Вакцина против трихофитии верблюдов

(51) 61 39/116 (2006.01) 61 31/10 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной с высокоэффективным средством специфической профилактики и лечения верблюдов к местным видам возбудителя трихофитии. Вакцина против трихофитии верблюдов,включающий антиген из штамма гриба, защитную среду и дистиллированную воду, она в качестве антигена содержит штамм гриба-0319, а в качестве защитной среды она содержит обезжиренное молоко и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0319(72) Умитжанов Мынбай Бижанов Болат Рахметович Боранбаева Райхан Султанмуратовна Арысбекова Алтынай Танирбергеновна(56) Авторское свидетельство СССР 1190574. кл. А 61 К 39/00, 1984(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ ВЕРБЛЮДОВ(57) Изобретение относится к области ветеринарной микологии и может быть использовано для профилактики и лечения дерматомикоза,вызванного возбудителем трихофитии верблюдов. 21186 Изобретение относится к области ветеринарной микологии и может быть использовано для профилактики и лечения дерматомикоза,вызванного возбудителем трихофитии верблюдов. Известна вакцина против трихофитии верблюдов, включающая антигены из штаммов, сахарозу, желатин и дистиллированную воду Авторское свидетельство СССР 1190574, кл. А 61 К 39/00, 1984. Недостатком указанной вакцины является то, что она не полностью обеспечивает создания иммунитета против трихофитии, обусловленной в условиях Республики Казахстан, наиболее часто поражающих видом трихофитии верблюдов, гриба рода . Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики и лечения дерматомикоза верблюдов к местным видам гриба рода . Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной с высокоэффективным средством специфической профилактики и лечения верблюдов к местным видам возбудителя трихофитии. Вакцина против трихофитии верблюдов,включающий антиген из штамма гриба, защитную среду и дистиллированную воду, она в качестве антигена содержит штамм гриба-0319, а в качестве защитной среды она содержит обезжиренное молоко и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0319(200-250 млн/см 3 микроконидии) 10,0-15,0 обезжиренное молоко 20,0-25,0 физиологический раствор остальное. Штамм гриба, используемые для изготовления вакцины против трихофитии верблюдов,депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО НИИВ (КазНИВИ) и обладает следующими свойствами. Штамм гриба-0319. Культуральные свойства. Культуры гриба медленно растущие, рост колоний заметен в течение 24 ч после посева, на 4-5-й день начиналось образование типичных канделябров и рогов северного оленя, через 7 дней гриб разрастается по всему объему среды. Первичные культуры развивается очень медленно, к 30-му дню формируется сероватые, плоские, плотносросшиеся с субстратом и глубокими отпрысками в питательную среду колонии диаметром от 7 до 10 мм. Форма колонии ровная,бархатистая концентрическими кругами. Размер колонии достигает от 25 до 40 мм. Цвет колонии бежевый,возвышенный, бугристый, складчатый. Обратная сторона колонии окрашена в коричневый цвет. Обладает полиморфизмом. В питательную среду выделяет коричневый пигмент. Гифы разной ширины (от 1,6 до 9 мм), которая преобладают широкий неравномерно утолщенной ветвящийся 2 мицелий. Часто можно обнаружит ветвление конечных гиф в виде рогов северного оленя. При созревании культур образуются цепочки артроспор(6-18 мкм), а затем обильные хламидоспоры (6-17 мкм). Очищенные культуры гриба на питательных средах увеличивают энергию роста и способствуют спорообразованию. Степень развития мицелия приходится на 18-21 день. Размеры макроконидии от 16 до 50 мкм, а микроконидии - значительно варьируют в размерах 2,5-5,0 х 3,0-10,0 мкм. Биохимические свойства. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 не испытывают потребности в витаминах для роста и спорообразования. Никатиновая, фолиевая кислоты,тиамин, придоксин, рибофлавин, цианкобаламин не стимулируют развитие культур данного штамма. Сероводород и индол не образуют. Антигенные свойства. На введения культуры штамма в организме верблюжат, кроликов и морских свинок образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Маркерные признаки. Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 200-250 млн/см 3. Макроконидии отсутствуют или единичные, удлиненно-овальные. В очищенных культурах с увеличением микроконидии образуются в небольшом количестве макроконидии (размером от 16 до 50 мкм). Микроконидии отсутствуют или единичные, значительно варьируют в размерах 2,55,0 х 3,0-10,0 мкм. Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду аэроб. Не обладает метаболическими свойствами. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 патогенен для верблюдов, человека и лабораторных животных,обладают цитопатогенным действием на культуры клеток. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма в дозе 20 х 106 микроконидии создают напряженный иммунитет у привитых верблюжат, кроликов и морских свинок к последующему заражению трихофитией с продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 безвреден для верблюжат, кроликов и морских свинок в дозе 20 х 106 микроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 слабореактогенен для верблюдов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфически локализованный поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение 2-х недель. Спророобразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 200-250 млн/см 3. 