Способ ранней диагностики гастропатии

(2009.01) 01 33/50 (2009.01) 01 33/74 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Для ранней диагностики гастропатии предлагается иммуногистохимический метод определения в гастробиоптатах антрального отдела желудка с использованием моноклональных антител содержания внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов, а именно гастрина,серотонина, мелатонина и соматостатина. Способ диагностики ранней гастропатии осуществляется визуальным подсчтом внутриклеточных гранул при увеличении х 400 в трех полях зрения. Требуемый технический результат достигается тем, что способ ранней диагностики гастропатии устанавливается в установлении увеличенного количества гранул гастрина в поле зрения более 24,461,75 и уменьшении серотонина меньше 9,891,15 мелатонина - меньше 1,150,09 и соматостатина - меньше 1,180,08, диагностируют раннюю гастропатию.(72) Ошакбаев Куат Пернекулович Идрисов Алишер Саугабаевич Дукенбаева Бибажар Абаевна Хабижанова Алма Сериковна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт кардиологии и внутренних болезней Министерства здравоохранения Республики Казахстан(54) СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ ГАСТРОПАТИИ(57) Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, а также может быть использовано в ранней диагностике гастропатии. 23325 Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, а также может быть использовано в ранней диагностике гастропатии. Известны способы диагностики гастропатии по определению рН-метрии Григорьев П.Я., Яковенко А.В. Клиническая гастроэнтерология. М. Медицинское информационное агентство, 2001. с. 50-73 и электромиограммам желудка Васильев В.А., Попова Т.С, Махоньков и др. Способ диагностики органов желудочно-кишечного тракта по его электромиограммам и устройство для его осуществления. 5045792/14 от 12.03.92 опубл. 10.04.96. Россия, патент 2057483, МПК А 61 В 5/05. Недостатками известных способов диагностики являются малоинформативность изучаемых параметров относительность информации о состоянии секреции гастроинтестинальных гормонов, не позволяющих оценить секреторную функцию желудка, диагностика при наличии клиники. Известен способ диагностики гастропатии путем определения иммуноферментным способом в сыворотке крови концентрации гормонов гастрина,соматостатина, серотонина, мелатонина Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М. Медицина, 2002. с. 404-480. Недостатками известного способа являются инвазивный метод контакт с кровью больного непостоянство содержания уровня гормонов в сыворотке крови косвенность информации о содержании гормонов в клетках,поздняя диагностика. Известны способы диагностики гастропатии на основе определения концентрации гормонов в крови радиоизотопным,радиоиммунологическим и иммунорадиометрическим методами, при котором используются меченные антитела и антигены Горбунова В.А., Орел Н.Ф. Егоров Г.Н., Кузьминов А.Е. Высокодифференцированные нейроэндокринные опухоли (карциноиды) и нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы. Современный взгляд на проблему. М. Изд. Литтерра, 2007. - с.20-31. Недостатками известных способов диагностики являются использование радиактивного изотопа риск облучения медицинского персонала и пациента высокозатратность необходимость специально оборудованного помещения,специфического оборудования и наличия специально подготовленного персонала особые условия хранения и последующая утилизация отработанных реагентов непостоянство содержания уровня гормонов в сыворотке крови косвенность информации о содержании гормонов в клетках поздняя диагностика. Известен способ диагностики гастропатии путем проведения классической гистологической окраски гастробиоптатов с последующим подсчетом в них эпителиоцитов Никитин Г.А., Михалик Д.С. Способ диагностики стадий язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Россия,2 патент 2098814. МПК 01 33/48.95121065/14 от 13.12.95 публ. 10.12.97 Б. 34. Недостатками данных способов диагностики являются отсутствие данных о содержании в гастробиоптатах гастроинтестинальных гормонов малоинформативность гормональных параметров поздняя диагностика. Наиболее близким к предлагаемому изобретению по технической сущности является способ диагностики гастропатии на основе иммуногистохимического определения (увеличение 400) гастроинтестинальных гормонов в гастробиоптатах на содержание пепсиногена,гастрина, соматостатина и маркера инфекции(-маркера) натощак, ,,. 7903552,., ,, 1993, . 8, . 1, . 1-7, . Недостатками известного способа являются отсутствие возможности комплексного определения содержания гастроинтестинальных гормонов в гастробиоптатах отсутствие данных о содержании в гастробиоптатах гормонов мелатонина и серотонина, которые играют важную роль в функции моторики, клеточной пролиферации,микроциркуляции, местных механизмах защиты слизистой от повреждающих агентов,биоритмологической регуляции функции желудка. Задачей предполагаемого изобретения является ранняя диагностика гастропатии иммуногистохимическим методом на основе определения в гастробиоптатах антрального отдела желудка содержания внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов, а именно гастрина,серотонина, мелатонина, соматостатина. На уровне пищеварительного тракта пептидные гормоны обеспечивают ритмичную, цикличную,согласованную деятельность всех органов пищеварения как единой системы в соответствии с характером пищи, этапом е обработки и усвоением,фазами пищеварения, потребностями организма. Разработанные во второй половиневека клеточные и молекулярные электронномикроскопические методы исследования позволили достаточно хорошо изучить роль таких гастроинтестинальных гормонов, как гастрин,соматостатин, серотонин, мелатонин в патогенезе различных заболеваний желудочно-кишечного тракта Григорьев П.Я., Яковенко А.В. Клиническая гастроэнтерология. М. Медицинское информационное агентство, 2001. - с. 12-14. Полак Д.М., Блум С.Р., Райта Н.