Способ диагностики активности туберкулезного процесса

(51) 01 33/53 (2006.01) 01 33/569 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ противотуберкулезных антител методом иммуноферментного анализа,при этом дополнительно в этих же клинических образцах определяют цитокины интерлейкин-2 (- 2),интерлейкин-4 (-4), интерферон-гамма (-) и при значении титра противотуберкулезных антител в крови свыше 0,390 единиц оптической плотности,уровня -2 - менее 165,0 пг/мл, -4 - менее 33,4 пг/мл и - -менее 15,1 пг/мл диагностируют активный туберкулезный процесс. Предлагаемый способ повышает точность диагностики активности,сокращает время постановки диагноза, соответственно позволяет своевременно откорректировать специфическое лечение, значительно сократить время пребывания пациента на больничной койке. Чувствительность способа составляет 83,3.(72) Аленова Арике Хамзовна Касаева Лаззат Татибековна Бекмуратов Ермек Бекмуратович Нуранова Нурбике Турабековна(73) Государственное учреждение Национальный центр проблем туберкулеза Министерства здравоохранения Республики Казахстан(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО ПРОЦЕССА(57) Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и может быть использовано для диагностики активности туберкулеза легких. Способ диагностики активности туберкулезного процесса включает определение в крови титра 21814 Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и может быть использовано для диагностики активности туберкулеза легких. По данным современных научных исследований в Республике Казахстан отмечается рост эпидемиологических показателей по туберкулезу, в связи с чем, сохраняют свою актуальность вопросы диагностики, лечения туберкулеза и выявления активности имеющегося туберкулезного процесса. Активность туберкулезного процесса важный клинический показатель, однако, его своевременное выявление затруднено в связи с полиморфизмом клинико-рентгенологической картины заболевания,изменившимися свойствами микобактерий туберкулеза. Известен способ диагностики активности туберкулезного процесса,включающий иммуноферментный анализ крови с определением титра противотуберкулезных антител. Наличие в крови высокого титра противотуберкулезных антител позволяет диагностировать активный туберкулезный процесс.(Чернушенко Е.Ф., Петренко В.М., Панасюкова О.Р. Иммунология прогрессирующих форм туберкулеза легких. В кн.Туберкулез сегодня.Москва. -2000. -с.55-56.) Недостатком данного способа является его невысокая диагностическая точность, поскольку при тяжелом процессе, анергии могут быть инвертные результаты. Наиболее близким к заявляемому является способ диагностики активности туберкулезного процесса, включающий исследование мокроты методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и бактериоскопии, определение в крови титра противотуберкулезных антител методом иммуноферментного анализа и определение жизнеспособности микобактерий туберкулеза (МТ) путем окрашивания мазка мокроты малахитовой зеленью и сафранином. При позитивном результате ПЦР, титре противотуберкулезных антител более 0,220 ед. и наличии более четырех живых микобактерий туберкулеза на 100 полей зрения диагностируют активный туберкулезный процесс.(Предварительный патент 13463, МПК 01 33/53, 01 33/569, дата публикации 03.07.2003 г.) При высокой диагностической ценности,недостатком данного способа является его трудоемкость, длительность и многоэтапность исследования - ПЦР, бактериоскопия, окрашивание МТ занимают не менее 3 дней, ПЦР кроме того,является дорогостоящим и не всегда доступным методом исследования, так как для реализации этого способа необходимо наличие ПЦР-лаборатории. Задачей изобретения является разработка высокочувствительного способа диагностики активности туберкулезного процесса. Техническим результатом способа является сокращение времени постановки диагностического исследования,снижение трудоемкости его проведения,что соответственно позволит своевременно откорректировать специфическое 2 лечение, сократить время пребывания пациента на больничной койке. Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики активности туберкулезного процесса, включающем определение в крови титра противотуберкулезных антител методом иммуноферментного анализа, отличительной особенностью, согласно изобретению, является то, что дополнительно в этих же клинических образцах определяют цитокины интерлейкин-2 (2), интерлейкин-4 (-4), интерферон-гамма (-) и при значении титра противотуберкулезных антител в крови свыше 0,390 единиц оптической плотности, уровня -2 - менее 165,0 пг/мл, -4 менее 33,4 пг/мл и - -менее 15,1 пг/мл диагностируют активный туберкулезный процесс. Способ осуществляется следующим образом У больного туберкулезом через неделю после госпитализации из локтевой вены утром натощак забирают 3 мл крови в центрифужную пробирку без гепарина для постановки иммуноферментного анализа. Определение противотуберкулезных антител проводят с тест-системой АТ-Туб-Бестстрип Новосибирского ЗАО Вектор-Бест(предназначен для определения суммарного пула антител, ,к возбудителю туберкулеза, тем самым охватывается больший спектр вариантов антительного ответа), а цитокины интерлейкин-2(-) с тест системами Цитокин СанктПетербургского ТОО Протеиновый контур. Реакцию проводят строго в соответствии с прилагаемыми инструкциями на иммуноферментном анализаторе. Методика проведения ИФА тест-системой АТТуб-Бест-стрип следующая метод двух стадийный. Антигены микобактерий туберкулеза А 60 сорбированы на твердую фазу плашечного формата. После внесения испытуемых сывороток поэтапно добавляют пероксидазный конъюгат-, а затем субстратный раствор с