактики бруцеллеза животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышение специфичности и высокой иммуногенности вакцины. 25458 Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для профилактики бруцеллеза животных. Известен способ получения инактивированной вакцины против бруцеллеза животных,включающий инактивацию штамма бруцелл, их сорбирование на минеральном адъюванте, с последующим добавлением иммуностимулятора и стабилизатора(Предварительный патент Республики Казахстан 9074, кл. А 6/К 39/00,2000). Недостатком данного способа является, низкая иммуногенность, нестабильность препарата. Задачей изобретения является разработка стабильной и эффективной вакцины против бруцеллеза животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышение специфичности и высокой иммуногенности вакцины. Способ получения инактивированной вакцины против бруцеллеза животных,включающий инактивацию штамма бруцелл, их сорбирование на минеральном адъюванте,с последующим добавлением иммуностимулятора и стабилизатора,3-4 суточную культуру штамма бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 смывают 0,5 формализированным физиологическим раствором,затем фильтруют при помощи стерильной марли,отстаивают в течение 1 сут, после чего надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят 30 млрд. взвесь бруцелл, затем полученную взвесь инактивируют нагреванием при температуре 70 в течение 30 мин, охлаждают при температуре 10 в течение 18-20 ч, затем взвесь сливают в колбу и выдерживают до полного осаждения осадка,надосадок отбрасывают, после чего из осадка берут 2,5 см 3 протективного антигена, который добавляют к смеси 6,0 см 3 масляного адъюванта и 1,5 см 3 раствора нуклеоната натрия и получают целевой продукт. При получении инактивированной вакцины против бруцеллеза животных используют штамм бактерий-0109 КазНИВИ 19,используемый для получения вакцины. Указанный штамм бруцеллы депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Идентификацию штамма бактерий-0109 КазНИВИ 19 проводят по основным морфологическим, культуральным и физиологобиохимическим свойствам, согласно справочного издания (Определитель/ 0,6 мкм, неподвижные, специализированные клетки не образуют. Культуральные свойства. На питательном агаре вырастают янтарные, прозрачные, выпуклые колонии, круглые с гладкими краями. Накопление бакмассы наблюдается через 24-48 часов выращивания. В питательном бульоне образуют равномерную муть с пристеночным кольцом. Аэроб. Оптимальная температура выращивания 37-38 при рН 6,8-7,2. Биохимические свойства. Обладает оксидазной и каталазной активностью. Антигенная структура. Содержит типичный набор антигенных детеримант, характерных дляв -форме. Патогенные свойства. При определении вирулентности по методу Коротича-Галота установлено, что штамма бактерий-0109 КазНИВИ 19 имеет слабую вирулентность. Способ получения противобруцеллезного вакцины состоит в следующем. Пример 1. 3-4 суточную культуру штамма бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 смывают 0,5 формализированным физиологическим раствором, затем фильтруют при помощи стерильной марли, отстаивают в течение 1 сут,после чего надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят 30 млрд. взвесь бруцелл, затем полученную взвесь инактивируют нагреванием при температуре 70 в течение 30 мин, охлаждают при температуре 10 в течение 18-20 ч, затем взвесь сливают в колбу и выдерживают до полного осаждения осадка, надосадок отбрасывают, после чего из осадка берут 2,5 см 3 протективного антигена, который добавляют к смеси 6,0 см 3 масляного адъюванта и 1,5 см 3 раствора нуклеоната натрия и получают целевой продукт. Пример 2. Проверка иммуногенной активности проводят на морских свинках. Подобрано по методу аналогов 10 морских свинок в группе которым вводят препараты по 1,0 см 3, подкожно с внутренней поверхности правого бедра, для инфицирования используют вирулентный штамм бактерий 54 в дозе 20 м.к. (10 кратную инфици-рующую дозу). При этом в качестве контроля (4 группа) дополнительно используют живую вакцину из штамма 82 в дозе 1 млрд. м.к. Через 4 месяца после введения препарата все животные будет инфицированы названным штаммом. Спустя 1 месяц после инфицирования их убивают для бактериологического исследования и определяют иммунитета. Результаты исследования приведены в таблице 1. Как видно, из данных таблицы 1 испытуемый препарат по иммуногенности превосходит неживую вакцину КазНИВИ на 10 и не уступает живой вакцине из штамма 82. Пример 3. Проверка иммуногенной активности проводят на крупном рогатом скоте. Подобрано по методу аналогов по 5 телок случного возраста в группе, которым вводят по 4 см 3 препарата подкожно 25458 перед правой лопаткой, для инфицирования используют живую высокопатогенную вакцину из штамма 82 в дозе 10 млрд. м.к. Через 6 месяцев после введения препарата все животные будет инфицированы названным штаммом. Спустя 1 месяц после инфицирования их убивают для бактериологического исследования органов с целью проверки иммунитета. Результаты исследования представлены в таблице 2. Как видно, из данных таблицы 2 испытуемый препарат предохраняет животных в 80 случаев, но культур бруцелл у животных испытуемых животных было выделено 2,5 раза меньше чем у животных,которым был введен неживая вакцина КазНИВИ. Пример 4. Проверка иммуногенной активности проводят на мелком рогатом скоте. Подобрано по методу аналогов по 10 ярочек в группе, которым вводят по 1 см 3 подкожно в безшерстную область за локтевым суставом с правой стороны, для инфицирования используют живую вакцину из штамма бактерий-1 в дозе 20 млн. м.к. Через 6 месяцев после введения препарата все животные будет инфицированы названным штаммом. Спустя 1 месяц после инфицирования их убивают для бактериологического исследования органов с целью проверки иммунитета. Результаты исследования показаны в таблице 3. Как видно, из данных таблицы 3 испытуемый препарат предохраняет животных в 90 случаев, а вакцина КазНИВИ создавала иммунитет у 80 овец. Таким образом, протективный антиген из штамма бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 в сочетании с масляным адъювантом и стимулятором создает высокий иммунитет к бруцеллезу животных,предохраняет их в 80, 90 случаев. Использование способа получения инактивированной вакцины против бруцеллеза животных позволит надежно иммунизировать поголовье животных в хозяйствах различной форм собственности. Таблица 1 Показания иммунитета у морских свинок исследовано Выделено Заразились Иммунитет,культур животных Показания иммунитета у крупного рогатого скота исследовано Выделено Заразились культур животных животных органов 5 60 5 1 5 60 2 1 5 60 27 5 Показания иммунитета у крупного рогатого скота исследовано Выделено Заразились культур животных животных органов 10 120 5 2 10 120 2 1 10 120 44 10 сут, после чего надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят 30 млрд. взвесь бруцелл, затем полученную взвесь инактивируют нагреванием при температуре 70 в течение 30 мин, охлаждают при температуре 10 в течение 18-20 ч, затем взвесь сливают в колбу и выдерживают до полного осаждения осадка, надосадок отбрасывают, после чего из осадка берут 2,5 см 3 протективного антигена, который добавляют к смеси 6,0 см 3 масляного адъюванта и 1,5 см 3 раствора нуклеоната натрия и получают целевой продукт. Способ получения инактивированной вакцины против бруцеллеза животных,включающий инактивацию штамма бруцелл, их сорбирование на минеральном адъюванте,с последующим добавлением иммуностимулятора и стабилизатора,отличающийся тем, что 3-4 суточную культуру штамма бактерий-0109 КазНИВИ 19 смывают 0,5 формализированным физиологическим раствором, затем фильтруют при помощи стерильной марли, отстаивают в течение 1 Верстка Нурумов У.Е. Корректор Мадеева П.А.