Вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов

(51) 61 39/116 (2006.01) 61 31/10 (2006.01) 12 1/14 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной с высокоэффективным средством специфической профилактики и лечения собак,кошек, пушных зверей и кроликов от указанного возбудителя дерматомикозной инфекции. Вакцина против дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов, содержащая антиген из штамма грибаи защитную среду, в качестве антигена содержит штамм гриба-0316, а в качестве защитной среды содержит обезжиренное молоко и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0316(72) Умитжанов Мынбай Бижанов Болат Рахметович Боранбаева Райхан Султанмуратовна Арысбекова Алтынай Танибергеновна(54) ВАКЦИНА ПРОТИВ ДЕРМАТОМИКОЗОВ СОБАК, КОШЕК, ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ И КРОЛИКОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии,микологии,микробиологии,иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов. 21187 Изобретение относится к области биотехнологии,микологии,микробиологии,иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов. Известна вакцина против дерматомикозов сельскохозяйственных животных и кроликов,содержащая антиген штамма грибаВГНКИ 27, сахарозу, желатин и дистиллированную воду Патент Российской Федерации 2013445, кл. С 121/14, А 61 К 39/00, 1992. Недостатком вакцины против дерматомикозов сельскохозяйственных животных и кроликов является, то, что она не достаточно качественно защищает от указанного возбудителя дерматомикозной инфекции. Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики и лечения дерматомикозов сельскохозяйственных и плотоядных животных, а также кроликов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной с высокоэффективным средством специфической профилактики и лечения собак,кошек, пушных зверей и кроликов от указанного возбудителя дерматомикозной инфекции. Вакцина против дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов, содержащий антиген из штамма грибаВГНКИ 27, сахарозу, желатин и дистиллированную воду,она дополнительно содержит антиген из штамма гриба-0316, а в качестве защитной среды обезжиренное молоко и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0316(200-250 млн/см 3 микроконидии) 10,0-15,0 обезжиренное молоко 20,0-25,0 физиологический раствор остальное Штамм гриба, используемый для изготовления вакцины против дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов, депонированы в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО НИИВ (КазНИВИ) и обладает следующими свойствами. Штамм гриба-0316. Морфологические признаки. Молодые клетки штамм гриба окрашивается грамположительно,мицелий ровный, ветвящийся, шириной 0,6-3 мкм,встречаются спиралевидные и кольцевидные окончания гиф. Микроконидии диаметром 2-4 мкм размер макроконидии - 5-10 х 30-45 мкм артроспор отсутствуют хламидиоспоры единичные или отсутствуют. Штамм гриба-0316 имеет неокрашенный ровный,ветвистый,септированный мицелий, распадающихся на фрагменты, терминальные гифы иногда образуют спирали (обычно до 5-х завитков). Микроконидии 2 многочисленные, круглые, реже грушевидные и удлиненные. На сусло-агаре штамм образует хорошо развитые белые, плоские, мучнистые колонии с ровным краем. Макроконидии немногочисленные, с закругленными концами или отсутствуют. Культуральные свойства. На сусло агаре к 14-му дню формируются колонии белые, желтоватые,розоватые, плоские, ровные, мучнистые, зернистые или бархатистые, растущий край розовый или звездчатый, обратная сторона колонии желтоватая или красно-коричневая, колония покрывает всю поверхность питательной среды. Молодые колонии белые, с возрастом слегка желтеют. Встречаются приподнятые колонии, представленные в основном белым воздушным мицелием. Культура испытывает потребность в витаминах, аминокислотах и минеральных веществах для увеличения роста и спорообразования. Спорообразования. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 430,0 млн/см 3. Аэроб. Оптимальная скорость роста при температуре 26-28 С, рН 7,2-7,4. Особенности ультраструктуры. Мицелий ровный ветвящийся диаметром от 0,6-3,0 мкм, встречается спиралевидные и кольцевидные окончания гиф,имеет завитки до 4-5 раз. Микроконидии многочисленные круглые или грушевидные диаметром до 5 мкм,макроконидии немногочисленные с закругленными концами,удлиненно-овальные длиной до 45 мкм разделенный от 3 до 5 клеток. Хламидоспоры редкие, округлые диаметром до 10 мкм. Артроспоры отсутствуют. Биохимические свойства. Ферментативная активность гриба в отношении белков, углеводов и жиров более яркая, чем у других видов дерматофитов. Антигенные свойства. На введение культуры штамма-0316 в организме кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Безвредность. Штамм гриба-0316 слабо реактогеннен для кроликов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 14 дней на месте инъекции развивается специфически локализованный, поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение последующих 12-15 дней. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма-0316 в дозе 30 х 106 микроконидии, создается напряженный иммунитет у кроликов к последующему заражению трихофитией, продолжительностью не менее 24 мес. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0316 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность штамма при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба 21187-0316 стабильно сохраняются на протяжении 5 лет в лиофильно высушенном состоянии (защитная среда обезжиренное молоко) и свыше 6 мес. при хранении в нативном состоянии(засеянных на пробирки с сусло-агаром) при температуре 2-8 С. