Способ прогнозирования риска возникновения инсульта у пациентов казахской национальности

(51) 01 33/53 (2006.01) 61 10/02 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ изобретения является расширение арсенала средств назначения и функциональных возможностей. Это достигается тем, что в предлагаемом способе прогнозирования риска возникновения инсульта у пациентов казахской национальности, включающем исследование крови пациентов путем определения маркеров риска развития инсульта, согласно изобретению, в качестве маркеров риска развития инсульта, в качестве которого прогнозируют ишемический инсульт, определяют наличие в ДНК,выделенной из клеток переферической крови пациентов, ген фибриногена и ген тромбоцитарного рецептора фибриногена, исследуя в качестве фактора риска наследственную предрасположенность к развитию инсульта. При этом в качестве генов фибриногена и тромбоцитарного рецептора фибриногена определяют, патологический аллель А 2/ - 33 Р гена 111 /11/3 и паталогический аллель (-455 ) гена .(72) Каменова Салтанат Уалихановна Святова Гульнара Салаватовна Ли Елена Юрьевна Кужибаева Карлыгаш Кенжахметовна Нетесова Олеся Геннадьевна Маханбетжанова Райса Алмаханбетовна Катанаева Оксана Николаевна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Алматинский государственный институт усовершенствования врачей Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Предварительный патент РК 16732, кл. 01 33/53, А 61 В 10/02, 2005(54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РИСКА ВОЗНИКНОВЕНИЯ ИНСУЛЬТА У ПАЦИЕНТОВ КАЗАХСКОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ 21813 Изобретение относится к области медицины, а,именно,к неврологии. Известен способ прогнозирования риска возникновения инсульта по определению уровня гемоцистеина в плазме крови.(Журнал неврологии и психиатрии,2001, вып.1, с 17.) Однако известный способ имеет ограниченный арсенал средств назначения и ограниченные функциональные возможности, так как предполагает прогнозирование инсульта у пациентов в различных популяциях, выделяя среди факторов риска артериальную гипертензию, атеросклеротическое поражение магистральных сосудов головы, сахарный диабет, ожирение и др. Известен также способ прогнозирования риска возникновения инсульта (способ прогнозирования риска возникновения инсульта у пациентов казахской национальности) путем исследования крови больного,включающий исследование крови пациентов путем определения маркеров риска развития инсульта , в качестве которых определяют эритроцитарные антигены М,Р , в,,и при повышении количества эритроцитарных антигенов М до 83,3 82,8 у русских до 68,1, у казахов до 71,4 процентов, в- у русских до 63,6, у казахов до 74,2, Р до 51,5-51,4 и отсутствию антигенову больных прогнозируют риск развития острого нарушения мозгового кровообращения.(Пред. Пат.16732, кл. 01 33/53, А 61 В 10/00, 2005) Однако известный способ имеет ограниченный арсенал средств назначения и ограниченные функциональные возможности, так как предполагает прогнозирование инсульта у пациентов в различных популяциях, выделяя среди факторов риска артериальную гипертензию, атеросклеротическое поражение магистральных сосудов головы, сахарный диабет, ожирение и др. Задачей изобретения является создание способа прогнозирования риска возникновения инсульта у пациентов казахской национальности, позволяющего расширить арсенал средств назначения и функциональные возможности. Техническим результатом изобретения является расширение арсенала средств назначения и функциональных возможностей. Это достигается тем, что в предлагаемом способе прогнозирования риска возникновения инсульта у пациентов казахской национальности, включающем исследование крови пациентов путем определения маркеров риска развития инсульта, согласно изобретению, в качестве маркеров риска развития инсульта, в качестве которого прогнозируют ишемический инсульт, определяют наличие в ДНК,выделенной из клеток переферической крови пациентов, ген фибриногена и ген тромбоцитарного рецептора фибриногена, исследуя в качестве фактора риска наследственную предрасположенность к развитию инсульта. При этом в качестве генов фибриногена и тромбоцитарного рецептора фибриногена определяют, патологический аллель А 2 / - 33 Р гена 111 /11/3 и паталогический аллель (-455 ) гена . Технический результат обеспечивается видом маркера прогнозирования риска возникновения инсульта. Предлагаемый способ прогнозирования риска возникновения инсульта у пациентов казахской национальности реализуют следующим образом. Для прогнозирования риска возникновения инсульта у пациентов казахской национальности исследуют кровь пациентов путем определения маркеров риска развития инсульта, включающих ген фибриногенаи ген тромбоцитарного рецептора фибриногена ( 3/ 111/ 11). В качестве маркеров риска развития инсульта определяют электрофоретическим анализом продуктов рестрикции и амплификации наличие в ДНК,выделенной из клеток переферической крови пациентов, ген фибриногена и ген тромбоцитарного рецептора фибриногена, исследуя в качестве фактора риска наследственную предрасположенность к развитию инсульта. При этом в качестве генов фибриногена и тромбоцитарного рецептора фибриногена определяют, патологический аллель А 2 / - 33 Р гена 111 / 11/3 и паталогический аллель (-455 А) генапо наличию которых прогнозируют риск возникновения ишемического инсульта. Геномную ДНК получают из клеток свежей или замороженной крови,содержащей коагулянт,используя набор Цитолизин (Россия) или известными стандартными способами. Продукты рестрикции и ПЦР-амплификации разделяют электрофорезом в агарозном или акриламидном гелях(ПААГ) по стандартному способу (. 