Способ определения эффективности антимикотических препаратов in vitro

(51) 61 31/00 (2006.01) 61 17/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Способ определения эффективности антимикотических препаратов,предусматривает измельчение до порошкообразного состояния таблеток (гранул) антимикотического препарата, предварительное растворение в 2 мл диметилсульфоксида (димексида) и последующее смешивание с 18 мл среды Сабуро, подогретой до температуры 50 градусов Цельсия. Способ используется для прогнозирования эффективности антимикотических препаратов и уточнения причин их недостаточной эффективности в клинике. Оценка способа осуществлена на материалах обследования 73 человек, больных микроспорией,вызванной. Способ позволяет обеспечить определение эффективности антимикотических препаратов в отношении конкретных штаммов возбудителей дерматофитий.(72) Нурмухамбетов Жумаш Наскенович Сундеева Елена Алексеевна(73) Республиканское государственное казенное предприятие Семипалатинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Республики Казахстан(56) Павлович А.С. Практическое руководство по микробиологии, 1982(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ АНТИМИКОТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к области медицины, а именно - дерматовенерологии и может быть использовано для определения эффективности лечения дерматофитий. 20937 Изобретение относится к области медицины, а именно дерматовенерологии и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения дерматофитий с помощью антимикотических препаратов, принимаемых . Применяемые в клинической практике современные антимикотические препараты обладают достаточно высокой эффективностью в отношении возбудителей грибковых заболеваний кожи и ее придатков. В то же время, учащаются случаи выявления штаммов возбудителей,резистентных к тем или иным антимикотикам. В особенности это относится к возбудителю. В ряде случаев это приводит к отсутствию клинической эффективности антимикотической терапии,необходимости проведения повторных курсов лечения, увеличения дозы или замены препарата. Поэтому возникает вопрос об определении чувствительности возбудителей дерматофитий к антимикотическим препаратам до начала терапии, а также выявления причин резистентности к проводимому лечению. Известен способ определения эффективности некоторых растворимых в водных средах антибиотиков,предусматривающий измельчение препаратов и помещение их в виде порошка в лунки, сделанные в среде для посева возбудителя Павлович А.С. Практическое руководство по микробиологии. 1982 Однако ввиду минимальной растворимости современных антимикотических препаратов в водных средах луночный способ не позволяет обеспечить определение их дозы, соответствующей стандартной терапевтической. Т.е., при помещении любого количества препарата в лунки диаметр зоны отсутствия роста грибка будет примерно одинаковым, поскольку зависит только от скорости диффузии препарата в среду. Выходом представляется достижение растворимости антимикотических препаратов,реализуемое посредством использования полярных органических растворителей, не обладающих фунгицидным эффектом. Задачей изобретения является разработка способа определения эффективности антимикотических препаратов,с использованием соответствующего подхода к повышению их растворимости в водных средах. Способ осуществляется следующим образом После измельчения до порошкообразного состояния таблетки (гранулы) антимикотического препарата его предварительно растворяют в 2 мл диметилсульфоксида(димексида),а затем смешивают с 18 мл среды Сабуро, подогретой до температуры 50 градусов Цельсия. Среду заливают в чашку Петри. Для посева используют пораженные волосы из очагов микроспории или чешуйки кожи с периферической части очага на гладкой коже у пациентов, ранее не получавших лечение. Исследовались четыре группы препаратов кетоканазол,итраконазол,тербинафин,гризеофульвин. Для предварительного анализа использовали дозы антимикотика 116, 18, 14, 12, 11 и 21 терапевтической. Таблетки препаратов предварительно измельчали до порошкообразного состояния. Данные,характеризующие эффективные концентрации препаратов при использовании предлагаемого способа, представлены в табл. 1. Из полученных, результатов следует, что предварительное растворение препаратов в димексиде