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим 0,85 раствором хлористого натрия при рН 7,4 гриб-0316 сохраняет биологическую активность при температуре 26-28 С в течение 6 часов, а при 4 С - 3 сут. Маркерные признаки штамма-0316. Физиологические - хемогетеротроф. Биохимические - из углеводов постоянно и хорошо усваивает сахарозу. Серологические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 11280. Патогенные свойства. Штамма-0316 патогенен для диких,домашних и лабораторных животных. Легко инокулируется при втирании культур и патологического материала в кожу, вызывая через 4-5 дней воспалительный процесс с экссудацией,различной толщины корками,сдираемыми животными при сильном зуде очагов поражений. Втирание по патогенности слабых штаммов сопровождается более легкими, скоропреходящими поражениями, с незначительным шелушением и покраснением на месте втирания. Пример 1. Для получения вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов берут 18 сут культуру штамма-0316 и выращивают в матровых колбах на сусло-агаре при рН 7,2-7,4, при температуре 26-28 С в течение 21 дня. Выращенную грибницу культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и помещают в стерильные банки. Грибную массу штамма гомогенизируют в миксерах,затем с помощью стерильного физиологического раствора, полученные грибные гомогенаты штамма ресуспендируют до концентрации 200-250 млн/см 3. К полученной грибковой суспензии добавляют равное количество стабилизатора (рН 7,2-7,4), стерильного обезжиренного молока. Все тщательно перемешивают,разливают в стерильные флаконы объемом 10,0,20,0 и 40,0 см 3 в количестве 5,0, 10,0 и 20,0 см 3 полуфабриката (грибной суспензии и стабилизатора), после чего производят сублимацию содержимого флаконов, закрывают их резиновыми пробками и завальцовывают алюминиевыми колпачками. Пример 2. Вакцину против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов используют внутримышечно,двукратно с интервалом 14 дней при соотношении компонентов,об. антиген из штамма-0316 физиологический раствор остальное. Пример 3. Вакцину против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов используют так же, как в примере 2 при соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0316(200-250 млн/см 3) 12,0 обезжиренное молоко 22,0 физиологический раствор остальное. Пример 4. Вакцину против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов используют так же, как в примере 2 при соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0316 (200-250 млн/см 3) 15,0 обезжиренное молоко 25,0 физиологический раствор остальное. Готовая вакцина против дерматомикозов собак,кошек, пушных зверей и кроликов представляет собой однородную пористую сухую массу в виде таблетки серого цвета. Вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих,темных помещения при температуре 2-10 С. Срок годности вакцины 12 мес. со дня окончания сублимации. К вакцине прилагается разбавитель в объеме соответствующем количеству доз, находящемся во флаконе с вакциной. На одну дозу вакцины необходимо 1,0 см 3 разбавителя для растворения лиофилизированной вакцины. Пример 5. Для изучения иммуногенной активности вакцины против дерматомикозов собак,кошек, пушных зверей и кроликов брали три группы животных (по пять голов), в каждой из которых находилось по три вида животных (собаки, кошки и кролики). Каждому животному опытной группы вводили внутримышечно по 1,0 см 3 ресуспензированной вакцины в область крупа дважды, с интервалом 14 дней. Спустя 25-28 дней после второй иммунизации, все 15 голов животных трех опытной группы, а также по 3 головы из трех контрольных групп(не иммунизированных животных) экспериментально заражали аналогичными вирулентными культурами рода. В течение 30-35 дней за опытными и контрольными группами животных вели наблюдение, а клинический осмотр животных осуществляли через каждые 3-5 дней. От животных с клиникой трихофитии отбирали патологический материал, при микроскопии которого и высевы на питательные среды уточняли визуально полученный диагноз заболевания данных животных дерматомикозами. При обнаружении у животных трихофитии, а также подтверждения диагноза,животные подвергались двух и трехкратному введению терапевтической дозы вакцины в тех же интервалах, что и профилактические дозы данного биологического препарата. Подведение результатов проведенной работы учитывалось спустя 25-30 дней после второй иммунизации заболевших животных терапевтической дозой вакцины против 3(профилактической и терапевтической дозы) вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов отражены в таблицах 1 и 2. Из таблиц 1 и 2 видно, что вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов при ее проверке на иммуногенную активность проявила высокую профилактическую и терапевтическую эффективность, в том числе и при лечении заболевших животных с явной клинической формой трихофитии. Использование вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по профилактике и терапии плотоядных животных и кроликов от возбудителей дерматомикозов собак,кошек, пушных зверей и кроликов в Республике Казахстан. Таблица 1 Профилактическая эффективность вакцины против дерматомикозов собак,кошек, пушных зверей и кроликов Результаты опытов (количество заболевших животных при экспериментальном заражении вирулентными эпизоотическими культурами гриба рода ) Не заболело Заболело Диагноз Диагноз не подтвердился подтвердился Опытные группы (дважды иммунизированные животные) Собаки 5 5 Кошки 5 5 Кролики 5 5 Контрольные группы Таблица 2 Проверка терапевтической эффективности вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликовгруппы животных 1 2 3 Вид животных и их возраст Собаки Кошки Кролики ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Вакцина против дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов, содержащая антиген из штамма грибаи защитную среду, отличающаяся чем, что она в качестве антигена содержит штамм гриба-0316, а в качестве защитной среды содержит обезжиренное молоко и физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, об. антиген из штамма-0316 Результаты исследования выздоровело не выздоровело 5 0 5 0 5 0