1989). Для визуализации фрагментов ДНК ПААГ окрашивают бромистым этидием по стандартному способу ( С. . . ., 1989) с модификациями. Достоверность отличия частот генотипов в исследуемых группах от средних значений в популяции проводят с помощью пакета 5, считая достоверными различия при р 0,05. В таблицах 1, 2 приведены результаты первичного анализа частот генотипов и аллелей гена 111/ 11/3 и генау пациентов в группе контроля и в основной группе. Основная группа исследования образована из 103 пациентов в возрасте от 21 до 82 лет, перенесших ишемический инсульт. Все исследуемые пациенты распределены на подгруппы в зависимости от типа ишемического инсульта, возраста, пола и генотипических особенностей. Первая и вторая подгруппы включают пациентов с острым нарушением мозгового кровообращения,имеющих в анамнезе факторы риска развития инсульта. Третья и четвертая группа представлены пациентами с повторным ишемическим инсультом. 21813 Таблица 1 Частоты генотипов и аллелей полиморфизма кодирующей части гена 3. Изучаемые группы Больные Контроль Больные Контроль Соответствие х 2 Р Частоты генотипов и аллелей полиморфизма кодирующей части гена . Изучаемые группы Больные Контроль Больные Контроль Соответствие х 2 Р Анализ наблюдаемых и ожидаемых частот (табл.1,2) показал, что частоты генотипов гена 111/11/3 и генав группе контроля (генотип 108 здоровых доноров) не отличался от таковой в популяции (р 0,85). Поэтому анализ частот генотипов далее проводят по сравнению с популяционными частотами, как более корректными. Расширение арсенала средств назначения и функциональных возможностей обеспечивается прогнозированием,конкретно, ишемического инсульта, исследованием в качестве фактора риска наряду с общепринятыми факторами - наследственной предрасположенности к развитию инсульта с определением в качестве маркеров, включающих паталогические аллельные варианты гена фибриногена и гена тромбоцитарного рецептора фибриногена. Впервые установлено, что паталогический аллель А 2/-33 Р гена 111 а/11/3 и паталогический аллель (-455 А) генаявляются генетическим маркером риска развития ишемического инсульта, а для пациентов казахской национальности с гетерозиготным генотипами гена фибриногена и гена тромбоцитарного рецептора фибриногена характерна повышенная вероятность развития ишемического инсульта. Пример 1. Больной Ахметов Турехан, 33 года, поступил в инсультное отделение с жалобами на слабость в левых конечностях, невнятность речи и нестабильность артериального давления. В анамнезе - повышенное артериальное давление в течение трех лет, курение 27 лет, малоподвижный образ жизни. Гипотензивные препараты не принимал,не наблюдается у невропатолога. Со слов пациента заболел остро, почувствовал интенсивную головную боль, развились в течение часа невнятность речи, нарастает слабость в левых конечностях. Врач скорой помощи обнаружил АД 150/100 мм.рт. ст., пульс 83-96 ударов в мин. При осмотре в отделении АД 160/95 мм.рт.ст.,пульс 84-96 ударов в минуту, ритм правильный. В неврологическом статусе общемозговые симптомы в виде головных болей в височной области справа, слабость конвергенции с обеих сторон,горизонтальный установочный нистагмоид при взгляде в стороны. Дизартрия с элементами моторной афазии. Сухожильные рефлексы выявлены с пирамидной анизорефлексией с акцентом слева, сила мышц в левых конечностях до трех баллов, гемигипестезия слева. Симптом Барре положительный слева. Симптом Бабинского положительный с обеих сторон. Симптом Маринеску - Родовичи с обеих сторон, покачивание в позе Ромберга,координаторные пробы с помахиванием и инъекцией слева, снижение памяти на текущие события. На глазном дне ангиопатия сосудов сетчатки. Рентгеноскопия грудной клетки расширение границ сердца за счет левого желудочка. На ЭКГ - гипертрофия левого желудочка. На КТ головного мозга очаг ишемии в правом полушарии в области внутренней капсулы. 