ТМБ-красителем. Результат учитывается фотометрически по способности красителя поглощать световой пучок и оценивается относительно отрицательного контроля тест-систем. Учет результатов в плашечном формате ведут на иммуноферментном анализаторе(Италия) по величине оптического поглощения красителем светового пучка с длиной волны 450 нм. Время проведения анализа - 4-4,5 часа. Принцип проведения ИФА тест-системами Цитокин для определения уровня -2, -4 итакой же. Используют два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к интерлейкинам. Результаты считывают с построенной калибровочной кривой, умножив полученное значение испытуемого образца на коэффициент раститрованного 9 раз стандарта. Для каждого цитокинового стандарта свои принципы раститровки. Одновременное исследование сыворотки крови больных методом ИФА на предмет содержания противотуберкулезных антител и цитокинов -2, -4 и -, позволит определить активность туберкулезного процесса в более ранние 21814 сроки и начать целенаправленную специфическую терапию. При значении титра противотуберкулезных антител в крови свыше 0,390 ед.о.п., уровня -2 менее 165,0 пг/мл, -4 - менее 33,4 пг/мл и - менее 15,1 пг/мл диагностируют активный туберкулезный процесс. Время определения активности туберкулезного процесса по предлагаемому способу - сутки с момента взятия крови (по прототипу -3-4 дня). Чувствительность способа - 83,3. Клинический пример. Больной Н.К, 33 года, поступил в легочнохирургическое отделение 2 НЦПТ с жалобами на сухой кашель, фебрильную температуру, одышку и боли в левой половине грудной клетки. Перед поступлением в ЛХО НЦПТ, считал себя больным в течение 1 месяца. Контакт с больными туберкулезом отрицает. Обратился в общую лечебную сеть. Рентгенография грудной клетки выявила экссудативный плеврит неясной этиологии. Проведено 2 курса антибиотикотерапии по 10 дней,после чего общее самочувствие несколько улучшилось, но позитивной рентгендинамики не отмечалось. Кашель, температура и боли не проходили. Больной направлен на обследование в НЦПТ. Бактериоскопическое обследование мокроты на МТ было отрицательным. На -грамме от 26.01.07 костальная тень жидкости в плевральной полости от -го межреберья до диафрагмы. По остальным полям без очаговых теней. Корень слева завуалирован. Сердце незначительно смещено вправо. Объективно кожные покровы бледные. В покое одышки нет. Перкуторный звук укорочен слева с середины межлопаточного пространства до подмышечной области, в этой же проекции аускультативно дыхание не прослушивалось. Сердечные тоны слегка приглушены. Артериальное давление - 100/55 мм рт. ст., печень у края реберной дуги. По другим органам патологии не выявлено. Данные лабораторного исследования в гемограмме было повышено количество сегментоядерных лейкоцитов до 79 и СОЭ до 18 мм в час снижено количество лимфоцитов до 21,Н до 100 г/л, ц.п. до 0,98 ед. На основании анамнеза, данных клиниколабораторного обследования выставлен клинический диагноз Левосторонний туберкулезный плеврит,категория, МТ(-). Через неделю после госпитализации больной обследован по предлагаемому способу для выяснения активности процесса. Показатели иммунологического обследования на седьмой день госпитализации следующие титр противотуберкулезных антител в сыворотке крови 0,403 ед. о.п. Содержание цитокинов -2 составило На основании обследования по предлагаемому способу диагностирован активный туберкулезный процесс в плевре. Больному 5.02.07 была проведена торакоскопия. Аспирировано 2500 мл жидкости. Париетальная плевра усеяна множеством белесоватых бугорков. Экссудат направлен на бактериоскопию и бакпосев. 10.02.07 получен результат - микобактерий туберкулеза не обнаружено. Результат гистологического исследования кусочков плевры от 9.02.07 свидетельствовал об активности туберкулезного процесса в плевре. Больному назначена противотуберкулезная терапия в режимекатегории. На 10 день госпитализации была сделана повторная рентгенограмма Слева жидкость не определяется,незначительно утолщена плевра, единичные спайки,т.е. наметилась четкая позитивная динамика. На 12 сутки больной был выписан на амбулаторное долечивание по месту жительства. Предложенным способом произведены исследования сыворотки крови 40 больных туберкулезом легких. Оценка титра ПТА и цитокинов проводилась на ИФА анализаторе , Италия. У лиц с активным туберкулезом легких (1-ая группа - 30 человек) уровень ПТА в ИФА составил -0,545 ед.о.п 0, 07 ед.о.п -2 125,211,5 пг/мл, -4 - 31,12,2 пг/мл и - 11,11,5 пг/мл. (Р 1-2 0,05). Все показатели достоверно отличались от аналогичных показателей в группе с неактивным туберкулезным процессом в легких (2-ая группа - 10 человек) - уровень ПТА в ИФА составил 0,210 ед.о.п 0,04 ед.о.п -2 - 345,621,1 пг/мл, -4- 59,54,2 пг/мл и - - 46,53,5 пг/мл (Р 120,05). Таким образом, предлагаемый способ является высокочувствительным - 83,3, при этом сокращает время постановки диагноза, снижает трудоемкость диагностического исследования,позволяет своевременно откорректировать специфическое лечение, сокращает время пребывания пациента на больничной койке. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ диагностики активности туберкулезного процесса, включающий определение в крови титра противотуберкулезных антител методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что дополнительно в этих же клинических образцах определяют цитокины интерлейкин-2 (-2),интерлейкин-4 (-4), интерферон-гамма (-) и при значении титра противотуберкулезных антител в крови свыше 0,390 единиц оптической плотности,уровня -2 - менее 165,0 пг/мл, -4 - менее 33,4 пг/мл и - - менее 15,1 пг/мл диагностируют активный туберкулезный процесс.