Способ определения риска развития ишемической болезни сердца у мужчин казахской национальности

(51) 01 33/50 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(72) Байтасова Назия Багадурбековна Нургазиева Айгуль Сабитовна(56) Парамонов А.Д., Моисеев С.В., Фомин В.В. и др. Гипергомоцистеинемия и белки острой фазы при различных формах ишемической болезни сердца.// Терапевтический архив. - 2004,6, с. 67-70(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РИСКА РАЗВИТИЯ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА У МУЖЧИН КАЗАХСКОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ(57) Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и предназначено для определения риска развития ишемической болезни сердца (ИБС) у мужчин казахской национальности. Задачей изобретения является создание более точного способа определения риска развития ишемической болезни сердца у мужчин казахской национальности, позволяющего выявить новые независимые маркеры ИБС и установить генетические факторы, принимающие участие в обмене гомоцистеина метилентетрагидрофолатредуктазы 677. Это достигается тем, что в способе определения риска развития ишемической болезни сердца у мужчин казахской национальности путем исследования крови и выявления корреляции двух показателей, одним из которых является уровень сывороточного гомоцистеина,согласно изобретению, исследуют кровь мужчин казахской национальности, дополнительно для выявления второго показателя проводят молекулярно генетический анализ, методом полимеразной цепной реакции определяют полиморфизм гена метилентетрагидрофолатредуктазы 677, и при обнаружении генотипа ТТ и повышенном содержании гомоцистеина судят о возможном развитии ишемической болезни сердца. 20344 Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и предназначено для определения риска развития ишемической болезни сердца (ИБС) у мужчин казахской национальности. Известен способ определения риска развития ишемической болезни сердца путем определения в крови уровня гомоцистеина, и при повышении содержания гомоцистеина (15 -45 мкМ), судят о возможном развитии ИБС.(Фомин В. Гомоцистеин - новый фактор риска заболеваний сердечно - сосудистой системы // Врач.- 2001,7. - с. 35 - 37). Недостатком данного способа является то, что определение одного только показателя - уровня гомоцистеина не достаточно для прогнозирования риска развития ИБС, тем более что данный показатель нельзя применить для определенной этнической популяции. Известен также способ определения риска развития ишемической болезни сердца путем исследования крови и выявления корреляции двух показателей уровня гомоцистеина и белков острой фазы. Повышение уровня концентрации в крови гомоцистеина с одновременным повышением уровня белков острой фазы можно считать маркером неблагоприятного прогноза развития ИБС.(Парамонов А.Д., Моисеев С.В., Фомин В.В. и др. Гипергомоцистеинемия и белки острой фазы при различных формах ишемической болезни сердца // Терапевтический архив. - 2004,6. - с. 67 - 70). Недостатками данного способа является не достаточная информативность, т.к. повышение уровня гомоцистеина и белков острой фазы не отражает генетического фактора, влияющего на развитие ИБС. Задачей изобретения является создание более точного способа определения риска развития ишемической болезни сердца у мужчин казахской национальности, позволяющего выявить новые независимые маркеры ИБС и установить генетические факторы, принимающие участие в обмене гомоцистеина метилентетрагидрофолатредуктазы 677. Техническим результатом изобретения является повышение точности определения риска развития ишемической болезни сердца у мужчин казахской национальности. Это достигается тем, что в способе определения риска развития ишемической болезни сердца у мужчин казахской национальности путем исследования крови и выявления корреляции двух показателей, одним из которых является уровень сывороточного гомоцистеина,согласно изобретению, исследуют кровь мужчин казахской национальности, дополнительно для выявления второго показателя проводят молекулярно генетический анализ, методом полимеразной цепной реакции определяют полиморфизм гена метилентетрагидрофолатредуктазы 677, и при обнаружении генотипа ТТ и повышенном содержании гомоцистеина судят о возможном развитии ишемической болезни сердца. 