Способ получения неживой вакцины против бруцеллеза животных

(51) 61 39/10 (2011.01) 12 1/20 (2011.01) 61 37/02 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ сорбирование на гидрате окиси алюминия с последующим добавлением иммуностимулятора и стабилизатора, 3-4 суточную культуру вакцинных штаммов бактерий-0109 КазНИВИ 19 иВ-158 -1 смывают 0,5 формализированным физиологическим раствором, затем фильтруют при помощи стерильной марли, отстаивают в течение 1 сут,после чего надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят 90 млрд. взвесь бруцелл, затем полученную взвесь инактивируют нагреванием при температуре 60 в течение 30 мин, охлаждают при температуре 10 в течение 18-20 ч, затем взвесь сливают в колбу и выдерживают до полного осаждения осадка, надосадок отбрасывают, после чего к протективному антигену добавляют адъювант гидроксальный в соотношении 15 при содержании общего азота надосадочной части в среднем 7-8 встряхивают с целью сорбирования адъювантом протективного антигена, затем из осадка берут 2,0 см 3 протективного антигена, который добавляют к смеси 8,0 см 3 масляного адъюванта и 30 см 3 раствора нуклеоната натрия и получают целевой продукт.(72) Тен Виктор Борисович бутлп спен Султанов Ахметжан Акиевич Мустафин Муафик Кометаевич Базарбаев Марат Канатбаев Серик Ганиевич Даугалиева Сауле Тлековна Тоганаев Жунисбек Калдыбаевич(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НЕЖИВОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для профилактики бруцеллеза животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в повышение специфичности и высокой иммуногенности вакцины. Способ получения неживой вакцины против бруцеллеза животных, включающий инактивацию штаммов бруцелл формальдегидом,их 25457 Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для профилактики бруцеллеза животных. Известен способ получения адсорбированной вакцины против бруцеллеза животных, включающий инактивацию штаммов бруцелл формальдегидом, их сорбирование на гидрате окиси алюминия с последующим добавлением иммуностимулятора и стабилизатора (Предварительный патент Республики Казахстан 9074, кл. А 6/К 39/00, 2000). Недостатком данного способа является, низкая иммуногенность, нестабильность препарата из-за неопределенного смешивания адъюванта гидроокиси алюминия с инактивированным штаммом бруцелл,активность которого в каждой серии разная (в пределах 10). Задачей изобретения является разработка стабильной и высокоэффективной вакцины против бруцеллеза животных. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в повышение специфичности и высокой иммуногенности вакцины. Способ получения неживой вакцины против бруцеллеза животных, включающий инактивацию штаммов бруцелл формальдегидом, их сорбирование на гидрате окиси алюминия с последующим добавлением иммуностимулятора и стабилизатора, 3-4 суточную культуру вакцинных штаммов бактерий-0109 КазНИВИ 19 иВ 158 -1 смывают 0,5 формализированным физиологическим раствором, затем фильтруют при помощи стерильной марли, отстаивают в течение 1 сут, после чего надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят 90 млрд. взвесь бруцелл, затем полученную взвесь инактивируют нагреванием при температуре 60 в течение 30 мин, охлаждают при температуре 10 в течение 18-20 ч, затем взвесь сливают в колбу и выдерживают до полного осаждения осадка, надосадок отбрасывают, после чего к протективному антигену добавляют адъювант гидроксальный в соотношении 15 при содержании общего азота надосадочной части в среднем 7-8 встряхивают с целью сорбирования адъювантом протективного антигена, затем из осадка берут 2,0 см 3 протективного антигена, который добавляют к смеси 8,0 см 3 масляного адъюванта и 30 см 3 раствора нуклеоната натрия и получают целевой продукт. При получении неживой вакцины против бруцеллеза животных используют штаммы бактерий-0109 КазНИВИ 19 иВ-158 -1. Указанные штаммы бруцеллы депонированы в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ). Идентификацию штаммов бактерий-0109 КазНИВИ 19 и 158 -1 проводят по основным морфологическим,культуральным и физиологобиохимическим свойствам, согласно справочного издания (Определитель 2, 2005.С - . 370-386). Штамм бактерий-0109 КазНИВИ 19. Морфологические признаки. Бактерии штамма грамотрицательные, овоиды, красные от 0,4-2,50,40,6 мкм, неподвижные, специали-зированные клетки не образуют. Культуральные свойства. На питательном агаре вырастают янтарные, прозрачные, выпуклые колонии,круглые с гладкими краями. Накопление бакмассы наблюдается через 24-48 часов выращивания. В питательном бульоне образуют равномерную муть с пристеночным кольцом. Аэроб. Оптимальная температура выращивания 37-38 при 6,8-7,2. Биохимические свойства. Обладает оксидазной и каталазной активностью. Антигенная структура. Содержит типичный набор антигенных детеримант, характерных дляв -форме. Патогенные свойства. При определении вирулентности по методу Коротича-Галота установлено, что штамм бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 имеет слабую вирулентность. Штамм бактерий-158 -1. Морфологические признаки. Бактерии штамма грамотрицательные, овоиды, красные от 0,4-2,20,4-0,6 мкм, неподвижные, специализированные клетки не образуют. Культуральные свойства. На питательном агаре вырастают янтарные, прозрачные, выпуклые колонии,круглые с гладкими краями. Накопление бакмассы наблюдается через 24-48 часов выращивания. В питательном бульоне образуют равномерную муть с пристеночным кольцом. Аэроб. Оптимальная температура выращивания 37 при 6,8-7,0. Биохимические свойства. Обладает оксидазной и каталазной активностью. Антигенная структура. Содержит типичный набор антигенных детеримант, характерных дляв-форме. Патогенные свойства. При определении вирулентности по методу Коротича-Галота установлено,что штамм бактерий-158 -1 имеет слабую вирулентность. Способ получения неживой вакцины состоит в следующем. Пример 1. 