Способ получения иммуностимулятора

НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения биолотически активных веществ и 3 ортанов Животных, и может быть ис пользовано для иммуносттипиуляции больных с тнойно-септическими заболеваниями. Цель и 3 обретения - повышение качества целевото продукта. Поставленная Цель достигается тем, что проводят перфузию изолированной селезенки свиньи в течение 30-45 мин при 37 С со скоростью 55-60 мл/мин кровезаменителями.Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения биологически активных препаратов из органов животных. и может быть применен для иммуностимуляции у больных с гнойно-септическими заболеваниями.Целью изобретения является повышение качества целевого продукта.Цель достигается тем, что биологически активное вещество получают путем пропускания кровезаменителей через сосудистую систему целой селезенки свиньи, находящейся в нормотермических условиях (37 С).Способ осуществляется следующим образом.Забор селезенки производится в стерильных условиях. Во время транспортировки селезенка находится в гипотермических условиях (4-5 С). В операционной канюлируются селезеночная артерия и вена и отмывается гепаринизированным физиологическим раствором (5 тыс. ЕД на 0,5 мл раствора) при комнатной температуре. После полной отмывки сосудистой системы от элементов крови, на что требовалось до 1500 мл, перфузат, т. е. физиологический раствор, оттекающий из вены селезенки, собирался в стерильные флаконы.Заготовленный таким образом раствор не требует дополнительной стерилизации или автоклавирования и вводится капельно внутривенно больному, как обычные кровезаменители.Проведены исследования по выявлению наиболее оптимальных условий перфузии свиной селезенки для получения стимулирующего эффекта. Такими являются следующие параметры.1. Продолжительность перфузии свиной селезенки, которая определялась исследованиями,связанными с особенностями кровообращения денервированного органа, изменением ультраструктуры свиной селезенки, клиническим эффектом.В результате проведенных исследований было установлено следующее1 порция перфузата после 20-минутной инфузии - отмывка селезенки от следов крови (не используется для лечения)П-П/ порции перфузата, полученные при длительности перфузии 30-45 мин, обладали лечебным эффектомУ-УТ порции после 50-60 мин и последующие после 1 ч порции обладали слабым лечебнымэффектом. При этом следует отметить., что электронномикроскопическая картина селезенки после20 мин и до 45 мин показала сохраненную ультраструктурную картину клеток селезенки (фиг. 1),в то время как после 50 мин инфузии выявлены начальные проявления дистрофических изменений клеток селезенки (фиг. 2). Поэтому получение активного вещества ограничивается 45 мин.2. Объемная скорость перфузии селезенки составляла 55-60 мл/мин. Превыщение производительности перфузии приводило к отеку селезенки.Из селезенки одной свиньи получали 3-4 флакона по 500 мл перфузата для лечения 3-4 больных.Активность перфузата, выделенного из селезенки свиньи, оценивали по клиническим признакам больного, иммунологическим, гематологическим и биохимическим изменениям.Лечебный и иммуностимулирующий эффект показан на примерах.Пример 1. Б-ной Ж., 39 лет, находился в клинике с диагнозом эмпиема плевральной полости, слева. Состояние тяжелое. обусловленное собственным заболеванием. выраженной интоксикацией и снижением имтиунной защиты. Больной готовился к операции. Проводилось лечение антибактериальными препаратами (гентомицин,оксациллин и др.) одновременно поддерживалась терапией стероидными гормонами. Больной выделял больщое количество гнойно-слизистой мокроты. Температура поддерживалась на уровне 39 С и не снижалась, несмотря на проводимую антибактериальную и стимулирующую терапию.Анализ мокроты лейкоциты покрывают все поле зрения, много эозинофиллов.Показанием к инфузии перфузата свиной селезенки явилось отсутствие лечебного эффекта от проводимой терапии.Больному введен перфузат, 3 раза по 400 мл,ежедневно. Реакции на введение перфузата не было. На 2-й день после первого сеанса перфузии общее состояние больного улучщилось температура тела снизилась до 36,7 С, характер мокроты сменился с гнойного на слизистый, уменьщился кащель, появился аппетит. Улучщились показатели крови эр. - 4,8, Нв - 150, лимф. -10,1, л - 9,1,п - 6,6, с - 66, СОЭ - 24.Планируемая операция была отменена.Иммунный статус на 9 сутки после проведенной перфузии Т лимф. - 55, акт. - 31, абс. 2880, в лимф. - 16. акт. фагоц. - 56, ИФ - 3,0,АФП - 8880. Уровень ЦИК после введения перфузата возрос в 1,5 раза, что можно рассматривать как специфическую реакцию организма. Следует отметить, что иммуностимуляторов, кроме перфузата. больной не получал.