Способ диагностики гастропатии при сахарном диабете 2 типа

(51) 61 17/94 (2009.01) 01 33/48 (2009.01) 01 33/577 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, а также может быть использовано в диагностике гастропатии при сахарном диабете 2 типа (далее - СД). Для диагностики гастропатии при СД предлагается иммуногистохимический метод определения в гастробиоптатах антрального отдела желудка с использованием моноклональных антител содержания внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов, а именно гастрина,серотонина, мелатонина и соматостатина. Способ диагностики гастропатии при СД осуществляется визуальным подсчтом внутриклеточных гранул при увеличении 400 в трех полях зрения. Требуемый технический результат достигается тем, что диагностика гастропатии при СД устанавливается при следующем количестве в поле зрения гранул гастрина - 12,591,45, серотонина 1,210,05, мелатонина -0,450,02 и соматостатина 8,821,04.(72) Идрисов Алишер Саугабаевич Ошакбаев Куат Пернекулович Абылайулы Жангентхан Аканов Жанай Айканович Большакова Светлана ВикторовнаМолдабек Гулнар Конырбайкызы Токешова Лиза Есиркеповна Джакупова Айгуль Саруаровна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Научно-исследовательский институт кардиологии и внутренних болезней Министерства здравоохранения Республики Казахстан(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГАСТРОПАТИИ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ 2 ТИПА 23826 Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, а также может быть использовано в диагностике гастропатии при сахарном диабете 2 типа (далее - СД). Известен способ диагностики гастропатии при СД путем определения иммуноферментным способом в сыворотке крови концентрации гормонов гастрина, соматостатина, серотонина,мелатонина Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М. Медицина, 2002. с. 404-480. Недостатками известного способа являются инвазивный метод контакт с кровью больного непостоянство содержания уровня гормонов в сыворотке крови косвенность информации о содержании гормонов в клетках. Известен способ диагностики гастропатии при СД на основе определения концентрации гормонов в крови радиоизотопным методом с использованием меченных антигенов Лавин Н. Эндокринология. Пер с англ. - М. Практика, 1999. с.661-891. Известны также способы диагностики гастропатии при СД на основе определения концентрации гормонов в крови радиоиммунологическим и иммунорадиометрическим методами, при котором используются меченные антитела Балаболкин М.И. Диабетология. М. Медицина, 2000. - с. 672. Недостатками данных методов являются использование радиактивного изотопа риск облучения медицинского персонала и пациента высокозатратность необходимость специально оборудованного помещения,специфического оборудования и наличия специально подготовленного персонала особые условия хранения и последующая утилизация отработанных реагентов непостоянство содержания уровня гормонов в сыворотке крови косвенность информации о содержании гормонов в клетках Горбунова В.А., Орел Н.Ф. Егоров Г.Н., Кузьминов А.Е. Высокодифференцированные нейроэндокринные опухоли (карциноиды) и нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы. Современный взгляд на проблему. М. Изд. Литтерра, 2007. - С.20-31. Симоненко В.Б. Нейроэндокринные опухоли. М. Медицина, 2003. с. 134-136. Известны также способы диагностики гастропатии по определению рН метрии Григорьев П.Я.,Яковенко А.В. Клиническая гастроэнтерология. М. Медицинское информационное агентство, 2001. - с.50-73 и электромиограммам желудка Васильев В.А.,Попова Т.С., Махоньков.. и др. Способ диагностики органов желудочно-кишечного тракта по его электромиограммам и устройство для его осуществления.5045792/14 от 12.03.92 опубл. 10.04.96. Россия, патент 2057483, МПК А 61 В 5/05. Недостатками данных способов диагностики являются малоинформативность изучаемых параметров относительность информации о состоянии секреции гастроинтестинальных гормонов, не позволяющих оценить секреторную функцию желудка. Известен способ диагностики гастропатии путем проведения классической гистологической окраски гастробиоптатов с последующим подсчетом в них эпителиоцитов Никитин Г.