3-4 суточную культуру вакцинных штаммов бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 и-158 -1 смывают 0,5 формализированным физиологическим раствором, затем фильтруют при помощи стерильной марли, отстаивают в течение 1 сут, после чего надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят 90 млрд. взвесь бруцелл,затем полученную взвесь инактивируют нагреванием при температуре 60 в течение 30 мин,охлаждают при температуре 10 в течение 18-20 ч,затем взвесь сливают в колбу и выдерживают до полного осаждения осадка, надосадок отбрасывают, после чего к протективному антигену добавляют адъювант гидроксальный в соотношении 15 при содержании общего азота надосадочной части в среднем 7-8 25457 встряхивают с целью сорбирования адъювантом протективного антигена, затем из осадка берут 2,0 см 3 протективного антигена, который добавляют к смеси 8,0 см 3 масляного адъюванта и 30 см 3 раствора нуклеоната натрия и получают целевой продукт. Пример 2. Проверка иммуногенной активности проводят на морских свинках. Подобрано по методу аналогов 10 морских свинок, в группе которым вводят препараты по 1,0 см 3, подкожно с внутренней поверхности правого бедра, для инфицирования используют вирулентный штамм 54 в дозе 50 м.к. (10-кратную инфицирующую дозу). При этом в качестве контроля (4 группа) дополнительно используют живую вакцину из штамма 82 в дозе 1 млрд. м.к. Через 4 месяца после введения препарата все животные будет инфицированы названным штаммом. Спустя 1 месяц после инфицирования их убивают для бактериологического исследования и определяют иммунитета. Результаты исследования показаны в таблице 1. Как видно, из данных таблицы 1 испытуемый препарат по иммуногенности равен неживой вакцине КазНИВИ и на 10 уступает живой вакцине из штамма 82. Пример 3. Проверка иммуногенной активности проводят на крупном рогатом скоте. Подобрано по методу аналогов по 5 телок случного возраста в группе, которым вводят по 3 см 3 препарата подкожно перед правой лопаткой, для инфицирования используют живую высокопатогенную вакцину из штамма 82 в дозе 10 млрд. м.к. Через 6 месяцев после введения препарата все животные будет инфицированы названным штаммом. Спустя 1 месяц после инфицирования их убивают для бактериологического исследования органов с целью проверки иммунитета. Результаты исследования представлены в таблице 2. Как видно, из данных таблицы 2 испытуемый препарат предохраняет животных в 80 случаев, но культур бруцелл у животных испытуемых животных было выделено 3 раза меньше чем у животных,которым был введен неживая вакцина КазНИВИ. Пример 4. Проверка иммуногенной активности проводят на мелком рогатом скоте. Подобрано по методу аналогов по 10 ярочек в группе, которым вводят по 1 см 3 подкожно в безшерстную область за локтевым суставом с правой стороны, для инфицирования используют живую вакцину из штамма-1 в дозе 20 млн. м.к. Через 6 месяцев после введения препарата все животные будет инфицированы названным штаммом. Спустя 1 месяц после инфицирования их убивают для бактериологического исследования органов с целью проверки иммунитета. Результаты исследования показаны в таблице 3. Как видно, из данных таблицы 3 испытуемый препарат предохраняет животных в 80 случаев, но культур бруцелл у животных, которым был введен испытуемый препарат было выделено 2,3 раза меньше. Таким образом, неживая вакцина против бруцеллеза животных из протективного антигена из штамма бактерий-0109 КазНИВИ 19 иВ-158 -1 в сочетании с адъювантом гидрооксальным и стимулятором создает высокий иммунитет к бруцеллезу животных,предохраняет их в 80 случаев. Использование способа получения неживой вакцины против бруцеллеза животных позволит надежно иммунизировать сельскохозяйственных животных. исследовано животных органов 10 90 10 90 10 90 10 90 исследовано животных органов 5 60 5 60 5 60 25457 Таблица 3 Показания иммунитета у крупного рогатого скотагр. исследовано животных органов 5 120 5 120 5 120 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения неживой вакцины против бруцеллеза животных, включающий инактивацию штаммов бруцелл формальдегидом,их сорбирование на гидрате окиси алюминия с последующим добавлением иммуностимулятора и стабилизатора, отличающийся тем, что 3-4 суточную культуру вакцинных штаммов бактерийВ-0109 КазНИВИ 19 и-1 смывают 0,5 формализированным физиологическим раствором,затем фильтруют при помощи стерильной марли,отстаивают в течение 1 сут, после чего надосадочную жидкость сливают, а из осадка готовят 90 млрд. взвесь бруцелл, затем полученную взвесь инактивируют нагреванием при температуре 60 в течение 30 мин, охлаждают при температуре 10 в течение 18-20 ч, затем взвесь сливают в колбу и выдерживают до полного осаждения осадка,надосадок отбрасывают,после чего к протективному антигену добавляют адъювант гидроксильный в соотношени и 15 при содержании общего азота надосадочной части в среднем 7-8 встряхивают с целью сорбирования адъювантом протективного антигена, затем из осадка берут 2,0 см 3 протективного антигена, который добавляют к смеси 8,0 см 3 масляного адъюванта и 30 см 3 раствора нуклеоната натрия и получают целевой продукт.