позволяет добиться подавления роста колонийпри использовании доз препаратов в 20 мл среды в 2 раза меньшей, чем терапевтическая. Дальнейшая оценка способа в клинических условиях производилась при использовании данной концентрации препаратов. Таблица 1 Степень подавления роста колонийпри различной концентрации антимикотических препаратов, разведенных в димексиде и далее - в среде Сабуро Препарат доза,мг Кетоканазол Интраконазол Тербинафин Гризеофульвин Степень подавления роста колоний подав- доза, подав- доза, подав- доза, подав- доза, подав- доза, подавления мг ления мг ления мг ления мг ления мг ления роста роста роста роста роста роста 0 25,0 10,0 50,0 30,0 100,0 95,0 200,0 100 400,0 100 0 12,5 5,0 25,0 15,0 50,0 75,0 100,0 90,0 200,0 100 0 31,3 10,0 62,5 25,0 125,0 95,0 250,0 95,0 500,0 100 0 15,6 10,0 31,3 30,0 62,5 90,0 125,0 100 250,0 100 Разработанный способ определения чувствительности грибовк антимикотическим препаратамбыл в дальнейшем использован в клинической практике, а именно - в исследовании для уточнения причин снижения эффективности различных 2 20937 В качестве препарата, выбранного для клинической оценки эффективности разработанного способа, использован тербинафин (экзефин). Обследования в общей сложности проведены у 73 человек, больных микроспорией. Данные о распределении полученных результатов исследованияпредставлены в табл. 2. Таблица 2 Распределение результатов посева колонийна среду с содержанием тербинафина,растворенного в димексиде, равным 125 мг/20 мл Наличие роста колоний Имеется Отсутствует Как видно из представленных данных, наличие роста колоний имелось в 30,1 случаев, а при установленной клинической эффективности препарата (в первой серии опытов) только в 5. Далее нами был проведен сопоставительный анализ влияния тербинафина н рост колонийи эффективности его применения в клинике Сравнительная характеристика влияния тербинафина на рост колонийи клинической эффективности препарата Из данных, представленных в таблице 3 видно,что при полной эффективности первого курса лечения больных микроспорией тербинафином были получены вполне соответствующие данным предшествующего анализа чувствительности метода и ожиданные результаты. Отсутствие роста колоний в этой подгруппе отмечалось в 96,4 случаев. В то же время, в группе с недостаточной эффективностью первого курса лечения больных микроспориейналичие роста колоний отмечалось только в 22 случаях, а недостаточная эффективность препарата имела место у 45 больных. В то же время, было зарегистрировано практически полное совпадение с группой недостаточной клинической эффективности тех больных, у которых имелся рост колоний. Эти данные позволили нам обоснованно предположить наличие у 21 больного наличия штаммов,относительно резистентных к действию тербинафина. У больных этой подгруппы тербинафин в дальнейшем лечении был заменен на итраконазол. Пример Пример Больной С, 12 лет, учащаяся,история болезни 897 от 011.08.06. Диагноз Микроспория волосистой части головы. Жалобы на наличие очагов выпадения волос, зуд в очагах. Патологический кожный процесс локализуется на волосистой части головы в области затылочной и теменной области в виде пяти округлых очагов диаметром 5-6 см, резко отграниченных от здоровой кожи валиком из папул и везикул, в очаге бледно-розовая эритема,инфильтрация, мелкопластинчатое шелушение. В очагах волосы обломаны на Высоте 5-6 мм, легко выдергиваются. Микроскопически обнаружен волос содержащий споры гриба и нити мицелия, в посеве рост. Для выбора препарата максимально чувствительного для данного штамма было проведено определение чувствительности к четырем группам антимикотиков(тербинафину,итраконазолу,кетоконазолу и гризеофульвину). Наиболее чувствительным оказался итраконазол и который не дал рост колоний, который был назначен в качестве препарата выбора. Все три проведенные контроли излеченности, дали хороший результат,что подтвердило правильность выбора. 20937 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ определения эффективности антимикотических препаратов при дерматофитиях,включающий посев культуры гриба на среду с содержанием препарата, отличающийся тем, что антимикотический препарат предварительно растворяют в димексиде и затем в нагретой до 50 С среде Сабуро в концентрациитерапевтической дозы на 20 мл среды.