2 Хотя в геневыявлены около двух десятков мутаций, одна из них особенно важна в функциональном отношении. Эта мутация с заменой цитозина на тимин в положении 677 приводит к нарушению термолабильности фермента и накоплению гомоцистеина, а гипергомоцистеинемия приводит к патофизиологическим последствиям,реализующимся в виде развития ишемической болезни сердца. Способ осуществляется следующим образом. У пациента производят забор цельной крови. Из нее выделяют сыворотку, после чего методом флуоресцентного поляризационного иммуноанализа(ФПИА) на аппаратепроизводстваопределяют концентрацию сывороточного гомоцистеина. У пациента берут 5 мл венозной крови,выделяют ДНК, проводят ее молекулярно генетический анализ, определяют полиморфизм гена метилентетрагидрофолатредуктаза . Полиморфизм гена рецептораизучают методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием олигонуклеотидных праймеров. Частотное распределение аллелей и генотипов генаоценивают с помощью критериев 2. Фрагменты ДНК амплифицируют на автоматическом термоциклере,подвергают рестрикции и определяют распределение генотипов аллелей гена . При обнаружении генотипа ТТ и повышенном содержании гомоцистеина полученные данные рассматривают как маркер риска развития ишемической болезни сердца. Пример 1. Больной Т., 1960 г. рожд., казах,обратился с жалобами на периодические боли в области сердца сжимающего характера,иррадиирущие в левую подлопаточную область,которые купируются самостоятельно после отдыха через 5-10 мин, одышку при подъеме на 4 этаж,общую слабость. У больного взяли 5 мл венозной крови и выделили ДНК. Методом полимеразной цепной реакции с использованием олигонуклеотидных праймеров определили полиморфизм гена рецептора . У больного выявлен неблагоприятный генотип ТТ гена 677, после чего методом флуоресцентного поляризационного иммуноанализа (ФПИА) на аппаратеопределили концентрацию сывороточного гомоцистеина,который составил 28,2 мкмоль/л, что дает возможность диагностировать ишемическую болезнь сердца. Пример 2. Больной М., казах, 53 года. Поступил с жалобами на боли в области сердца давящего характера, возникающие при физической нагрузке и купируются в покое, одышку при подъеме на 2-ой этаж, общую слабость. Уровень сывороточного гомоцистеина составил 14,4 мкмоль/л. У больного взяли 5 мл венозной крови. При молекулярно - генетическом анализе выделили ДНК и определили С 677 Т полиморфизм гена метилентетрагидрофолатредуктазы. Определили генотип СС, что дает возможность исключить у 20344 данного больного развитие ишемической болезни сердца. Пример 3. Больной С, 1953 г. рожд., казах,поступил с жалобами на боли в области сердца сжимающего характера, иррадиирущие в левую подлопаточную область,купируются приемом нитроглицерина через 2-5 мин, одышку при подъеме на 2 этаж, общую слабость. У больного взяли 5 мл венозной крови и выделили ДНК. Методом полимеразной цепной реакции с использованием олигонуклеотидных праймеров определили полиморфизм гена рецептора. У больного выявлен неблагоприятный генотип ТТ гена 677, после чего определили концентрацию сывороточного гомоцистеина, который составил 26,5 о 1/, что дает возможность прогнозировать повышенный риск развития ишемической болезни сердца. Пример 4. Из контрольной группы у мужчины 35 лет, с отягощенной наследственностью по атеросклерозу взяли 5 мл венозной крови. При молекулярно - генетическом анализе, выделили ДНК, определили С 677 Т полиморфизм гена метилентетрагидрофолатредуктазы,и выявили неблагоприятный аллель Т и генотип ТТ. Уровень сывороточного гомоцистеина составил 18,25, что свидетельствует о риске возникновения ишемической болезни сердца. Было обследовано 62 больных ишемической болезнью