Штамм “А/домашний гусь/Павлодар/2/05″ H5N1M-5-07/Д вируса гриппа птиц типа А, используемый для контроля иммуногенности вакцинных штаммов вируса и изготовления диагностических препаратов

(51) 61 35/76(2009.01) 61 39/145 (2009.01) 12 7/00 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ ГРИППА ПТИЦ ТИПА А, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ КОНТРОЛЯ ИММУНОГЕННОСТИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ ВИРУСА И ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ(57) Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для приготовления диагностических препаратов, а также для контроля иммуногенности вакцинных штаммов вируса гриппа птиц типа А подтипа 51. Штамм выделен в культуре клеток почки собаки,обладает более высокой патогенностью по сравнению с известными штаммами и обеспечивает приготовление диагностических препаратов для лабораторных тест-систем и контроля иммуногенности вакцинных штаммов вируса гриппа птиц типа А подтипа 51.(72) Мамадалиев Сейдигапар Мамадалиевич Кошеметов Жумагали Каукарбаевич Хайруллин Берик Мухитович Матвеева Валентина Михайловна Ажибаев Азамат Жасуланович Битов Нурзат Тнышбекович(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан 19980 Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и может быть использовано для приготовления диагностических препаратов, а также для контроля иммуногенности вакцинных штаммов вируса гриппа птиц (ВГП) типа А подтипа 51. Грипп птиц типа А - инфекционная болезнь,которая широко распространена во многих странах мира и наносит значительный экономический ущерб птицеводству, особенно за счет высокой смертности 1-8. В настоящие время на территории Республики Казахстан не имеется культурального эпизоотического штамма для проверки иммуногенности вакцинных штаммов вируса гриппа птиц, а также для приготовления диагностических препаратов. Известен эпизоотический штамм А/Крачка/ ВГП типа А. Данный штамм получен из 10-12 суточных развивающихся куриных эмбрионах и обладает патогенными свойствами для птиц любого возраста. Изобретение направлено на решение задачи выделения культурального эпизоотического штамма А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 М-5-07/Д вируса гриппа птиц типа А, обладающего патогенностью для любого возрастного состава птиц и облегчающего приготовление диагностических препаратов для лабораторных тест-систем. Штамм А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 М-5-07/Д ви гриппа птиц типа А выделен из 1012-суточных развивающихся куриных эмбрионах, из патологических материалов от павшего гуся из очага эпизоотии на территории Павлодарской области Республики Казахстан в августе-сентябре 2005 года. Затем вирус выделен в монослое перевиваемой линии культуры клеток почки собак(МДСК) после первого пассажного уровня. Выделение штамма в монослое культуры клеток достигнуто следующим способом 1-2-суточную перевиваемую культуру клеток почки собак МДСК,выращенную в пробирках, с полным монослоем,заражали осветлнной вируссодержащей аллантоисной жидкостью ВГП типа А, штамм А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 с биологической активностью 8,0 ЭИД 50 по 0,1 мл на один матрас с титром гемагглютинации 11024. Вирус с клетками выдерживали в течение 1 ч при 37 С. Затем в пробирки вносили поддерживающую питательную среду (ПСП), содержащую 1 глютамина, 5 нормальной сыворотки крупного рогатого скота и по 100 ед/мл антибиотиков. Пробирки выдерживали в термостате при температуре 37 С,ежедневно просматривая пробирки под микроскопом на наличие цитопатического действия вируса (ЦПД). ЦПД наступило через 48 ч при поражении монослоя клеток вирусом на 80-90. Полученную таким образом культуральную вируссодержащую суспензию идентифицировали с помощью РТГА и ИФА. Выделенный культуральный штамм в условиях ДГП НИИПББ НЦБ МОН РК активно используется для приготовления диагностических препаратов для постановки иммуноферментного анализа при гриппе птиц типа А. Вирулентные свойства культурального штамма А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 вируса гриппа птиц типа А достаточно высоки, что позволяет эффективно использовать его для проверки иммуногенности вакцинных штаммов. Штамм А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 вируса гриппа птиц типа А характеризуется следующими признаками. Кулътуральные признаки Штамм А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 вируса гриппа птиц типа А культивируется в монослое перевиваемой линии культуры клеток почки собак при заражающей дозе 0,04 ТЦД 50 на клетку, вызывая при этом деструктивные изменения монослоя в виде блестящих светопреломляющих клеток с круглой формой, с четкими очертаниями оболочек ядра и цитоплазмы. Вирус культивируется стационарным способом при температуре(370,5)С. Сбор вирусного материала проводится на 1-2 сутки культивирования вируса при поражении 80 площади монослоя клеток. При соблюдении данных условий культивирования активность вируса составляет 9,0 ТЦД 50/см. Патогенностъ Штамм патогенен для птиц всех возрастов,отличается высокой вирулентностью от имеющихся эпизоотических штаммов, которые находятся на хранении в ДГП НИИПББ НЦБ МОН РК, в лаборатории Музей микроорганизмов. При экспериментальном заражении птиц данным вирусом заболевание протекает в течение 3-6 суток с ярко выраженной клинической картиной,характерной для вируса гриппа птиц типа А. Антигенные свойства При исследовании антигенов, приготовленных на основе штамма А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 вируса гриппа птиц типа А, их титр составил 116 в РДП и 132000 вИФА. Выделенный штамм А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 М-5-07/Д ви гриппа птиц типа А предлагается использовать для контроля иммуногенности вакцины и разработки диагностических препаратов против вируса гриппа птиц. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Культуральный эпизоотический штамм А/домашний гусь/Павлодар/2/05 Н 51 М-5-07/Д вируса гриппа птиц типа А, депонированный в коллекции НИИ ПББ НЦБ МОН РК, используемый для контроля иммуногенности вакцинных штаммов вируса гриппа птиц типа А и изготовления диагностических препаратов для лабораторных тестсистем.