Штамм вируса ринопневмонии лошадей av-0200, herpesviridae, varicellavirus, используемый для изготовления вакцинных и диагностических биопрепаратов

(51) 61 39/00 (2006.01) 12 7/00 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ изготовления диагностических и профилактических препаратов против ринопневмонии лошадей,обусловленного вирусом ринопневмонии. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении биологической массы вируса ринопневмонии лошадей с высокой биологической активностью,пригодной для изготовления инактивированной вакцины и антигена, обладающие высокой иммуногенной и диагностической эффективностью. Штамм вируса ринопневмонии лошадей 0200 КазНИВИ АЭ-01-10 депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ), используемый для изготовления вакцинных и диагностических биопрепаратов.(72) Абишов Абдикалык Абдижаппарович Хайруллаева Куралай Амангельдиевна(73) Товарищество с ограниченной ответственностью Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(56) Татаурова А.В., Юров К.П., Алексеенкова С.В. Нейропатогенные штаммы возбудителя ринопневмонии вирусного аборта лошадейВетеринария.-2006. 3, с.20-23(54) ШТАММ ВИРУСА РИНОПНЕВМОНИИ ЛОШАДЕЙ-0200 ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИННЫХ И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ БИОПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано при изготовлении диагностических и профилактических биопрепаратов против ринопневмонии лошадей,обусловленного вирусом ринопневмонии. Известен вируса штамма ринопневмонии лошадей КуД ВГЛ-1,используемый для изготовления диагностических препаратов Татаурова А. В., Юров К. П., Алексеенкова С. В. Нейропатогенные штаммы возбудителя ринопневмонии вирусного аборта лошадейВетеринария.-2006. 3, с.20-23. Недостатком указанного штамма вируса является то, что он обладает слабой иммуногенной и антигенной активностью. Задачей изобретения является получение штамма вируса ринопневмонии лошадей способного размножаться в перевиваемой культуре клеток ТТ с высокой биологической,цитопатической и антигенной активностью,пригодного для изготовления вакцинных и диагностических препаратов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением,выражается в получении биологической массы вируса ринопневмонии лошадей с высокой биологической активностью,пригодной для изготовления инактивированной вакцины и антигена, обладающие высокой иммуногенной и диагностической эффективностью. Штамм вируса ринопневмонии лошадей 0200 КазНИВИ АЭ-01-10 депонирован в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт(КазНИВИ), используемый для изготовления вакцинных и диагностических биопрепаратов. Штамм вируса ринопневмонии лошадей 0200 КазНИВИ АЭ- 01-10 Штамм получен из полевого изолята вируса ринопневмонии лошадей, выделенного от больного животного путем адаптации его к культуре клеток ТТ с перемежающим пассажем на первичной культуре клеток почек жеребят. Полученный штамм характеризуется следующими признаками. Назначение штамма штамм вируса ринопневмонии лошадей -0200 КазНИВИ АЭ 01-10 обладает патогенностью по отношению естественно восприимчивых животных и высокой урожайностью. Повышает эффективность профилактических и диагностических препаратов. Используют для изготовления лечебнопрофилактических и диагностических биопрепаратов. Состав среды и условия культивирования среда Игла-МЕМ, содержащий 10 сыворотки крови крупного рогатого скота. Морфологические свойства. Вируса ринопневмонии лошадей относится к семействуроду . Вирион содержит центральное ядро размером 60 нм. Светлую зону и пограничную мембрану диаметр вириона около 100 нм. Капсид обладает кубическим типом симметрии 2 и является двадцатигранником (икосаэдр) и составлен из 162 капсомеров, уложенных с симметрией 532. Вирионы могут быть соболочкой и без оболочки. В вирионах с оболочками идентифицировано 20 полипептидов с молюмю от 115 до 