сердца и 40 практически здоровых лиц казахской национальности. При сравнительном анализе частотного распределения генотипов и аллелей гена метилентетрагидрофолатредуктазымежду группами больных ИБС и здоровых лиц казахской национальности достоверных различий не выявлено (20,505 р 0,05 21,175 р 0,05,соответственно). Однако, у больных ИБС казахской национальности уровень гомоцистеина (26,50,32 мкмоль/л) был достоверно выше, чем у практически здоровых лиц (13,40,46 мкмоль/л), Р 0,05. Таким образом С/Т полиморфизм гена метилентетрагидрофолатредуктазы не являясь молекулярно-генетическим маркером предрасположенности к развитию ИБС у лиц казахской национальности, несет функцию биохимического маркера риска развития заболевания. В связи с этим, изучена изменчивость показателей гомоцистеина при различных генотипах С/Т полиморфизма гена метилентетрагидрофолатредуктазы (таблица 1) у больных ИБС и практически здоровых лиц Распределение сывороточного гомоцистеина при различных генотипах гена метилентетрагидрофолатредуктазы у больных ИБС Показатели СС 23 15,00,44 Гомоцистеин 0,05 0,05 мкмоль/л Примечание Р 1 - различие между СС и СТ Р 2 - СС и ТТ Р 3 - СТ и ТТ. У больных ИБС казахской национальности при генотипах ТТ и СТ (наличие аллеля Т) уровни гомоцистеина имели наивысшие значения, напротив при генотипе СС - наименьшее, различия между сравниваемыми группами высоко достоверны (Р 0,05). Установленное различие позволяет говорить о том, что неблагоприятный аллель Т связан с повышением концентрации гомоцистеина у больных ИБС в данной этнической группе. Аналогичная закономерность наблюдалась и у практически здоровых лиц при изучении распределения уровней гомоцистеина при различных генотипах изученного полиморфизма. Таблица 2. Распределение сывороточного гомоцистеина при различных генотипах гена метилентетрагидрофолатредуктазы у практически здоровых лиц. Показатели Гомоцистеин мкмоль/л Примечание Р 1 - различие между СС и СТ Р 2 - СС и ТТ Р 3 - СТ и ТТ. У практически здоровых лиц казахской национальности при СС генотипе величина уровня гомоцистеина равна 6,00,44 18,30,65, при СТ и ТТ генотипах содержание гомоцистеина повышается(16,00,37 мкмоль/л и 18,30,65 мкмоль/л), различие между сравниваемыми группами высоко достоверно(р 0,05). Полученные результаты свидетельствуют о том, что генотипы СТ и, особенно, ТТ 3 20344 предрасполагают к значительному повышению уровня гомоцистеина у практически здоровых лиц,что в дальнейшем может привести к развитию ишемической болезни сердца. Данный способ позволяет усовершенствовать диагностику ишемической болезни сердца, и создает новые критерии диагностики и прогнозирования на своевременном этапе. Таким образом, согласно заявляемому способу,корреляция двух показателей - концентрация сывороточного гомоцистеина и наличие генотипа ТТ гена метилентетрагидрофолат редуктазы С 677 Т является маркером предрасположенности к развитию ишемической болезни сердца у мужчин казахской национальности. Определение риска развития ИБС данным способом позволяет разработать контроль на более ранних стадиях,применять в скрининговых исследованиях населения казахской национальности, с помощью которых будут выделены группы лиц повышенного риска развития ИБС для проведения профилактики и снижения уровня смертности от сердечно- сосудистых заболеваний, в частности ишемической болезни сердца. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения риска развития ишемической болезни сердца у мужчин казахской национальности путем исследования крови и выявления корреляции двух показателей, одним из которых является уровень сывороточного гомоцистеина, отличающийся тем, что исследуют кровь мужчин казахской национальности,дополнительно для выявления второго показателя проводят молекулярно-генетический анализ,методом полимеразной цепной реакции определяют полиморфизм гена метилентетрагидрофолатредуктазы 677 и при обнаружении генотипа ТТ и повышенном содержании гомоцистеина судят о возможном развитии ишемической болезни сердца.