21186 Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0319 КазНИВИ 3 стабильно сохраняются на протяжении 3-4 лет при условии редких пересевов (2-3 раза в год) не ослабляет патогенные свойства. Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока штамм гриба-0319 КазНИВИ 3 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течение 6 месяцев, при 20 С ниже в течение 2 года. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия с рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 28-30 С в течении 5 час, при 4 С - 3 сут. Пример 1. Для получения вакцины против трихофитии верблюдов берут 18 сут культуру штамма-0119,и выращивает в матровых колбах на сусло-агаре при рН 7,2-7,4 и температуре 26-28 С в течение 21 дня. Выращенную грибницу культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и помещают в стерильные банки. Грибную массу штамма гомогенизируют в миксерах, затем с помощью стерильного физиологического раствора,полученные грибные гомогенаты штамма ресуспендируют до концентрации 200-250 млн/см 3. К полученной грибковой суспензии добавляет равное количество стабилизатора (рН 7,2-7,4),стерильного обезжиренного молока. Все тщательно перемешивают, разливает в стерильные флаконы объемом 10,0, 20,0 и 40,0 см 3 в количестве 5,0, 10,0 и 20,0 см 3 полуфабриката (грибной суспензии и стабилизатора), после чего производят сублимацию содержимого флаконов, закрывают их резиновыми пробками и завальцовывают алюминиевыми колпачками. Пример 2. Вакцину против трихофитии верблюдов используют внутримышечно, двукратно с интервалом 14 дней при соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0319(200-250 млн/см 3) 10,0 обезжиренное молоко 20,0 физиологический раствор остальное Пример 3. Вакцину против трихофитии верблюдов используют так же, как в примере 2 при соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0319 Пример 4. Вакцину против трихофитии верблюдов используют так же, как в примере 2 при соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0319(200-250 млн/см 3) 15,0 обезжиренное молоко 25,0 физиологический раствор остальное Готовая вакцина против трихофитии верблюдов представляет собой однородную пористую сухую массу в виде таблетки серого цвета. Вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих, темных помещения при температуре 2-10 С. Срок годности вакцины 12 мес со дня окончания сублимации. К вакцине прилагается разбавитель в объеме соответствующем количеству доз, находящемся во флаконе с вакциной. На одну дозу вакцины необходимо 1,0 см 3 разбавителя для растворения лиофилизированной вакцины. Пример 5. Для изучения иммуногенной активности вакцины против трихофитии верблюдов брали две группы животных, в каждой из которых находилось по пять голов верблюдов (верблюжата). Каждому животному опытной группы вводили внутримышечно по 1,0 см 3 ресуспензированной вакцины в область крупа дважды, с интервалом 14 дней. Спустя 25-28 дней после второй иммунизации,все 5 голов животных опытной группы, а также по 5 голов из контрольной группы(не иммунизированных животных) экспериментально заражали гомологичной вирулентной культурой из рода . В течение 30-35 дней за опытными и контрольными группами животных вели наблюдение, а клинический осмотр животных осуществляли через каждые 3-5 дней. От животных с клиникой трихофитии отбирали патологический материал, при микроскопии которого и высевы на питательные среды уточняли визуально полученный диагноз заболевания данных животных трихофитией. При обнаружении у животных трихофитии, а также подтверждения диагноза,животные подвергались двух и трехкратному введению терапевтической дозы вакцины против трихофитии верблюдов в тех же интервалах, что и профилактические дозы данного биологического препарата. Подведение результатов проведенной работы учитывалось спустя 25-30 дней после второй иммунизации заболевших животных терапевтической дозой вакцины против трихофитии верблюдов. Результаты иммуногенной активности(профилактической и терапевтической дозы) вакцины против трихофитии верблюдов отражены в таблицах 1 и 2. Из таблиц 1 и 2 видно, что вакцина против трихофитии верблюдов при ее проверке на иммуногенную активность проявила высокую профилактическую и терапевтическую эффективность, в том числе и при лечении заболевших животных с явной клинической формой трихофитии. Использование вакцины против трихофитии верблюдов в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по 3 21186 профилактике и терапии верблюдов от часто поражающего местного вида возбудителя Профилактическая эффективность вакцины против трихофитии верблюдов Вид животных и Количество голов Результаты опыта (количество заболевших верблюдов при их возраст экспериментальном заражении гомологичным вирулентным штаммом гриба родаНе заболело Диагноз подтвердился Опытные группы (дважды иммунизированные животные) Верблюжата до 5 5 6 мес Контрольные группы (не иммунизированные животные) Верблюжата до 5 1 4 6 мес Диагноз не подтвердился Таблица 2. Проверка терапевтической эффективности вакцины против трихофитии верблюдовгруппы животных 1 Вид животных и их возраст Верблюжата до 6 мес ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина против трихофитии верблюдов,включающий антиген из штамма грибаи защитную среду, отличающаяся тем,что она в качестве антигена содержит штамм гриба-0319, а в качестве защитной среды обезжиренное молоко и Результаты исследования выздоровело не выздоровело 5 0 физиологический раствор при соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0319(200-250 млн/см 3 микроконидии) обезжиренное молоко физиологический раствор