13000 Д. Безоболочечные вирвионы содержали 14 полипептидов, а сами оболочки 3 полипептида. Штамм вируса ринопневмонии лошадей 0200 КазНИВИ АЭ-01-10 обладает морфологическими признаками, свойственными для возбудителя ринопневмонии рода варицеллавирус семейства герпесвирусов. Культуральные свойства. Штамм вируса ринопневмонии лошадей -0200 КазНИВИ АЭ 01-10 репродуцируется и накапливается в перевиваемой линии клеток ТТ в титре не менее 105,0 ТЦЦ 50/см 3 (титр цитопатических доз,вызывающий 50 цитопатическое действие в монослое культур клеток), в первичной культуре клеток почек жеребят не менее 104,25 ТЦД 50/см 3. В указанных культурах клеток штамм вируса ринопневмонии лошадей -0200 КазНИВИ АЭ 01-10 размножается без предварительной адаптации но со слабым проявлением цитопатического эффекта в течении 3-4 пассажей и характеризующиеся округлением и разрушением клеток с последующей отторжением их от поверхности стекла сосудов. Антигенные свойства. Штамм вируса ринопневмонии -0200 КазНИВИ АЭ-01-10 в организме инфицированных животных (кролики,морские свинки, лошади) стимулирует образование антигемагглютинина,вируснейтрализующих,комплементсвязывающих и преципитирующих антител. Патогенные свойства. Штамм вируса ринопневмонии лошадей -0200 КазНИВИ АЭ 01-10 у инфицированных жеребят и кобыл 7-11 мес жеребости развивает воспаление верхних дыхательных путей и затем аборт, а у жеребят через 3-4 дн. - катаральную ринопневмонию. Иммуногенные свойства. Штамм вируса ринопневмонии лошадей -0200 КазНИВИ АЭ 01-10 репродуцированный в культуре клеток ТТ,инактивированный формальдегидом и концентрированный гелю гидрата окиси алюминия при подкожном введении вызывает напряженный иммунитет у лошадей против вируса ринопневмонии лошадей. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма вируса ринопневмонии лошадей -0200 КазНИВИ АЭ 01-10, при культивировании в культуре клеток ТТ,сохраняются в течение 10 пассажей (срок наблюдения). Сохраняемость. Штамм вируса ринопневмонии лошадей -0200 КазНИВИ АЭ-01-10 в виде культуральной суспензии не снижает биологической активности в течение 20 сут. при температуре 41 С, 12 мес. - при минус 20 С. Пример 1. Для приготовления инактивированной вакцины против ринопневмонии лошадей штамм вируса ринопневмонии лошадей -0200 КазНИВИ АЭ-01-10 репродуцируют в перевиваемой линии клеток ТТ, выращенный стационарным способом в среде Игла-МЕМ, содержащей 10 сыворотки крови крупного рогатого скота, затем инактивируют с помощью раствора формальдегида в течение 48 ч при температуре 37 С, концентрируют 4-5-кратно путем осаждения гелью гидроокиси алюминия. Полученная таким образом суспензия используется в качестве вакцины против ринопневмонии лошадей для иммунизации животных. Пример 2. Штаммом вируса ринопневмонии лошадей-0200 КазНИВИ АЭ-01-10 инфицируют культуру клеток ТТ суточного возраста в дозе 0,05 ТЦДкл. В период максимального развития цитопатического эффекта сосуды с пораженными клетками замораживают при температуре минус 20 С. Через 24 ч замораживания, вирусную суспензию размораживают при температуре 22 С и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость собирают в стерильную посуду и инактивируют формальдегидом при температуре 37 С в течение 48 часов, затем центрифугируют при 4000 об/мин в течение 20 мин. В дальнейшем вирусная суспензия используется для изготовления антигена. В готовый антиген добавляют стабилизаторы,тщательно перемешивают, расфасовывают с помощью шприца автомата в стерильные ампулы или флаконы по 1 мл, подвергают лиофилизации и получают целевой продукт. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм вируса ринопневмонии лошадей 0200, , , депонированный в Лаборатории по изучению генофонда микроорганизмов ТОО Казахский научноисследовательский ветеринарный институт, под номером КазНИВИ АЭ-01-10, используемый для изготовления вакцинных и диагностических биопрепаратов