21813 Анализы крови ВНВ 167 г/л. ОАМ без Рентгенограмма шейного и грудного отделов паталогии, холестерин крови 5,3 ммоль/л, билирубин позвоночника выраженные признаки остеохандроза общий 8,9 ммоль/л, АЛТ 0,21,0,12, креатинин 74,2 позвоночника. ммоль/л, глюкоза 7,6 ммоль/л, протромбинообразование РЭГ - сглаженность элементов кривой, снижение 100 ( 93-103) протромбиновое время 13 сек., ВСК 4 амплитуды, что указывает на изменения сосудов мин.45 сек., аутокоагулограмма на 10 мин. 52, каолин - атеросклеротического типа. кефалиновое время 44 сек. (25 сек.), ПТИ 92,На ЭКГ - гипертрофия левого желудочка, на КТ фибриноген 3,4 ммоль/л, осмотрен кардиологом. головного мозга признаки энцелофалопатии. Диагноз артериальная гипертония 3 ст. Р 4. Острое Анализы кровии ОАМ без паталогии,нарушение мозгового кровообращения по типу холестерин крови 6,1 ммоль/л, билирубин общий 11,2 ишемического инсульта в бассейне средней мозговой ммоль/л, АЛТ 0,012,0,032, креатинин 86,2 ммоль/л,артерии справа. глюкоза 6,6 ммоль/л,ВСК 5 мин.40 сек.,Левосторонний умеренный гемипарез. Дизартрия. аутокоагулограмма на 10 мин. 43, каолин-кефалиновое Проведенная базисная терапия острого нарушения время 30 сек., ПТИ 86, фибриноген 3,66 мкмоль/л. мозгового кровообращения и гипотензивная терапия Диагноз Атеросклеротическая артериальная способствует регрессу неврологической симптоматики. гипертония 2 ст Р 2. Дисциркуляторная энцефалопатия. Выписан в удовлетворительном состоянии. Проведенная базисная терапия энцефалопатии и В амбулаторных условиях пациенту заполнена гипотензивная терапия способствуют регрессу генетическая карта, составлена родословная и по неврологической симптоматики. Выписана через 13 дней согласию больного взята кровь для дальнейшего в удовлетворительном состоянии. генетического исследования. В амбулаторных условиях пациентке заполнена В результате исследования ДНК пациента выявлено генетическая карта, составлена родословная и по наличие паталогического аллеляА 2 / - 33 Р гена согласию больной была взята кровь для дальнейшего 111 / 11/ 3 . молекулярногенетического исследования. Пациент Ахметов Турехан определен в группу В результате исследования ДНК пациентки выявлено повышенного риска повторного развития инсульта. наличие носительства патологического аллель (-455 А) Врачем невропатологом разработана стратегия гена . мероприятий профилактики повторного ишемического Пациентка Ельгельдиева Маншук определена в инсульта для данного пациента. группу повышенного риска развития инсульта. Пример 2. Врачем невропатологом разработана стратегия Больная Ельгельдиева Маншук, 62 лет, поступила в мероприятий профилактики повторного ишемического клинику по поводу регулярных головных болей в инсульта для данной пациентки. затылочной и обеих височных областях, периодические Предлагаемый способ успешно прошел испытания в головокружения, шаткость походки, снижения памяти на инсультных отделениях клиник г. Алматы Республики текущие события. Казахстан и может быть рекомендован для применения в В анамнезе - повышенное артериальное давление в практической медицине. течение 12 лет, резистентность к глюкозе,Таким образом предлагаемый способ малоподвижный образ жизни. Принимает регулярно прогнозирования риска возникновения инсульта у диротон в дозе 20 мг ежедневно, арифон утром по 1,5 мг, пациентов казахской национальности позволяет тромбоасс 50 мг вечером, наблюдается у невропатолога расширить функциональные возможности и арсенал регулярно. средств назначения. Последние два года отмечает утомляемость,снижение памяти, иногда боли в области сердца и ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ одышку при физической нагрузке. Накануне поступления вечером внезапно появилась 1. Способ прогнозирования риска возникновения головная боль, головокружение, шаткость при ходьбе и инсульта у пациентов казахской национальности,боли в области сердца. включающий исследование крови пациентов путем Врач скорой помощи обнаружил АД 185/100 мм.рт. определения маркеров риска развития инсульта,ст., пульс 86-94 ударов в мин, симптом Маринеску- отличающийся тем, что в качестве маркеров риска Родовичи с обеих сторон, горизонтальный установочный развития инсульта, в качестве которого прогнозируют нистагмоид при взгляде со стороны, покачивание в позе ишемический инсульт, определяют наличие в ДНК,Ромберга. выделенной из клеток периферической крови пациентов,При осмотре в клинике АД 180/95 мм.рт.ст., пульс ген фибриногена и ген тромбоцитарного рецептора 84-96 ударов в минуту, синусовая аритмия, симптом фибриногена, исследуя в качестве фактора риска Маринеску-Родовичи с обеих сторон, горизонтальный наследственную предрасположенность к развитию установочный нистагмоид при взгляде со стороны, инсульта. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве слабость конвергенции с обеих сторон, покачивание в позе Ромберга, снижение памяти на текущие события. генов фибриногена и тромбоцитарного рецептора На глазном дне полнокровие вен. Рентгеноскопия фибриногена определяют, патологический аллельгрудной клетки, расширение границ сердца за счет левого 2/-33 Р гена 111/ 11/ 3 и патологический желудочка, аорта уплотнена. аллель (-455 А) гена . Верстка Ботаева Ж.А. Корректор Мадеева П.А. 4