Пример 2. Больной И., 15 лет, поступил в клинику с диагнозом бронхоэктазы нижней доли левого легкого. Проведена операция удаление нижней доли и язычкового сегмента левого легкого, осложнение - сепсис. Состояние больного после операции крайне тяжелое. Температура тела - 39 С.Из крови высеян патогенный стафилококк.Проводилась интенсивная противовоспалительная, антибактериальная дезинтоксикационная, десенсибилизирующая терапия. Крайне тяжелое состояние больного, отсутствие положительных результатов от проводимой интенсивной терапии послужило основанием для проведения инфузии перфузатом свиной селезенки. В связи с этим больному внутривенно был перелит перфузат капельно в количестве 400 мл, длительность перфузии составила 40 мин. Процедура проведена 3 раза, ежедневно. Реакции на введение перфузата не было.На следующий день больной почувствовал улучшение, температура тела нормализоваласьБольной выписан в удовлетворительном состоянии на 21 сутки. Наблюдения в течение 4 лет показали, что обострений заболевания не отмечено.Пример 3. Больной М., 21 г., поступил в клинику с диагнозом хронический абсцесс верхней доли правого легкого. Проведена операция удаление верхней доли правого легкого, осложнение - сепсис. Состояние больного тяжелое, кашель с мокротой, потливость, одышка, высокая температура до 39,5 С.Помимо интенсивной противовоспалительной. антибактериальной, детоксикационной, десенсибилизирующей терапии было проведено специфическое лечение перелита антистафилококковая плазма В)11) полож. Не 7358 190 мл. получал спленин по 1,0 в/м с 25.06 по 28.07.Состояние больного, несмотря на проведенное лечение, не улучшилось, нарастали симптомы интоксикации, температура тела оставалась в пределах 38,9 С, носовые кровотечения, сознание спутанное. Комплекс реанимационных мероприятий неэффективен. Больной скончался.Таким образом, 11 больных с гнойносептическими осложнениями были пролечены традиционньпи способом с применением антибактериальной терапии и иммуностимулирующими препаратами (спленин и тимали). Лечебный эффект не был получен. Во время курса лечения возникли повторные генерализации инфекции сПредложенный способ позволяет быстро купировать инфекционный процесс, скорее освободить организм от инфекционного начала, сократить сроки пребывания больного на больничной койке, достичь длительной ремиссии больного, о чем свидетельствуют наблюдения за больными в динамике.Высокий лечебный эффект перфузата обеспечивается за счет иммуносгимулируюшей функции селезенки свиньи, обусловленное сохраненной ультраструктурой селезенки при перфузии ее физиологическим раствором при 37 С, адекватностью скорости перфузии - 50-60 мл/мин, при длительности забора перфузата - 30-45 мин.Анализ лечебного эффекта проведенным способом у 288 больных показал следующее1. Выздоровление - у 241 больного (84 ), у больных быстро купировался гнойно-септический процесс, снижалась температура до нормы(13 ) такой эффект обусловлен невозможносгью удаления очага инфекции3. Лечебного эффекта не было у 8 больных(3 ), что связано с прогрессивным ухудшением основного заболевания.Предлагаемый способ по сравнению с прототипом содержит существенные признаки.Существенные отличительные признаки прототипаа) стимулятор получают сложным технологическим путем, используя измельчение органа,экстракцию уксусной кислотой, с добавлением хлористого цинка, обработки осадка ацетоном,фильтрованием и лиофилизацией. что может отрицательно влиять на активность препаратаб) из селезенки одной свиньи получают 15 мг активного вещества, достаточного для 2 инъекций одного больного, в то время как на курс лечения требуется 30-150 мгв) длительные сроки лечения (в среднем 2,02,5 мес) не всегда давали лечебный эффект.Существенные отличительные признаки предлагаемого способаа) стимулятор получают путем пропускания гепаринизированиого физиологического раствораб) из селезенки одной свиньи получают 3-4 флакона иммуностимулирующего раствора по 500 мл, достаточного для лечения 3-4 больных. Время, затраченное на получение такого количества перфузата - 30-45 минв) перфузат можно заготавливать подобно крови и другим кровезаменителям для использования его в массовом порядкег) при внутривенном вливании перфузата больным не требуется его стерилизация.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ что, с Целью повышения качества за счет сниже ния аллергенности Целевого продукта, перфузию селезенки осуществляют кровезаменителями со скоростью 55-60 мл/мин.Способ получения иммуностимулятора путем перфузии изолированной свиной селезенки в течение 45 мин при 37 С, отличающийся тем, Верстка Ка 3 патент, исполнитель Любимов И.Ю. Корректор Горпиненко Т.И. Ответственный за выпуск Фаизова Э.3.