А. Физиология и патофизиология желудочно-кишечного тракта. Пер. с англ. - М. Медицина, 1989. - с. 496. Метод местной диагностики содержания в антральном отделе желудка гастроинтестинальных гормонов позволяет оценить изменения,происходящие в слизистой желудка с морфофункциональной позиции. Гастроинтестинальные гормоны играют 23325 существенную роль в физиологической работе желудка Уголев А. М, Радбиль О. С. Гормоны пищеварительной системы. // М Наука, 1995.с. 283. Технический результат достигается тем, что у пациентов при эзофагогастродуоденоскопии с прицельной биопсией из слизистой оболочки антрального отдела желудка, осуществлялась эндоскопом фирмы(Япония, 2005) по стандартной методике. Из гастробиптатов изготавливаются гистологические препараты(срезы) после фиксации в 10 нейтральном растворе формалина и проведением через спирты с повышающейся концентрацией с изготовлением парафиновых блоков. Затем проводится морфологический анализ с последующим окрашиванием гистологических срезов иммуногистохимический способом на содержание внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов. Для выявления содержание внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов использовались моноклональные антитела(, ) к гастрину (титр 125),соматостатину (1100), серотонину (титр 150),мелатонину (титр 150) и к прогормону хромогранину А (титр 150), являющегося неспецифическим маркером нейроэндокринных клеток. Количество выявленных иммунопозитивных клеток (окрашенные клетки) подсчитывалось в трх полях зрения при увеличении 400 на микроскопе(, Германия). Сущность способа заключается в дифференцированном способе окрашивания внутриклеточных гранул с использованием моноклональных антител для количественного определения гастроинтестинальных гормонов гастрина в -клетках, серотонина и мелатонина в ЕС-клетках, соматостатина в -клетках и неспецифического прогормона хромогранина А. Количественный подсчт внутриклеточных гранул осуществляется при визуальном увеличении 400 в трех полях зрения. Результат количественного подсчта определяет раннюю диагностику гастропатии. Способ ранней диагностики гастропатии осуществляется следующим образом. Требуемый технический результат достигается тем,что ранняя диагностика гастропатии устанавливается при увеличении количества гранул гастрина в поле зрения выше 24,461,75, серотонина меньше 9,891,15, мелатонина - меньше 1,150,09 и соматостатина - меньше 1,180,08, диагностируют раннюю гастропатию. Данный метод диагностики был проведен у 64 пациентов, среди них 20 условно здоровых лиц без патологии со стороны эндокринной и пищеварительной систем (контрольная группа) 44 пациентов с хроническим атрофическим гастритом(основная группа). В обеих группах были проведены стандартные общеклинические и биохимические исследования. Статистическая обработка материала осуществлялась стандартными методами вариационной статистики среднее арифметическое значение (М) ошибка среднего арифметического значения-критерий Стьюдента. Достоверным различием считалось при р 0,025. Результаты исследования гастроинтестинальных гормонов в сравниваемых группах представлены в таблице 1. Таблица 1 Сравнительные данные иммуногистохимического исследования гастроинтестинальных гормонов(увеличение х 400, в поле зрения). Гастроинтестинальные гормоны Основная группа, 44 Гастрин 35,111,73 Серотонин 6,320,07 Мелатонин 0,730,04 Соматостатин 0,740,06 Хромогранин А 27,132,28- достоверное отличие от основной группы (р 0,025). По данным таблицы 1 видно, что в антральном отделе желудка у пациентов в сравнении с контролем наблюдается повышение гастрина до 35,111,73 (в контрольной группе - 24,461,75),снижение серотонина до 6,320,07 (в контрольной группе - 9,891,15), мелатонина до 0,730,04 (в контрольной группе - 1,150,09), соматостатина до 0,740,06 (в контрольной группе - 1,180,08). Уровень прогормона Хромогранина А достоверно не изменяется. Снижение уровней серотонина и мелатонина у больных может демонстрировать непосредственное участие указанных нейротансмитеров в формировании клинических проявлений Анисимова В.Н., Кветной И.М., Комаров Ф.И. и др. Мелатонин в физиологии и патологии желудочнокишечного тракта. // М. Советский спорт, 2000.с. 183. С учтом свойств мелатонина и серотонина,играющих роль в пролиферации, трофики, моторносекреторной,биоритмической и других физиологических функциях желудка, можно утверждать о развитии гастропатии у больных основной группы,,, , 5 ,. ..,1992. -.12. -.7-16 23325 На фоне гастропатии происходит активизация защитно-приспособительных механизмов желудка. Один из факторов защиты желудка это снижение ингибирующего влияния соматостатина, что обусловливает повышение синтеза гастрина как одного из основных пролиферативных гастроинтестинальных гормонов Пальцев М.А.,Кветной И.М. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. М., Медицина, 2006.- с. 79-102 222-229. Гастрин обладает трофическим действием на слизистую оболочку желудка, усиливает секрецию соляной кислоты париетальными клетками и выделение пепсина желудочными железами. Таким образом,исследование показало существование нормальных показателей в содержании гастроинтестинальных гормонов в гастробиптатах, и что при гастропатии происходит их изменение. Предложенный способ ранней диагностики гастропатии основанный на иммуногистохимическом методе определения количественного содержания внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов в гастробиоптатах антрального отдела желудка является достаточно чувствительным способом ранней диагностики. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ ранней диагностики гастропатии,включающий иммуногистохимическое определение содержания внутриклеточных гранул гастроинтестинальных гормонов в гастробиоптатах,отличающийся тем, что их определяют в антральном отделе, и при увеличении количества гранул гастрина в поле зрения более 24,461,75 и уменьшении серотонина меньше 9,891,15 мелатонина - меньше 1,150,09 и соматостатина меньше 1,180,08 диагностируют раннюю гастропатию.