А., Михалик Д.С. Способ диагностики стадий язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Россия,патент 2098814. МПК 0133/48.95121065/14 от 13.12.95 публ. 10.12.97 Б. 34. Недостатками данных способов диагностики являются малоинформативность изучаемых параметров отсутствие данных о содержании в гастробиоптатах гастроинтестинальных гормонов. Наиболее близким к предлагаемому изобретению по технической сущности является способ диагностики гастропатии на основе определения содержания пепсиногена, гастрина, соматостатина и маркера инфекции( -маркера) натощак, ,.,- ,,,1993, . 8, . 1, . 1-7,. Недостатками известного способа являются отсутствие возможности комплексного определения содержания гастроинтестинальных гормонов в гастробиоптатах отсутствие данных о содержании в гастробиоптатах гормонов мелатонина и серотонина, которые играют важную роль в функции моторики, клеточной пролиферации,микроциркуляции, местных механизмах защиты слизистой от повреждающих агентов,биоритмологической регуляции функции желудка. Задачей предполагаемого изобретения является диагностика гастропатии при СД 2 типа иммуногистохимическим методом на основе определения в гастробиоптатах антрального отдела желудка содержания внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов, а именно гастрина,серотонина, мелатонина, соматостатина. Описание изобретения с необходимыми сведениями,подтверждающими возможность осуществления изобретения. Сахарный диабет - это дисбаланс всей нейроэндокриной системы организма,это диабетическая микроангиопатия, сочетающаяся с наличием диабетической ретино- и нейропатией, это нарушение парасимпатической и симпатической иннервации внутренних органов, в том числе желудка Старкова Н.Т. Клиническая эндокринология Руководство. - Санкт-Петербург Питер Москва-Харьков-Минск, 2002. - с. 259274. Гастроинтестинальные гормоны играют существенную роль в физиологической секреции инсулина Дедов И.И., Дедов В.И. Биоритмы гормонов. М. Медицина, 1992. - с. 158-185. Метод местной диагностики содержания в антральном отделе желудка гастроинтестинальных гормонов при сахарном диабете 2 типа позволяет 2 23826 оценить изменения, происходящие в слизистой желудка с морфофункциональной позиции. С декомпенсацией обменных процессов при сахарном диабете 2 типа происходит ухудшение всех обменных метаболических процессов, в том числе и содержания гастроинтестинальных гормонов в крови Балаболкин М.И. Диабетология. М. Медицина, 2000. -с.672 Балаболкин М.И., Клебанов Е.М., Креминская В.М. Лечение сахарного диабета и его осложнений. // М. Медицина, 2005. - с. 351-361. Дедов И.И., Мельниченко Г.А., Фадеев В.В. Эндокринология. // Москва., Медицина, 2000,с. 631. Конкретные действия для проведения диагностики содержания гастроинтестинальных гормонов в гастробиоптатах при сахарном диабете 2 типа. Технический результат достигается тем, что у больных с сахарным диабетом 2 типа при эзофагогастродуоденофиброскопии осуществляется забор слизистой ткани антрального отдела желудка по стандартному протоколу исследования. Полученные гастробиоптаты фиксируются в 10 нейтральном растворе формалина с получением из них гистологических препаратов. Затем выполняется иммуногистохимический способ окрашивания на содержание внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов с использованием моноклональных антител(титр 125),соматостатину (1100), серотонину (титр 150),мелатонину (титр 150) с подсчтом количества иммунопозитивных клеток (окрашенных клеток) в трех полях зрения при увеличении 400 на микроскопе (, Германия). Сущность способа заключается в дифференцированном способе окрашивания внутриклеточных гранул с использованием моноклональных антител для количественного определения гастроинтестинальных гормонов гастрина в-клетках, серотонина и мелатонина в ЕС-клетках, соматостатина в-клетках. Визуальный подсчт внутриклеточных гранул осуществляется при увеличении 400 в трех полях зрения. Результат количественного подсчта определяет диагностику гастропатии у больных сахарным диабетом 2 типа. Способ диагностики гастропатии при сахарном диабете 2 типа осуществляется следующим образом. Требуемый технический результат достигается тем, что диагностика гастропатии при сахарном диабете 2 типа устанавливается при следующем количестве в поле зрения гранул гастрина 12,591,45, серотонина - 1,210,05, мелатонина 0,450,02 и соматостатина 8,821,04. Данный метод диагностики был проведен у 56 пациентов, среди них 20 условно здоровых лиц без патологии со стороны эндокринной и пищеварительной систем (контрольная группа) 36 пациентов с гастропатией при сахарном диабете 2 типа (основная группа) в стадии субкомпенсации обменных процессов. В обеих группах были проведены стандартные общеклинические и биохимические исследования. Статистическую обработку результатов исследований осуществляли стандартными методами вариационной статистики расчет средних значений (М), ошибки средних значений ,критерий Стьюдента. Достоверным считали различия при р 0,05. Результаты иммуногистохимического исследования гастроинтестинальных гормонов в сравниваемых группах представлены в таблице. Таблица Показатели иммуногистохимического исследования гастроинтестинальных гормонов в контрольной и основных группах (увеличение 400, в поле зрения). Гастроинтестинальные гормоны Гастрин 1,180,08- достоверное отличие от контрольной группы (р 0,001). По данным таблицы видно, что в антральном осуществляет на паракриновом уровне Балаболкин отделе желудка у пациентов СД 2 типа в сравнении М.И. Диабетология. М. Медицина, 2000. - с. 672. с контролем наблюдается снижение гастрина до Это подтверждается тем, что-клетки 12,591,45 (в контрольной группе - 24,461,75), (соматостатин) отличаются от типичных серотонина до 1,210,05 (в контрольной группе - нейроэндокринных клеток наличием 9,891,15) и мелатонина до 0,450,02 (в цитоплазматических отростков, заканчивающиеся контрольной группе - 1,150,09). В то время как на-клетках (гастрин) и ЕС-клетках (серотонин и показатели содержания соматостатина были мелатонин). Повышение концентрации повышены до 8,821,04 (в контрольной группе - соматостатина обусловлено с гипергликемией 1,180,08). наблюдаемой при сахарном диабете 2 типа Пальцев Ингибирующее влияние соматостатина на М.А.,Кветной И.М. Руководство по содержание гастрина, серотонина и мелатонина нейроиммуноэндокринологии. - М., Медицина. 3 23826 2006. - 79-102 с. 222-229 Балаболкин М.И.,Клебанов Е.М., Креминская В.М. Лечение сахарного диабета и его осложнений. // М. Медицина, 2005. с. 351-361 Учитывая ингибирующие влияние соматостатина на эвакуацию желудочного содержимого, это приводит к нарушению желудочно-кишечной моторики,секреции,всасывания с последующим развитием гастропатии при диабетеЕ.,.,.., , 2000 38-74. С учтом свойств мелатонина, серотонина и гастрина, играющих роль в пролиферации, трофики,моторно-секреторной и других физиологических функциях желудка, можно утверждать о развитии гастропатии у больных сахарным диабетом 2 типа Анисимова В.Н., Кветной И.М., Комаров Ф.И. и др. Мелатонин в физиологии и патологии желудочнокишечного тракта. // М. Советский спорт, 2000. с,// .. - 1992. - . 12.-. 7-16 Таким образом,предложенный способ диагностики гастропатии у больных сахарным диабетом 2 типа основан на иммуногистохимическом методе определения количественного содержания внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов в гастробиоптатах антрального отдела желудка. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики гастропатии при сахарном диабете 2 типа,включающий иммуногистохимическое определение содержания внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов в гастробиоптатах антрального отдела желудка при увеличении 400, отличающийся тем, что при количестве гранул гастрина 12,591,45,серотонина 1,210,05, мелатонина 0,450,02 и соматостатина 8,821,04,диагностируют диабетическую гастропатию.